hTERT-immortalized Primary Cell hTERT不死化細胞株

hTERT不死化細胞とは、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（hTERT; Human Telomerase Reverse Transcriptase）遺伝子を初代培養細胞に導入して作製した、正常2倍体の染色体を持つ細胞株です。初代培養細胞の性質に近い状態を保持したまま、安定的に継代が可能です。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

テロメア（Telomere）は、染色体末端に存在する繰り返し配列を持ったDNAで、染色体末端を保護する役目を持っています。細胞分裂のたびにテロメアは末端から50～200 bpずつ失われ、染色体は短縮し、複製老化が起こります。テロメラーゼ（Telomerase）は、RNA構成要素（hTERC）と逆転写酵素活性を持つ触媒成分（hTERT）から成る酵素で、細胞分裂の際に失われたテロメアを伸長させます。テロメラーゼが活性化している細胞では、染色体の長さは一定に保たれ、老化することなく分裂し続けることができます。
テロメラーゼのRNA成分は普遍的に発現していますが、触媒活性成分であるhTERTの発現は胚発生の初期段階に限定されており、成体では幹細胞の他、血液細胞の一部（白血球など）、生殖細胞、皮膚や消化管の一部の細胞に見られます。ほとんどの正常体細胞でテロメラーゼ活性は見られず、in vivoでも複製老化の影響を受けやすいため、in vitroでの維持は困難です。
hTERT遺伝子を初代培養細胞にトランスフェクションで導入すると、染色体のテロメア末端が伸長・維持されます。多くの場合、hTERT単独での発現でも細胞の複製老化は抑えられ、分裂限界を超えて不死化します。
しかし、ある種の初代培養細胞ではhTERTのほか、ウイルス性遺伝子（SV40 large T antigen、HPV-16 E6/E7）または非ウイルス性（Cdk-4やBmi-1）のがんタンパク質などが不死化に必要です（細胞の不死化関連ツール参照）。

hTERT不死化細胞は、初代細胞のin vitroでの本質とがん細胞の継続培養能力を兼ね備え、その利点性を持ちながら双方の限界を回避しています。

腎近位尿細管上皮hTERT不死化細胞株RPTEC/TERT1（ATCC^® CRL-4031^TM）の検証例です。

正常な核型（2倍体）の検証
左図：RPTEC/TERT1不死化細胞株を凍結保存から回復後、ウェルに播種し、160日間無血清培地で培養しても正常遺伝子型を維持していた。
一方、RPTEC初代培養細胞は20回程度の分裂回数で増殖が止まる。
右図：hTERTを導入したRPTEC/TERT1不死化細胞株は、60回以上分裂を繰り返しているにも関わらず、核型は2倍体を維持している。

発現タンパク質の検証
RPTEC/TERT1不死化細胞株が、RPTEC初代培養細胞と同様の膜輸送タンパク質（マーカー）の発現していることを確認した。

細胞増殖と上皮形態の検証
RPTEC/TERT1不死化細胞株は初代培地中で、増殖と上皮形態についてRPTEC初代培養細胞と同様だが、より均質な細胞集団を示した。
RPTEC/TERT1不死化細胞株は、E-cadherinとCD13/Aminopeptidase Nの両方を均一に発現しているが、一方RPTEC初代培養細胞ではこれらのマーカーの発現に大きなばらつきがあった。

上皮バリア形成による検証
水分と細胞膜を透過して捕獲された溶質により、ドーム状構造物が形成される（矢印）。そのためこれらの構造物の発生が上皮バリアー形成の良い目印になる。同時に、上皮バリアー形成は経上皮電気抵抗（TEER）を測定することによっても示される。RPTEC/TERT1不死化細胞株はドーム状構造物の観察と測定可能なTEER値の両方を示すが、RPTEC初代培養細胞ではそのいずれも示さない。

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