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レンチウイルスベースmicroRNA発現ベクター shMIMIC Lentiviral microRNA

掲載日情報:2019/10/25 現在Webページ番号:63301

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microRNA(miRNA)を安定的に過剰発現するmiRNA発現ベクターです。microRNAによって誘導される長期的な表現型を調べるのに有用です。shMIMIC Lentiviral microRNAは,miRBaseデータベースに登録されているヒトmicroRNAごとにデザインされています。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
Tet-Onシステムにより,microRNAの発現誘導が制御できるshMIMIC vectorシリーズについては「shMIMIC Inducible Lentiviral microRNA」をご覧下さい。


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特長

  • ヒトのmicroRNAを網羅しています。
  • 初代培養細胞や非分裂細胞を含む,さまざまな細胞でmicroRNAを過剰発現可能です。
  • TurboGFPの同時発現によってmicroRNAの発現を確認可能です。
  • ピューロマイシン耐性遺伝子を持つため,安定発現細胞を薬剤選択可能です。
  • Ready-to-useの高力価レンチウイルス粒子フォーマットです。

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内在性microRNA転写産物のプロセッシング経路を介したmicroRNAの過剰発現

microRNAの過剰発現

(1) レンチウイルス粒子が宿主細胞に結合し,microRNA配列を含むように遺伝子組換え操作を行ったウイルスゲノムRNAを細胞質に送り込みます。(2) ウイルスRNAゲノムが細胞質内で逆転写されます。ウイルスゲノムDNAが核内に運ばれ,宿主ゲノムに安定的に取り込まれます。(3) 内在性microRNA遺伝子と同じようにshMIMIC microRNA導入遺伝子が転写されます。過剰発現されたpri-microRNAはDroshaによってプロセッシングされてpre-microRNAになり(4),核から細胞質に輸送され(5),Dicerによってさらにプロセッシングされて二本鎖microRNAになります(6)。二本鎖microRNAの片方の鎖が選択されてRNA誘導サイレンシング複合体(RISC)に取り込まれます(7)。このmicroRNA成熟鎖-RISC複合体がターゲットmRNAに結合し,mRNAからタンパク質への翻訳阻害やmRNAの分解を引き起こします。

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shMIMIC microRNA導入後のGFPの発現

shMIMIC microRNA導入後のGFPの発現

4種類の異なる細胞株へmiRIDIAN shMIMIC Lentiviral microRNAを導入し,120時間後にTurboGFPの発現を確認しました(ピューロマイシン選択未実施)。


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shMIMIC microRNAs導入後のmicroRNA ターゲット遺伝子の発現解析

microRNA ターゲット遺伝子の発現解析

ヒトのmicroRNAに対応するmiRIDIAN shMIMIC Lentiviral microRNAまたはshMIMIC Lentiviral microRNAネガティブコントロールを,HEK293やHUVEC,K562,SH-SY5 Y細胞に3回導入しました(ピューロマイシン選択未実施)。導入120時間後に細胞を採取し,RNAを抽出しました。Solaris qPCR Gene Expression Assay(HEK293およびSH-SY5Yのデータ)またはVerso SYBR Green 2-Step QRT-PCR Kit(HUVECおよびK562のデータ)を用い,各microRNAのターゲット遺伝子の発現抑制を評価しました。ハウスキーピング遺伝子(PPIB)に対してデータを標準化し,さらにshMIMIC Lentiviral microRNAネガティブコントロールに対する標準化を行いました。


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