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イルミナシークエンサー用ポジティブコントロールライブラリー TailorMix Dual Indexed PhiX Control Library

掲載日情報:2020/01/22 現在Webページ番号:65458

TailorMixロゴ

全イルミナシークエンサーに使用可能な*1イルミナ社PhiX V3コントロール用ライブラリーに代わるライブラリーです。本製品の使用により、マルチプレックスシークエンシングにおけるPhiXのコンタミネーションの除去、より鮮明な生データの取得およびPhiXの測定値解析による品質管理(QC)が可能になります。

*1 ExAmp cluster generation(HiSeq X/HiSeq 3000/4000)でご使用の場合は、TailorMix Dual Indexed PhiX Control Libraries Nondenatured (TM-581)をご利用下さい。

シークエンシング

本製品を使用した場合、Illumina社のPhiXコントロールライブラリーを使用した場合に比べてコントロールリードのコンタミネーションが低減されます。

イルミナ社のPhiXコントロールライブラリーまたは本製品を20%または1%添加し、マルチプレックスシークエンシングを行った。シークエンシングリードをPhiX174ゲノムにマッピングし本製品と標準のイルミナ社製品PhiX Control Libraryを比較したところ、本製品を使用した場合、標準のPhiX Control Libraryに比べてコンタミネーションが低減されることが示された。

次世代シークエンス(NGS)における問題点と解決法について

通常、次世代シークエンス(NGS, Next Generation Sequence)を行う際、ランのクオリティーをモニターするためにコントロールライブラリー(Illumina 社標準品:PhiX V3 Control Library)のSpike-in を行います。一度に複数の試料をシークエンスするマルチプレックスシークエンスにおいて、目的試料のものとして得られたデータにPhiX 由来の配列がコンタミネーションすることが問題になります。
本製品を使用することでこのコンタミネーションを低減し、よりクリアなデータが得られるようになります。

ユーザーレビュー

  • 「今まではPhix 配列もデータとして大量に読まれてしまっていました。TailorMix はこの持ち込みを劇的に減らしてくれて、他にクロスオーバーコンタミネーションが生じていないか、見積もることができるようになりました。」
    C. F.様(San Francisco, CA)
  • バイオプシー由来のウイルスDNA をシークエンスしていますが、データにPhiX 配列がコンタミネーションするのが悩みのタネでした。でも、もう大丈夫。TailorMix はデータにコンタミネーションしないし、データ処理の手間を省いてくれて、得られたデータは正確なものだ、と安心できます
    Eric Sherman 様(University of Pennsylvania)

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    製品の種類

    商品コードをクリックすると、キットの価格をご覧いただけます。

    品名 TailorMix Dual Indexed PhiX Control Library
    Nondenatured Denatured
    商品コード TM-581 TM-503
    濃度 10 nM 20 pM
    溶媒 TE buffer (pH8.0) HT1 buffer
    フォーマット Double stranded Single stranded
    試料の種類 非変性イルミナアダプターライブラリー 一本鎖イルミナアダプター結合ライブラリー
    Dual indexed barcodes
    Insert Size 380 bp
    対応機種 MiSeq
    MiniSeq
    NextSeq
    HiSeq 2000/2500
    HiSeq X ×
    HiSeq 3000/4000 ×
    Nova Seq ×

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    適用

    • Single PCR amplicon sequencing
    • Viral genome sequencing
    • Low diversity libraries
    • Highly multiplexed pools
    • Single sample runs
    • Unindexed libraries

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    特長

    • 全イルミナシステムにおいて、PhiX V3コントロール用ライブラリー(Illumina)の代わりに使用できます*2
    • 塩基多様性が低い試料に添加することにより個々のランのクオリティーが向上します。
    • イルミナの全ソフトウェアによるマルチプレックス解析に適応し、個別解析も可能な2種類のバーコード配列が含まれています。

    *2 ExAmp cluster generation(HiSeq X/HiSeq 3000/4000)でご使用の場合は、Nondenatured(#TM-581)をご利用下さい。


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    サンプルシートのセットアップ

    本製品は、全てのイルミナソフトウエアによってマルチプレックス解析が可能な下記の2種類のバーコード配列を含んだコントロール用ライブラリーです。
    通常のシークエンスにおいては解析データに変更を加える必要はありませんが、インデックスバーコードとして下記のシーケンスを解析データファイルに追加することで、Indexed PhiX libraryをさらに個別に解析することも可能です。また必要に応じて、インデックスの読み取りに適合するように配列の長さの調整もできます。

       i7 Index 1 barcode i5 Index 2 barcode
    システム種別 全イルミナシステム
    • MiSeq
    • HiSeq 2000/2500
    • MiniSeq
    • NextSeq
    8 bp TCGAATGA GACATGCG CGCATGTC
    6 bp TCGAAT GACATG CGCATG

    シングルリードシークエンシングにおいては、i7 Index 1のみを使用します。

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    操作方法概略

    1:TailorMix Dual Indexed PhiX Control Libraryおよびシークエンシングする試料を以下の方法で変性および希釈する。

    TailorMix Dual Indexed PhiX Control Library
    Nondenatured(#TM-581) Denatured(#TM-503)
    Option 1 Option 2
    イルミナ社の調製方法に従って、TailorMix Dual Indexed PhiX Control Libraryとシークエンシングする試料を変性および希釈し、適当な比率で混合する。 未変性のままのTailorMix Dual Indexed PhiX Control Libraryを適当な比率で未変性試料に添加し、イルミナ社の調製方法に従って、シークエンシングする試料を変性および希釈する。 イルミナ社の調製方法に従って、シークエンシングするライブラリーを変性および希釈する。

    2:変性Indexed PhiX Control Library*3を以下の添加量で試料に混合する。

    • TruSeqおよびNexteraライブラリー:1%
    • miRNAおよびsmall RNAライブラリー:5~10%
    • 塩基多様性が低いPCR産物ライブラリー:15~25%
    • HiSeq専用コントロールレーン:ご使用の機器の操作方法マニュアルに従って下さい。

    3:イルミナ社の各使用機器の操作方法に従ってシーケンシングまたはクラスタリング装置に試料をロードする。

    *3 ポジティブコントロールとして、または塩基多様性の向上のために使用。


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    Frontiers_SQM_Danny Lee CEO

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    アダプターライゲーション済みのPhixコントロールライブラリー。Illumina社の各シークエンサーに対応している。各種次世代シークエンスのコントロールとして利用できる。対応機種:MiSeq, MiniSeq, NextSeq, HiSeq 2000/2500/3000/4000, HiSeq X, Nova Seq。
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