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AChE活性を指標にしてエクソソーム数を概算定量するキット[蛍光] FluoroCet Ultrasensitive Exosome Quantitation Assay Kit

掲載日情報:2018/05/24 現在Webページ番号:64841

Exosome(エキソソーム、エクソソーム)特集バナー

Exosome(エキソソーム, エクソソーム)に含まれるAcetyl-CoA Acetylcholinesterase(AChE)の活性を蛍光により高感度で測定するキットです。AChE活性を指標にして、エキソソーム数を概算定量できます。

Exosome(エキソソーム、エクソソーム)定量キットのラインナップ

品名 ExoELISA-ULTRA ExoELISA EXOCET FluoroCet
特長 CD63またはCD81をマーカーとし、抗体を用いた高感度なエクソソーム定量が迅速に行えるキット CD9, CD63またはCD81をマーカーとし、高感度なエクソソーム定量を行うキット 抗体の結合を用いず、AChE活性を指標に迅速(20分)にエクソソームを概算定量できるキット 蛍光法を用いて、AChE活性を指標に少ない試料量でもEXOCETの30倍以上の感度でエクソソームを概算定量できるキット
検出方法 比色 比色 比色 蛍光
作業時間 4時間 (O/Nインキュベーション不要) 24時間 20分 60分
必要試料タンパク質量 1~200 µg >500 µg 50 µg <1 µg
商品コード EXEL-ULTRA EXOEL EXOCET96A-1 FCET96A-1

Acetyl-CoA Acetylcholinesterase(AChE)の活性を酵素反応(呈色)により比色定量するキットはこちら→EXOCET Exosome Quantitation Kit
ヒト由来Exosome(エキソソーム、エクソソーム)中のマーカータンパク質を、ダイレクトELISAで定量するキットはこちら→ExoELISA ELISA Kit

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特長

  • Exosome(エキソソーム, エクソソーム)に含まれるAChE活性[1,2]を利用して、エキソソーム量を測定します。
  • 各種エキソソーム精製法(ExoQuick, ExoQuick-TC*、超遠心、免疫アフィニティー精製およびクロマトグラフィー)により得られたエキソソームから測定できます。
  • ヒト、ラット、マウス由来のExosome(エキソソーム, エクソソーム)の測定が可能です。
  • スタンダードとして精製済みExosome(エキソソーム, エクソソーム)が付属します。スタンダードは、NanoSightで予め測定されたエキソソーム数によってキャリブレーションされています。
  • 1キットには、96回の反応を行える試薬が含まれています。
  • 測定波長:励起:530~570 nm/蛍光:590~600 nm
  • 試料量(タンパク質量):< 1μg
  • 操作時間:1時間

ExoQuick, ExoQuick-TCの詳細は「ExoQuick Exosome Precipitation Solutionシリーズ」をご覧下さい。


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参考文献

  1. Ariel Savina, Michel Vidal, Maria I., Colombo., The exosome pathway in K562 cells is regulated by Rab11, J. Cell Sci., 115 (pt 12):2505~2515 (2002).
  2. Sanjiv Gupta and A. A. Knowlton., HSP60 trafficking in adult cardiac myocytes: role of the exosomal pathway, Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol., 292 (6): H3052~H3056 (2007), Epbu 2007 Feb 16.

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操作方法概略

A. 試料の調製

試料には、Exosome(エキソソーム, エクソソーム)を含んだ250~500 ngのタンパク質を推奨します。

  1. 試料が凍結している場合は、氷上で融解させる。
  2. 3,000×gで15分間遠心し、細胞と細胞残渣を取り除く。
  3. 上清を、蓋ができる滅菌済みの丸形容器に移し、下記の表を参考にして適当な量のExoQuickまたはExoQuick-TCを加える。
  4. Incubation time at 4℃ Bio-fluid Sample volume ExoQuick volume ExoQuik-TC volume
    30 minutes Serum 250μl 63μl none
    Overnight Ascites fluid 250μl 63μl none
    Overnight culture media 5 ml none 1 ml
    Overnight Urine 5 ml none 1 ml
    Overnight spinal fluid 5 ml none 1 ml
  5. 3回転倒混和させる。
  6. 表に従い、30分間または1晩、4℃で静置する。
  7. 1,500×gで5分間遠心し、水分を除く(ペレットに触らないようにする)。
  8. PBS buffer(キットに含まれておりません)にペレットを再懸濁する。
  9. 分光光度計などで総Exosome(エキソソーム, エクソソーム)タンパク質を測定し、Exosome(エキソソーム, エクソソーム)が600ng~1µg / 60µlの濃度になるように調製する。
  10. 60μlのLysis bufferを加えて全量を120μlにする。
  11. 氷上で30分間インキュベートする。

B.標準曲線の作成

アッセイごとに標準曲線を作成して下さい。

  1. マイクロチューブを用い、FluoroCET standardをReaction bufferで段階希釈する。
  2. 下記の表を参考にして、標準曲線を作成するための適切な希釈を行う。標準曲線をduplicateで測定したい場合には、量を2倍に増やし、別々のウェルに注ぐ。
  3. Tube Exosome abundance Dilution factor FluoroCET standard Reaction buffer CETP活性でエキソソームの定量を行うキット EXOCET Exosome Quantitation Kit
    1 2.00E+08 1 120μl 0
    2 1.00E+08 1:2 60μl (from tube 1) 60μl
    3 5.00E+07 1:4 60μl (from tube 2) 60μl
    4 2.50E+07 1:8 60μl (from tube 3) 60μl
    5 1.25E+07 1:16 60μl (from tube 4) 60μl
    6 6.25E+06 1:32 60μl (from tube 5) 60μl
    blank 0 blank 0 60μl

C.アッセイの実施

  1. 96ウェルプレートの各ウェルに、スタンダードもしくは試料、Working stock of buffer AおよびWorking stock buffer Bを各50μlずつ加える(合計150μl/ウェル)。
  2. 穏やかに混和し、室温、暗所で20分間インキュベートする。
  3. 測定の30秒前に混合し、測定する(測定波長:励起530~570 nm/蛍光590~600 nm)。

D.測定例

Exosome abundance x10^7 Average RFU
2.00E+08 20 8750.63
1.00E+08 10 4379.08
5.00E+07 5 2427.27
2.50E+07 2.5 1280.56
1.25E+07 1.25 828.59
6.25E+06 0.625 681.42


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標準曲線のデータ例

標準曲線のデータ例

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キット内容

  • Exosome lysis buffer
  • FluoroCet buffer A / B
  • FluoroCet standard
  • Opaque 96 well plate
  • Detection reagent
  • Reaction buffer
  • Acetylcholine chloride

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価格

[在庫・価格 :2024年03月29日 18時15分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
FluoroCet Exosome Quantitation Kit(96 reactions)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
法規制等
保存条件 室温,-20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年10月15日号 p.18

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[在庫・価格 :2024年03月29日 18時15分現在]

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FluoroCet Exosome Quantitation Kit(96 reactions)

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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