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AChE活性を指標にしてエクソソーム数を概算定量するキット[蛍光] FluoroCet Ultrasensitive Exosome Quantitation Assay Kit
掲載日情報:2018/05/24 現在Webページ番号:64841

Exosome(エキソソーム, エクソソーム)に含まれるAcetyl-CoA Acetylcholinesterase(AChE)の活性を蛍光により高感度で測定するキットです。AChE活性を指標にして、エキソソーム数を概算定量できます。
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Exosome(エキソソーム、エクソソーム)定量キットのラインナップ
品名 | ExoELISA-ULTRA | EXOCET | FluoroCet |
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特長 | CD63またはCD81をマーカーとし、抗体を用いた高感度なエクソソーム定量が迅速に行えるキット | 抗体の結合を用いず、AChE活性を指標に迅速(20分)にエクソソームを概算定量できるキット | 蛍光法を用いて、AChE活性を指標に少ない試料量でもEXOCETの30倍以上の感度でエクソソームを概算定量できるキット |
検出方法 | 比色 | 比色 | 蛍光 |
作業時間 | 4時間 (O/Nインキュベーション不要) | 20分 | 60分 |
必要試料タンパク質量 | 1~200 μg | 50 μg | <1 μg |
商品コード | EXEL-ULTRA | EXOCET96A-1 | FCET96A-1 |
Acetyl-CoA Acetylcholinesterase(AChE)の活性を酵素反応(呈色)により比色定量するキットはこちら→EXOCET Exosome Quantitation Kit
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特長
- Exosome(エキソソーム, エクソソーム)に含まれるAChE活性[1,2]を利用して、エキソソーム量を測定します。
- 各種エキソソーム精製法(ExoQuick, ExoQuick-TC*、超遠心、免疫アフィニティー精製およびクロマトグラフィー)により得られたエキソソームから測定できます。
- ヒト、ラット、マウス由来のExosome(エキソソーム, エクソソーム)の測定が可能です。
- スタンダードとして精製済みExosome(エキソソーム, エクソソーム)が付属します。スタンダードは、NanoSightで予め測定されたエキソソーム数によってキャリブレーションされています。
- 1キットには、96回の反応を行える試薬が含まれています。
- 測定波長:励起:530~570 nm/蛍光:590~600 nm
- 試料量(タンパク質量):< 1μg
- 操作時間:1時間
*ExoQuick, ExoQuick-TCの詳細は「ExoQuick Exosome Precipitation Solutionシリーズ」をご覧下さい。
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参考文献
- Ariel Savina, Michel Vidal, Maria I., Colombo., The exosome pathway in K562 cells is regulated by Rab11, J. Cell Sci., 115 (pt 12):2505~2515 (2002).
- Sanjiv Gupta and A. A. Knowlton., HSP60 trafficking in adult cardiac myocytes: role of the exosomal pathway, Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol., 292 (6): H3052~H3056 (2007), Epbu 2007 Feb 16.
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操作方法概略
A. 試料の調製
試料には、Exosome(エキソソーム, エクソソーム)を含んだ250~500 ngのタンパク質を推奨します。
- 試料が凍結している場合は、氷上で融解させる。
- 3,000×gで15分間遠心し、細胞と細胞残渣を取り除く。
- 上清を、蓋ができる滅菌済みの丸形容器に移し、下記の表を参考にして適当な量のExoQuickまたはExoQuick-TCを加える。
- 3回転倒混和させる。
- 表に従い、30分間または1晩、4℃で静置する。
- 1,500×gで5分間遠心し、水分を除く(ペレットに触らないようにする)。
- PBS buffer(キットに含まれておりません)にペレットを再懸濁する。
- 分光光度計などで総Exosome(エキソソーム, エクソソーム)タンパク質を測定し、Exosome(エキソソーム, エクソソーム)が600 ng~1 μg / 60 μlの濃度になるように調製する。
- 60 μlのLysis bufferを加えて全量を120 μlにする。
- 氷上で30分間インキュベートする。
Incubation time at 4℃ | Bio-fluid | Sample volume | ExoQuick volume | ExoQuik-TC volume |
---|---|---|---|---|
30 minutes | Serum | 250μl | 63μl | none |
Overnight | Ascites fluid | 250μl | 63μl | none |
Overnight | culture media | 5 ml | none | 1 ml |
Overnight | Urine | 5 ml | none | 1 ml |
Overnight | spinal fluid | 5 ml | none | 1 ml |
B.標準曲線の作成
アッセイごとに標準曲線を作成して下さい。
- マイクロチューブを用い、FluoroCET standardをReaction bufferで段階希釈する。
- 下記の表を参考にして、標準曲線を作成するための適切な希釈を行う。標準曲線をduplicateで測定したい場合には、量を2倍に増やし、別々のウェルに注ぐ。
Tube | Exosome abundance | Dilution factor | FluoroCET standard | Reaction buffer | ![]() |
---|---|---|---|---|---|
1 | 2.00E+08 | 1 | 120μl | 0 | |
2 | 1.00E+08 | 1:2 | 60μl (from tube 1) | 60μl | |
3 | 5.00E+07 | 1:4 | 60μl (from tube 2) | 60μl | |
4 | 2.50E+07 | 1:8 | 60μl (from tube 3) | 60μl | |
5 | 1.25E+07 | 1:16 | 60μl (from tube 4) | 60μl | |
6 | 6.25E+06 | 1:32 | 60μl (from tube 5) | 60μl | |
blank | 0 | blank | 0 | 60μl |
C.アッセイの実施
- 96ウェルプレートの各ウェルに、スタンダードもしくは試料、Working stock of buffer AおよびWorking stock buffer Bを各50μlずつ加える(合計150μl/ウェル)。
- 穏やかに混和し、室温、暗所で20分間インキュベートする。
- 測定の30秒前に混合し、測定する(測定波長:励起530~570 nm/蛍光590~600 nm)。
D.測定例
Exosome abundance | x10^7 | Average RFU |
---|---|---|
2.00E+08 | 20 | 8750.63 |
1.00E+08 | 10 | 4379.08 |
5.00E+07 | 5 | 2427.27 |
2.50E+07 | 2.5 | 1280.56 |
1.25E+07 | 1.25 | 828.59 |
6.25E+06 | 0.625 | 681.42 |
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標準曲線のデータ例

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キット内容
- Exosome lysis buffer
- FluoroCet buffer A / B
- FluoroCet standard
- Opaque 96 well plate
- Detection reagent
- Reaction buffer
- Acetylcholine chloride
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価格
[在庫・価格 :2025年02月12日 12時35分現在]
詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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FluoroCet Exosome Quantitation Kit(96 reactions) |
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0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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[在庫・価格 :2025年02月12日 12時35分現在]
FluoroCet Exosome Quantitation Kit(96 reactions)
文献数: 0
- 商品コード:FCET96A-1
- メーカー:SBI
- 包装:1kit
- 価格:¥160,000
- 在庫:無(未発注)
- 納期:10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等:
説明文 | |||
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法規制等 | |||
保存条件 | 室温,-20℃ | 法規備考 | |
掲載カタログ |
ニュース2022年10月15日号 p.18
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製品記事 | エクソソーム(Exosome)研究用製品特集 |
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