ヒト多能性幹細胞から肝細胞様細胞への分化誘導キット StemXVivo Hepatocyte Differentiation Kit

ヒト多能性幹細胞から肝細胞様細胞（heatocyte-like cells）への分化を誘導する培地添加物、基本培地および分化確認用抗HSA抗体のセットです。最適化された培地および分化誘導カクテルを使用することで、高密度の肝細胞様細胞が得られます。肝毒性薬物や小分子のスクリーニングに最適です。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

StemXVivo肝細胞分化キットを使用して、BG01Vヒト胚性幹細胞および人工多能性（iPS2）幹細胞を肝細胞様細胞に分化した。肝細胞様細胞による肝細胞特異的マーカーの発現は、それぞれに特異的な抗体を用いた免疫細胞染色により検証した。
使用抗体：
Anti-CCAAT-enhancer-binding protein α (CEBP-α; #AF7094) / Anti-Albumin (#MAB1455) / Anti-α-Fetoprotein (AFP; #AF1369) / Anti-Hepatocyte Nuclear Factor 4 α(HNF-4α; #MAB4605) / Anti-Serpin A1 (A1AT; #AF1268) / Anti-Cytokeratin 18 (#AF7619) / DAPI（核の対比染色）

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■StemXVivo Kit

ヒト多能性幹細胞からそれぞれの細胞に分化誘導する、最適化された培地と分化誘導用カクテル、分化確認用抗体のセットです。

■StemXVivo Medium

■StemXVivo Supplement, その他

本製品を使用して、BG01Vヒト胚性幹細胞および人工多能性（IPS2）幹細胞を分化させ、以下の実験に用いました。

フローサイトメトリーによる分化効率の定量化
細胞表面肝細胞タンパク質のAsialoglycoprotein Receptor 1 (ASGPR1;青色ヒストグラム)をフローサイトメトリーによって定量した。本製品を用いて誘導した肝細胞様細胞の約78％、iPSCs細胞の約70％がASGPR1陽性細胞であった。染色レベルは、アイソタイプのコントロール抗体（灰色ヒストグラム）と比較した。

多能性幹細胞由来肝細胞様細胞による尿素およびアルブミンの分泌
A) 多能性幹細胞由来の肝細胞様細胞から分泌された尿素をQuantiChrom Urea Assay Kit（BioAssay Systems、#DIUR-100）により定量した。
B) 未分化胚性幹細胞（ES細胞）および幹細胞由来肝細胞様細胞の細胞培養培地中に分泌されたヒト血清アルブミンを、Human Serum Albumin DuoSet ELISA Kit（#DY1455）を用いて検出した。

多能性幹細胞由来肝細胞様細胞による機能性チトクロムP450の発現
本製品により分化した肝細胞様細胞をβ- naphthoflavone（BNP; 20μM）未処理または処理で24時間インキュベートし、チトクロムP450（CYP1A1）の発現を誘導した。次に、全ウェルをのエトキシレソルフィン（29 mM）中でインキュベートし、代謝産物のCyp1A1により蛍光物質のレゾルフィンを生成させた。培養液50μlを15分おきに75分間採取し、570 nmの吸光度を測定した。BNP処理肝細胞様細胞では時間経過とともにCyp1A1活性の増加が示された。

ヒト胚性幹細胞由来肝細胞によるCYP3A4発現誘導と活性
50μMのデキサメタゾンまたは25μMのリファンピシンのいずれかで、本製品で分化した肝細胞様細胞を48時間処理しCYP3A4の発現を誘導した。未処理対照試料と比較して、CYP3A4活性は、デキサメタゾン処理で 3.25倍増加、リファンピシン処理で2.69倍増加した。CYP3A4活性は、P450-Glo CYP3A4 cell-based assay（Promega）を用いて測定した。

多能性幹細胞由来肝細胞様細胞におけるアセトアミノフェンの毒性
本製品で分化した肝細胞様細胞を、エタノール中に溶解したアセトアミノフェン（1 mMまたは10 mM）またはエタノールのみ（コントロール）で22時間処理後、Resazurin metabolism assay (#AR002)で測定した。エタノール単独で処理し、効率的にレザズリンを代謝した細胞では経時的に累積的な蛍光の増加が見られた。アセトアミノフェンは、肝細胞様細胞に対して用量依存的な毒性をもたらした。アセトアミノフェン処理細胞では、経時的レゾルフィン蛍光の蓄積量の減少により、代謝活性の低下が示された。