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Dharmacon CRISPRmod CRISPRa MS2 tracrRNA
SAM転写活性化システムに適した化学合成trans-activating CRISPR RNA Dharmacon CRISPRmod CRISPRa MS2 tracrRNA
掲載日情報：2019/10/29 現在Webページ番号：64900
Horizon Discovery社のWebサイトでの本記事掲載製品の検索方法はこちら！
CRISPRa SAM tracrRNA（MS2 tracrRNA）は、CRISPRa SAMシステム (Konermann, 2015)用に作製された、化学合成後にHPLC精製した一本鎖RNA分子です。
SAM (synergistic activation mediator)転写活性化システムの因子を安定発現する細胞において、本製品と化学合成crRNAを共にトランスフェクションすることで、迅速かつ簡単に標的遺伝子の転写を活性化します。
最適化されたS. pyogenes tracrRNAシークエンス (Jinek, 2012)に基づいた、SAMシステムのMS2-p65-HSF1部分に結合するMS2アプタマー配列を含んでいます。
※ ターゲット遺伝子の転写を活性化させる「CRISPR Activation（CRISPRa）Reagent」の詳細は、こちらをご覧下さい。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
※ Dharmacon製品（メーカー略称：DHA）につきまして、2023年4月1日より製品ご注文時にHandling Fee（手数料）を本体価格とは別にご請求させていただきます。詳細は「Handling Feeについてのご案内」をご確認下さい。
※ Horizon｜Dharmacon製品をご注文いただくには、事前にユーザー登録が必要です。ご注文方法の詳細はこちらをご覧下さい。
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CRISPRa SAMの活性化原理
- CRISPRa SAM tracrRNA（MS2 tracrRNA）は、MCP-p65-HSF1と結合するMS2アプタマー配列をstem loop 2上に含んでいます。
- 触媒的に非活性化されているCas9-VP64と標的遺伝子に特異的なCRISPRa crRNAが結合すると、転写が活性化されます。
- このSAMシステムの利用により、確実な転写活性化を得ることができます。
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カタログ紹介
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| ゲノム編集試薬カタログ ⇒PDFのダウンロードはこちら。 |
Edit-R HDR plasmid donor kit for fluorescent reporter knock-in Technical Manual ⇒PDFのダウンロードはこちら。 |
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特長
- SAM活性化システムのNLS-dCas9-VP64とMS2-p65-HSF1の両方を安定発現している細胞に使用できます。
- 化学合成SAM tracrRNAと標的遺伝子にデザインされたCRISPRa crRNAを共に使用します。
■crRNAとtracrRNAの添加量
| crRNA (nmol) |
tracrRNA (nmol) |
96-well plate 100μl reaction volume |
24-well plate 500μl reaction volume |
12-well plate 1,000μl reaction volume |
6-well plate 2,500μl reaction volume |
|---|---|---|---|---|---|
| 2 | 2 | 800 | 160 | 80 | 32 |
| 5 | 5 | 2,000 | 400 | 200 | 80 |
| 10 | 10 | 4,000 | 800 | 400 | 160 |
| 20 | 20 | 8,000 | 1,600 | 800 | 320 |
※ この表は、様々なプレート／ウェルにおいて推奨される濃度crRNA:tracrRNA（25 nM:25 nM）で、脂質トランスフェクション法で細胞へ導入する場合の参考数値です。
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製品ラインナップ
品名をクリックするとHorizon Discovery社のWebサイト、商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。
Horizon Discovery社のご注文Webサイト⇒ 「CRISPRa SAM tracrRNA」
| 品名 | 包装 | 商品コード |
|---|---|---|
| CRISPRa SAM tracrRNA （MS2 tracrRNA） |
5 nmol | U-102005-05 |
| 20 nmol | U-102005-20 | |
| 50 nmol | U-102005-50 |
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標的遺伝子活性化の使用例
■SAM発現細胞における標的遺伝子の転写活性化
dCas9-VP64とMS2-p65-HSF1 (dCas9-SAM) を安定的に発現しているU2OS細胞とA375細胞を10,000 cells/wellでプレーティングし、化学合成crRNA:tracrRNA (25 nM)をDharmaFECT 4 (U2OS細胞)または DharmaFECT 1 (A375細胞) Transfection Reagentでトランスフェクションした。crRNAは各々の遺伝子を標的とした4つのプレデザインcrRNAを総濃度25 nMでプールしたものを用いた。細胞をトランスフェクション72時間後に回収し、各々の遺伝子発現量をRT-qPCRで測定した。各々の遺伝子の相対的発現量をハウスキーピング遺伝子PPIBを用いてΔΔCq法で算出し、非標的コントロールを用いてノーマライズした。
■individualおよびpooled crRNAにおける標的遺伝子の転写活性化
dCas9-VP64とMS2-p65-HSF1 (dCas9-SAM) を安定的に発現しているU2OS細胞またはA375細胞を10,000 cells/wellでプレーティングし、化学合成crRNA:tracrRNA (25 nM)をDharmaFECT 4 (U2OS細胞)または DharmaFECT 1 (A375細胞) Transfection Reagentでトランスフェクションした。crRNAは各々の遺伝子を標的とした4つのプレデザインcrRNAをそれぞれ個別で25 nM（crRNA 1～4）またはプールして総濃度25 nM（Pool）で用いた。細胞をトランスフェクション72時間後に回収し、遺伝子発現量をRT-qPCRで測定した。各々の遺伝子の相対的発現量をハウスキーピング遺伝子PPIBを用いてΔΔCq法で算出し、非標的コントロールを用いてノーマライズした。
細胞：U2OS-dCas9-SAM細胞系
トランスフェクション試薬：DharmaFECT 4 Transfection Reagent
細胞：A375-dCas9-SAM細胞系
トランスフェクション試薬：DharmaFECT 4 Transfection Reagent
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価格
[在庫・価格 ：2025年01月23日 15時55分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Edit-R SAM tracrRNA |
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[在庫・価格 ：2025年01月23日 15時55分現在]
Edit-R SAM tracrRNA
文献数： 0
- 商品コード：U-102005-05
- メーカー：DHA
- 包装：5nmol
- 価格：¥22,300
- 在庫：無(未発注)
- 納期：ご照会下さい ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | 製品価格とは別にHandling fee（手数料）が発生いたします。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2021年6月15日号 p.31
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| 製品記事 | |||
| 関連記事 | Dharmacon製品 Handling Fee（手数料）についてのご案内 |
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Edit-R SAM tracrRNA
文献数： 0
- 商品コード：U-102005-20
- メーカー：DHA
- 包装：20nmol
- 価格：¥49,400
- 在庫：無(未発注)
- 納期：ご照会下さい ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | 製品価格とは別にHandling fee（手数料）が発生いたします。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2021年6月15日号 p.31
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| 製品記事 | |||
| 関連記事 | Dharmacon製品 Handling Fee（手数料）についてのご案内 |
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Edit-R SAM tracrRNA
文献数： 0
- 商品コード：U-102005-50
- メーカー：DHA
- 包装：50nmol
- 価格：¥96,400
- 在庫：無(未発注)
- 納期：ご照会下さい ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | 製品価格とは別にHandling fee（手数料）が発生いたします。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2022年9月15日号 p.47
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ご注文方法
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製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。