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[CRISPR-Cas9]複数のguide RNAを同時発現させるベクターの構築キット PrecisionX Multiplex gRNA Cloning Kit

掲載日情報:2015/02/13 現在Webページ番号:63394

複数のguide RNAを同時発現させるベクターを構築するキットです。

guide RNAによる新技術のゲノム編集ツール CRISPR-Cas9特集

特長

  • 直線化したgRNA ベクターまたはCas9 all-in-one ベクターに,複数のguide RNA をクローニングできるキットです。
  • 作製したマルチgRNA 発現系により,複数の標的配列を切断することが可能となります。
  • System Biosciences 社のCRISPR/Cas9 システム以外のベクターと組み合わせて使用することも可能です。

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使用例

複数のguide RNAを同時発現させるベクターの構築キット PrecisionX Multiplex gRNA Cloning Kitの使用例

CMV-GFP-T2A-RFP 遺伝子カセットを導入した細胞に,RFP 配列を標的とする2種類のgRNA を発現するCas9 All-in-one ベクターを導入した。RFP 配列に対するPCR を行った結果,ベクターを導入した細胞では,切断が行われたことで短い断片が増幅された。RFP の蛍光を調べた結果,ベクターを導入した細胞では,RFP の蛍光が低減した。

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操作方法概略

複数のguide RNAを同時発現させるベクターの構築キット PrecisionX Multiplex gRNA Cloning Kitの操作方法概略

Multiplex gRNA Cloning Kit には,H1 and U6 プロモーターのブロックが含まれ,簡単にマルチgRNA カセットを作製できます。

  1. 作製しようとするgRNA を含む領を増幅できるプライマーと,キット由来のscaffoldpromoter block をPCR で結合し,両方のgRNA を含むPCR 産物を作製する。
  2. PCR 産物をfusion reaction mix,線状発現ベクターと結合させる。

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キット内容

  • Master mix
  • Linearized vector (positive control)
  • PCR product (positive control)
  • H1 block
  • U6 block

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参考文献

Tsui-Ting Ho, et al., Nucleic Acids Research(2014)

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価格

[在庫・価格 :2021年09月25日 00時14分現在]

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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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