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3'末端の一塩基ミスマッチを検出するDNA ポリメラーゼ HiDi Taq / HiDi DNA Polymerase

掲載日情報:2020/12/25 現在Webページ番号:64527

SNP解析やメチル化特異的PCRに!

プライマーの3’末端のミスマッチを感知する改変型Taq DNAポリメラーゼです。
HiDi(high single nucleotide discrimination) DNA ポリメラーゼは,TaqのKlenow fragmentをもとに遺伝子改変した改変型DNAポリメラーゼです。従来のTaqなどのポリメラーゼではプライマーとターゲットシークエンスの間に数塩基の違いがあっても増幅されるのに対して,HiDi DNA polymeraseは,3'末端における1塩基の違いを有するプライマーを認識し,完全一致しない場合は増幅効率が著しく低下します。SNP解析,および特異性の高いPCRやq-PCRを行うことが可能です。

特長

  • 約60~200 bpの増幅に最適化されています。
    >500 bpの場合は,マグネシウム (+0.5~1.5 mM)の添加を必要とする可能性があります。
  • ヌクレアーゼ活性を有さないHiDiと,5'→3'エキソヌクレアーゼ活性をもつHiDi Taqがあります。
  • リアルタイムPCRでもご使用いただけます。SYBR Greenなどの蛍光色素で検出する際にはHiDi を,Hydrolysis Probesでの検出にはHiDi Taqの使用を推奨します。
  • マスターミックス仕様で簡便に調製できるHiDi 2× PCR Master MixとHiDi Taq 2× PCR Master Mixもあります。

製品ラインナップ

商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。

品名 特長 用途 製品形状 商品コード
HiDi DNA polymerase 5'→3'ヌクレアーゼ活性なし。

蛍光色素を含みません
(下記GreenDyeがお勧めです)。
・エンドポイントPCR
・蛍光色素で検出する定量PCR

加水分解プローブでの
検出には使用できません。
キット内容:
HiDi DNA polymerase,
HiDi reaction buffer
9001
HiDi 2x PCR Master Mix Master Mixに含まれるもの:
・HiDi DNA polymerase
・HiDi buffer
(including ultrapure dNTPs)
9101
HiDi Taq DNA polymerase 5'→3'ヌクレアーゼ活性あり。 ・加水分解プローブで
検出する定量PCR
キット内容:
HiDi Taq DNA polymerase,
HiDi reaction buffer
9201
HiDi Taq 2x PCR Master Mix Master Mixに含まれるもの:
・HiDi Taq DNA polymerase
・HiDi buffer
(including ultrapure dNTPs)
4200


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適用

  • SNP-detection by allele-specific amplification (ASA) / Allele-specific PCR
  • Methylation specific PCR (MSP)
  • HLA genotyping
  • Multiplex PCR

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アプリケーション例

HiDi DNA ポリメラーゼ によるSNP(rs7292100) の解析例

HiDi DNA ポリメラーゼ によるSNP(rs7292100) の解析例

図A:SNP(rs72921001)は,ヒト11番染色体のポジション6868417番のC(WT:野生型)がA(SNP:変異型)に置換された変異型である。
図B:アレル特異的なプライマーデザイン。C-アレル特異的プライマーはWT(野生型)を検出し,A-アレル特異的プライマーはSNP(変異型)を検出する。

図C, D:1 ng/μl HeLa gDNAをテンプレートに,Bで作製した各アレル特異的プライマーとHiDi DNA ポリメラーゼを用いてアレル特異的PCRを実施した。その結果C-アレル特異的プライマーのみ増幅が見られ,A-アレル特異的プライマーと区別されたので,増幅は50サイクルで終了した。

図E:得られたPCR産物を2.5%アガローズゲル上で解析した。C-アレル特異的プライマーで誘導したアンプリコン(右側 109 bp エチジウムブロミド染色によるバンド)のみ検出された。この結果から,HeLa細胞はC-アレルのホモ接合体のgDNAを持つことが分かる。

図F:リファレンスヒトゲノム試料を用いたSNP(rs72921001)の遺伝子型解析の例。C-アレルホモ接合体(WT)とA-アレルホモ接合体(SNP)由来の試料は,それぞれC-アレル特異的およびA-アレル特異的プライマー由来のアンプリコンのみ観察されるが,ヘテロ接合体由来の試料では,両方のプライマーにより増幅されたPCR産物が観察された。

HiDi DNA ポリメラーゼの増幅効率

HiDi DNA ポリメラーゼの増幅効率

本試薬を用いて野生型DNAと変異型DNAの割合を変えて混合したDNA溶液を増幅した。
用いたプライマーは,3‘末端の最後の塩基のみが変異型の配列と一致するように設計された。緑の増幅曲線(1:99=変異型:野生型)では,100%野生型DNAのみの場合(赤の増幅曲線)よりも2サイクル早く増幅されていることから,1%の変異でも検出が可能であることがわかる。


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HiDi Taq / HiDi DNA polymeraseのFAQ

Q-1. 増幅におけるエラーの頻度はどの程度ですか?

A-1. 野生型のTaq DNA polymeraseと同程度です。



Q-2. テンプレートの推奨量はどのくらいですか?

A-2. 1反応あたり1~100 ngを推奨いたします。



Q-3. 小さな増幅断片が確認されましたが,コンタミでしょうか?

A-3. コンタミではありません。本製品にはホットスタート技術として50 nt程度のDNA-polymerase binding aptamerが使用されており,高感度の検出系ではバンドとして確認されてしまうことがあります。




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HiDi DNA Polymeraseの価格

HiDi DNA polymerase:End-Point PCR, 蛍光色素 GreenDyeで検出する定量PCR

[在庫・価格 :2021年09月28日 23時09分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
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納期 文献数
HiDi DNA polymerase
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 16
説明文
プライマー/テンプレート間の3'末端の一塩基ミスマッチを検出する酵素、SNP解析に最適。用途:エンドポイントPCR, 蛍光色素を用いた定量PCR。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2021年6月15日号 p.40
ニュース2020年5月15日号 p.36

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HiDi DNA polymerase
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 16
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プライマー/テンプレート間の3'末端の一塩基ミスマッチを検出する酵素、SNP解析に最適。用途:エンドポイントPCR, 蛍光色素を用いた定量PCR。
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HiDi DNA polymerase

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説明文 プライマー/テンプレート間の3'末端の一塩基ミスマッチを検出する酵素、SNP解析に最適。用途:エンドポイントPCR, 蛍光色素を用いた定量PCR。
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HiDi DNA polymerase

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HiDi 2x PCR Master Mix: Master Mix仕様で簡便な調製が可能

蛍光色素は含みません。下記GreenDyeがお勧めです。
Hydrolysis Probesでの検出には使用できません。

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HiDi 2x PCR Master Mix
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HiDi DNA polymeraseのマスターミックスタイプ。dNTPs等PCRに必要な試薬が予め調製済み。用途:エンドポイントPCR, 蛍光色素を用いた定量PCR。
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HiDi 2x PCR Master Mix
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HiDi DNA polymeraseのマスターミックスタイプ。dNTPs等PCRに必要な試薬が予め調製済み。用途:エンドポイントPCR, 蛍光色素を用いた定量PCR。
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HiDi 2x PCR Master Mix

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説明文 HiDi DNA polymeraseのマスターミックスタイプ。dNTPs等PCRに必要な試薬が予め調製済み。用途:エンドポイントPCR, 蛍光色素を用いた定量PCR。
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HiDi 2x PCR Master Mix

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説明文 HiDi DNA polymeraseのマスターミックスタイプ。dNTPs等PCRに必要な試薬が予め調製済み。用途:エンドポイントPCR, 蛍光色素を用いた定量PCR。
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HiDi Taq DNA polymeraseの価格

HiDi Taq DNA polymerase:Hydrolysis Probesで検出する定量PCR

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HiDi Taq DNA polymerase
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プライマー/テンプレート間の3'末端の一塩基ミスマッチを検出する酵素、SNP解析に最適。用途:加水分解プローブを用いた定量PCR。
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HiDi Taq DNA polymerase
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プライマー/テンプレート間の3'末端の一塩基ミスマッチを検出する酵素、SNP解析に最適。用途:加水分解プローブを用いた定量PCR。
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HiDi Taq DNA polymerase

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HiDi Taq DNA polymerase

文献数:16

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HiDi Taq 2x PCR Master Mix: Master Mix仕様で簡便な調製が可能

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HiDi Taq 2× PCR Master Mix
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HiDi Taq DNA polymeraseのマスターミックスタイプ。dNTPs等PCRに必要な試薬が予め調製済み。用途:加水分解プローブを用いたリアルタイムPCR。
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HiDi Taq 2× PCR Master Mix
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HiDi Taq DNA polymeraseのマスターミックスタイプ。dNTPs等PCRに必要な試薬が予め調製済み。用途:加水分解プローブを用いたリアルタイムPCR。
法規制等
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HiDi Taq 2× PCR Master Mix

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関連製品:GreenDye 20x

HiDi DNA polymerase を使用したリアルタイムPCR実験にお勧めのPCR用蛍光色素です。

  • 1x の濃度での使用が推奨されます。
  • 通常のSYBR/FAMフィルターチャンネルで検出可能です。
  • 熱安定性が高く,50サイクル以上でも検出を行うことができます。
  • 融解曲線分析やHigh Resolution Melting (HRM) 解析にも適しています。
GreenDyeを用いた融解曲線分析

融解曲線分析
本製品(GreenDye)が最もシャープなmelting peakを示している。

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GreenDye 20× (200reactions)
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HiDi DNA polymerase を使用したリアルタイムPCR実験にお勧めのPCR用蛍光色素。通常のSYBR/FAMフィルターチャンネルで検出可能。
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GreenDye 20× (800reactions)
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説明文
HiDi DNA polymerase を使用したリアルタイムPCR実験にお勧めのPCR用蛍光色素。通常のSYBR/FAMフィルターチャンネルで検出可能。
法規制等
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GreenDye 20× (200reactions)

文献数:0

説明文 HiDi DNA polymerase を使用したリアルタイムPCR実験にお勧めのPCR用蛍光色素。通常のSYBR/FAMフィルターチャンネルで検出可能。
法規制等
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GreenDye 20× (800reactions)

文献数:0

説明文 HiDi DNA polymerase を使用したリアルタイムPCR実験にお勧めのPCR用蛍光色素。通常のSYBR/FAMフィルターチャンネルで検出可能。
法規制等
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。