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RNA試料からqPCRまでの時間を大幅に短縮する定量PCR用マスターミックス Volcano3G RT-PCR 2× Master Mix（RT-PCR用マスターミックス）

掲載日情報：2020/02/12 現在Webページ番号：65179

マイポルス バイオテック /
Oy Medix Biochemica Ab
[メーカー略称：MYP]

リアルタイムRT-PCRによる遺伝子発現量の解析に！

逆転写反応とPCR反応を同時に行える、One-Step RT-PCRならぬZero-Step RT-PCR用マスターミックスです。RNA試料からqPCRまで一気に行えるため、操作時間を短縮でき、結果を迅速に得ることができます。
※本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

定量PCRマスターミックス

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Volcano3Gによるゼロステップ リアルタイムPCR

Volcano DNA polymeraseは、逆転写酵素活性とDNAポリメラーゼ活性を併せ持つ改変型Taqポリメラーゼです。

  • ひとつの酵素で、mRNAをテンプレートとしてPCRまで行えます。
  • 従来のone-step PCRポリメラーゼのように、個別に逆転写反応のステップを設ける必要はありません。
  • 熱安定性が非常に高く、高温で逆転写反応が行えるため複雑な二次構造のRNAに対しても有用です。

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特長

  • 定量PCRに必要な試薬（改変型ホットスタートDNAポリメラーゼ、dNTP、二本鎖DNA（dsDNA）結合蛍光色素、バッファー）があらかじめ含まれたマスターミックスです。
  • Volcano DNAポリメラーゼに加え、ホットスタートタイプのTaq DNAポリメラーゼが含まれており、 DNAおよびRNAに対して高い反応性を示します。
  • 60～300 bpのDNA増幅に最適化されています。
  • ☞ GreenDyeは、リアルタイムPCR実験にお勧めのPCR用蛍光色素です。SYBR Greenと比較してPCRを阻害しにくく、SYBR/FAMフィルターチャンネルで検出可能です。
  • TaqManプローブ、および蛍光色素☞ GreenDyeでの検出に適したタイプがあります。
定量PCRマスターミックス 定量PCRマスターミックス 定量PCRマスターミックス

製品外観

※500 bp以上のRNAの逆転写には適しません。

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適用

  • DNAまたはRNAの迅速な検出／同定
  • 逆転写定量PCR (RT-qPCR)
  • DNAまたはRNAの定量PCR
  • マルチプレックスPCR
  • リアルタイムPCR
  • Probe-based PCR
  • 病原体検出
  • プライマー伸長
  • エンドポイントPCR
  • スクリーニング / ハイスループットPCR
  • SELEX


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製品の種類

商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

検出方法 Volcano3G RT-PCR 2×Master Mix
含まれる蛍光色素の種類 包装 商品コード
☞ GreenDye ROX
low high
☞ GreenDyeでの検出 ● － － 100 tests 6301S
500 tests 6301M
● ● － 100 tests 6401LoS
500 tests 6401LoM
● － ● 100 tests 6401HiS
500 tests 6401HiM
TaqManプローブでの検出 － － － 100 tests 6101S
500 tests 6101M
－ ● － 100 tests 6201LoS
500 tests 6201LoM
－ － ● 100 tests 6201HiS
500 tests 6201HiM


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使用例（HPRT1遺伝子の増幅）

使用例（HPRT1遺伝子の増幅）

Volcano3G RT-PCR 2x Master Mix with GreenDye(#6301S) を用いてmRNA（500,000～500 total copies / reactionの希釈系列）から標準的なRT-PCRを行った。500 copiesという微量の試料の検出も可能であることがわかる。

  • 青：HPRT1遺伝子のmRNA（500,000～500 total copies / reactionの希釈系列）
  • 緑：NTC (No template control、ネガティブコントロール)

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メーカー推奨のマスターミックス調製方法

マスターミックス調製方法


＊ 推奨テンプレート濃度：0.004 ng/μl～0.1μg/μl（トータルRNAまたはゲノムDNA）

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PCRのプロトコル例

定量PCR用逆転写酵素／DNAポリメラーゼ活性を併せ持つ改変型ポリメラーゼのアプリケーション例





2段階および3段階のPCRプロトコルを使用できます。
＊ Volcano3G DNAポリメラーゼは、サイクルPCR伸長ステップ中のDNA増幅と同時に逆転写も行われるため、RNAテンプレートから直接「ゼロステップ」RT-PCRを可能にします（等温逆転写ステップなし）。したがって、逆転写ステップはオプションであり、場合によっては省略できます。
＊＊ 新しいRT-PCRは、各プライマーペアに最適な逆転写／アニーリング／伸長温度を見つけるために、温度勾配を実行することにより理想的に確立されます。プライマーのアニーリング温度は、その核酸配列と反応バッファーの組成（塩とpH）に強く影響されます。一般に、Volcano3G DNAポリメラーゼは完全に熱安定性があり、55～95℃で最も活性があります。
※PCR条件は、使用するサーマルサイクラーや鋳型、増幅産物の大きさによって異なるため、最適化が必要です。


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関連製品 蛍光色素 GreenDye

  • 1×の濃度での使用が推奨されます。
  • 通常のSYBR/FAMフィルターチャンネルで検出可能です。
  • 熱安定性が高く、50サイクル以上でも検出を行うことができます。
  • 融解曲線分析やHigh Resolution Melting (HRM) 解析にも適しています。

融解曲線分析

本製品（GreenDye）が最もシャープなmelting peakを示している。


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価格

蛍光色素 GreenDyeでの検出に適したタイプ（GreenDyeを含む）

[在庫・価格 ：2024年04月26日 09時35分現在]

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Volcano3G RT-PCR 2x Master Mix (+GreenDye)
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逆転写反応とPCRが同時に行えるリアルタイムPCR用マスターミックス。蛍光色素 GreenDyeでの検出に適したタイプ（GreenDyeを含む）。
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掲載カタログ ニュース2022年12月1日号 p.18
ニュース2019年12月1日号 p.25

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Volcano3G RT-PCR 2x Master Mix (+GreenDye)

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TaqManプローブでの検出に適したタイプ（GreenDyeを含まない）

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Volcano3G RT-PCR 2× Master Mix
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逆転写反応とPCRが同時に行えるリアルタイムPCR用マスターミックス。加水分解プローブでの検出に適したタイプ（GreenDyeを含まない）。
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[在庫・価格 ：2024年04月26日 09時35分現在]

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GreenDye 20× (200reactions)
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HiDi DNA polymerase を使用したリアルタイムPCR実験にお勧めのPCR用蛍光色素。通常のSYBR/FAMフィルターチャンネルで検出可能。
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保存条件 -20℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年9月15日号 p.34
ニュース2021年6月15日号 p.40

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保存条件 -20℃,暗所保存 法規備考
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お問い合わせ先

（テクニカルサポート 試薬担当）

reagent@funakoshi.co.jp

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表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。

PCR・シークエンシング