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SAM転写活性化システムに適した化学合成trans-activating CRISPR RNA Edit-R SAM tracrRNA

掲載日情報:2019/10/29 現在Webページ番号:64900

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Edit-R SAM tracrRNAは,CRISPRa SAMシステム (Konermann, 2015)用に作製された,化学合成後にHPLC精製した一本鎖RNA分子です。
SAM (synergistic activation mediator)転写活性化システムの因子を安定発現する細胞において,本製品と化学合成crRNAを共にトランスフェクトすることで,迅速かつ簡単に標的遺伝子の転写を活性化します。
最適化されたS. pyogenes tracrRNAシークエンス (Jinek, 2012)に基づいた,SAMシステムのMS2-p65-HSF1部分に結合するMS2アプタマー配列を含んでいます。
ターゲット遺伝子の転写を活性化させる「Edit-R CRISPR Activation(CRISPRa)Reagent」の詳細は,こちらをご覧下さい。

本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
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CRISPRa SAMの活性化原理

CRISPRa SAM workflow
  • Edit-R SAM tracrRNAは,MCP-p65-HSF1と結合するMS2アプタマー配列をstem loop 2上に含んでいます。
  • 触媒的に非活性化されているCas9-VP64と標的遺伝子に特異的なEdit-R CRISPRa crRNAが結合すると,転写が活性化されます。
  • このSAMシステムの利用により,確実な転写活性化を得ることができます。

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カタログ紹介

RNAiカタログ RNAiカタログ
ゲノム編集試薬カタログ
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Edit-R HDR plasmid donor kit
for fluorescent reporter knock-in
Technical Manual

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特長

  • SAM活性化システムのNLS-dCas9-VP64とMS2-p65-HSF1の両方を安定発現している細胞に使用できます。
  • 化学合成SAM tracrRNAと標的遺伝子にデザインされたCRISPRa crRNAを共に使用します。

■crRNAとtracrRNAの添加量

crRNA
(nmol)
tracrRNA
(nmol)
96-well plate
100μl reaction volume
24-well plate
500μl reaction volume
12-well plate
1,000μl reaction volume
6-well plate
2,500μl reaction volume
228001608032
552,00040020080
10104,000800400160
20208,0001,600800320

この表は,様々なプレート/ウェルにおいて推奨される濃度crRNA:tracrRNA(25 nM:25 nM)で,脂質トランスフェクション法で細胞へ導入する場合の参考数値です。

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製品ラインナップ

品名をクリックするとHorizon Discovery社のWebサイト,商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。

Horizon Discovery社のご注文Webサイト⇒ 「CRISPRa SAM tracrRNA」

品名 Edit-R SAM tracrRNA量 商品コード
Edit-R SAM tracrRNA 5 nmol U-102005-05
20 nmol U-102005-20
50 nmol U-102005-50


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標的遺伝子活性化の使用例

■SAM発現細胞における標的遺伝子の転写活性化

U2OS and A375 cell使用例

dCas9-VP64とMS2-p65-HSF1 (dCas9-SAM) を安定的に発現しているU2OS細胞とA375細胞を10,000 cells/wellでプレーティングし,化学合成crRNA:tracrRNA (25 nM)をDharmaFECT 4 (U2OS細胞)または DharmaFECT 1 (A375細胞) Transfection Reagentでトランスフェクトした。crRNAは各々の遺伝子を標的とした4つのプレデザインcrRNAを総濃度25 nMでプールしたものを用いた。細胞をトランスフェクション72時間後に回収し,各々の遺伝子発現量をRT-qPCRで測定した。各々の遺伝子の相対的発現量をハウスキーピング遺伝子PPIBを用いてΔΔCq法で算出し,非標的コントロールを用いてノーマライズした。

■individualおよびpooled crRNAにおける標的遺伝子の転写活性化

dCas9-VP64とMS2-p65-HSF1 (dCas9-SAM) を安定的に発現しているU2OS細胞またはA375細胞を10,000 cells/wellでプレーティングし,化学合成crRNA:tracrRNA (25 nM)をDharmaFECT 4 (U2OS細胞)または DharmaFECT 1 (A375細胞) Transfection Reagentでトランスフェクトした。crRNAは各々の遺伝子を標的とした4つのプレデザインcrRNAをそれぞれ個別で25 nM(crRNA 1~4)またはプールして総濃度25 nM(Pool)で用いた。細胞をトランスフェクション72時間後に回収し,遺伝子発現量をRT-qPCRで測定した。各々の遺伝子の相対的発現量をハウスキーピング遺伝子PPIBを用いてΔΔCq法で算出し,非標的コントロールを用いてノーマライズした。

U2OS-dCas9-SAM cell lines使用例

細胞:U2OS-dCas9-SAM細胞系
トランスフェクト試薬:DharmaFECT 4 Transfection Reagent

A375-dCas9-SAM cell lines使用例

細胞:A375-dCas9-SAM細胞系
トランスフェクト試薬:DharmaFECT 4 Transfection Reagent

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価格

[在庫・価格 :2021年09月18日 00時14分現在]

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