in vitroでの血管形成・血管新生（Angiogenesis）を評価するキット Endothelial Tube Formation Assay (In vitro Angiogenesis)

マウスEHS 肉腫から調製したECM を用いて、in vivoに似た三次元環境で内皮細胞の血管形成を行うキットです。in vivo実験前の血管形成・血管新生阻害物質のスクリーニングなどに有用です。

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※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

本製品のECMゲルを用いHUVEC細胞の血管形成を解析した。
左図：プレートで培養したHUVEC細胞、右図：本製品で培養したHUVEC細胞

※本製品に内皮細胞や培地、96ウェルプレートは含まれていません。別途ご用意下さい。
※観察には光学顕微鏡と蛍光顕微鏡、解析には画像解析ソフトが必要です。

Q-1. このキットはHUVEC以外の細胞にも使用できますか？

A-1.はい。どの内皮細胞にも使用できます。

Q-2.ECM gel solutionの組成は何ですか？

A-2.ECMはマトリゲルと同じく、マウスEngelbreth-Holm-Swarm (EHS)肉腫から調製されています。ラミニンを主成分とし、コラーゲンタイプⅣ、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、エンタクチンなどの成分が含まれています。増殖因子も含まれていますが濃度は測定していません。

Q-3.このアッセイ系で、血管新生メディエーターは必要ですか？

A-3.血管新生メディエーターを新たに添加しなくても血管形成は起こるため、必須ではありません。そのため、血管形成の阻害研究に有用ですが、血管形成の促進研究においては、経時観察を行わない場合、少々困難です。本キットに血管新生メディエーターは含まれていませんが、もし使用する際は、成分濃度の最適化を行う必要があります。最適な血管形成を行うためには、新鮮なHUVEC細胞を十分量（例：5×10⁴ cells/well）播種して下さい。一般的に血管形成は、細胞数が多い方が良い結果が得られます。

Q-4.どのようにすればうまく血管形成を行えますか？

A-4.血管形成の改善法として以下の点が挙げられます。

1. インキュベーション時間をを12時間～一晩に変更します。一晩のインキュベーション後に最も血管形成が発現します。
2. ECMゲルは使用前に完全に融解して下さい。ゲルを4℃、24時間で融解し、ウェルに分注する直前にボルテックスをして下さい。ゲルの形成には30分～1時間を要しますが、完全にゲル化するため、必要であればプレートを37℃で1時間以上インキュベートしても構いません。ゲルの固化が不十分の場合、細胞が同じ範囲に留まらず、細胞間の相互作用やチューブ形成が低下します。
3. 一度細胞を添加したら、プレートを動かさないで下さい。血管形成に影響する場合があります。

Q-5.ウェル端での血管の密集を防ぐ方法はありますか？

A-5.ウェル端での血管形成は、ウェル端周辺の細胞濃度が高すぎることが原因と考えられます。この現象は、ウェル中の細胞数が不十分であることを示しているので、細胞数を増やして下さい。

Q-6.血管形成阻害物質は何がオススメですか？

A-6.例えばMMP阻害物質（GM6001）やPI3K阻害物質（Wortmannin）などを推奨します。

Q-7.どのように血管を計測すれば良いですか？

A-7.主に、面積あたりの血管本数または分岐点数、平均血管長などで示されます。