迅速にGolgi-Cox（ゴルジ-コックス）染色を行えるキット superGolgi Kit

※ フタ付きのガラス製またはプラスチック製容器を使用して下さい。Impregnation solutionを取り扱う際は、金属製器具の使用を避けて下さい。
※ Impregnation、Post-impregnation、Stainingの各工程中は、組織ブロックまたは切片を遮光して下さい。
※ 室温（推奨温度：20～22℃）で行って下さい。

1. Impregnation：新鮮採取試料をSolution A（Impregnation solution）に含浸し、室温および遮光下でインキュベーションする。1～2日後に溶液を交換し、試料の種類に応じて約1～2週間インキュベーションする。
   ※ 含浸中に溶液が「濁った」場合は、試料をdH2Oで洗浄し、溶液を交換する。
   浸透時間の目安
   

   対象動物（生後日数・月齢）		組織（サイズ）	浸透時間
   Rat	2-day old	Whole brain together skull	No perfusion, 9 days
   	6-day old	Hemisphere or whole brain	Saline perfused, 7 days
   	10-day old	Hemisphere or whole brain	Saline perfused, 9～10 days
   	24-day old	Hemisphere or posterior half	Saline perfused, 9～10 days
   	3～4 month	Hippocampus block including cortex	Saline perfused, 10～12 days
   Mouse	6-day old	Whole brain	No perfusion, 8 days; Saline perfused, 7 days
   	2～3 month	Whole brain	Saline perfused, 9～10 days
   	5 month	Hemisphere or whole brain	No perfusion, 11～12 days; Saline perfused, 9～11 days

2. Post-impregnation：組織を洗浄後、30 gのReagent Bを90 mlのdH2Oで溶解したB1(Post-impregnation) buffer中で、室温および遮光下にて2日間以上インキュベーションする。含浸開始から1日後に一度B1 bufferを交換する。
   ※ 2日間のインキュベーション後、試料は切片作製に使用できます。試料はB1 buffer中で、4～25℃では数日間、4℃では最長1か月間安定です。
3. Sectioning：ビブラトームまたは同様の装置を用いて、切片を作製し、30 gのReagent Bを500 mlのdH2Oで溶解したB2(Collection & Mounting) buffer中に回収する。樹状突起分枝およびスパインの解析には、100～200 μmの切片厚が推奨される。
4. Mounting Sections：付属のShader Paintbrush、または同様の器具を用いて、切片をB2 bufferで満たしたペトリ皿に移す。Round Paintbrush、または同様の器具を用いて、切片をゼラチンコートスライドに貼付する。貼付した切片を乾燥したStaining Jar with lid（フタ付き染色ジャー）に入れる。すべての切片を貼付し、ジャーに入れた後、ジャーの開口部に吸水紙を2～3枚重ねて置き、その上にB2 bufferを1～2滴（50～100 μl）滴下してから蓋を固定する。蓋を固定したジャーを遮光下で数時間または一晩（最長1日）静置し、切片をしっかり接着させる。
5. Washing：貼付した切片を0.01 M PBS-Tで20～30分間洗浄する。
6. Staining：Solution Cを希釈したWorking solution C中で室温かつ遮光下にてインキュベーションする。試料や用途に応じて染色時間を最適化する。
7. Clarity：Solution Dを希釈したWorking solution D中で室温にてインキュベーションし、その後PBS-Tで洗浄（3～4回、計20～40分）する。洗浄した切片を、dH2Oで短時間（1～5秒）リンスし、風乾する（10～60分、またはそれ以上）。
   ※ 風乾後の切片は、乾燥した染色ジャー内（室温）にて最長1日保存できます。保存する場合は、フタを閉める前にジャーの開口部を吸水紙2～3枚で覆って下さい。長時間空気にさらすと、切片が断片化することがあります。
8. Dehydration, Clearing, and Coverslipping：切片を100％エタノールで15～30分間脱水する（例：5～10分×3回）。
   キシレンまたは代替試薬に15～30分間（5～10分×3回）含浸し、透徹する。
   封入剤を用いて封入する。
   ※ 切片はすでに風乾されているため、70％から95％エタノールへの段階的脱水は省略できます。厚い切片（例：300～400 μm）では、脱水および透徹により長い時間が必要となる場合があります。
9. Storage of slides：本製品で染色した切片は、乾燥・遮光条件下、4～25℃で保存できます。
   ※ 推奨保存温度は、20～22℃です。