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バクテリア／哺乳動物培養細胞からのタンパク質抽出用試薬 SoluLyse Protein Extraction Reagent

掲載日情報：2016/10/07 現在Webページ番号：579

ジェンランティス /
Genlantis
[メーカー略称：GTS]

バクテリア、あるいは哺乳動物培養細胞から、簡便、迅速、高効率に非変性タンパク質を抽出できる試薬です。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

#L100500 タンパク質の比較 #L100500 ルシフェラーゼ活性測定結果

左：SoluLyse Bacterial Protein Extraction Reagent(#L100500)とA社タンパク質抽出試薬を用いて抽出したルシフェラーゼ非発現／発現BL21(DE3)細胞ライセート中の総タンパク質の比較結果
UI：非発現細胞、I：発現細胞

中央：次いで、ルシフェラーゼ発現BL21(DE3)細胞ライセートのアフィニティー精製後の6×His－ルシフェラーゼタンパク質の比較結果
UP：未精製タンパク質、FT：フロースルー、P：精製タンパク質

右：SoluLyse Bacterial Protein Extraction Reagent(#L100500)によるpET3a-Luc導入BL21(DE3)細胞抽出物のルシフェラーゼ活性測定結果

#L100500 ルシフェラーゼ活性測定結果

SoluLyze-M(#L300125)を用いて抽出した6×His-LacZ発現CHO-K1細胞ライセートをNi-NTAレジンで精製し、ウエスタンブロットにより検出した。

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種類

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対象試料 バクテリア細胞 哺乳動物細胞
製品外観 #L100500 ボトル #L300500 ボトル
バッファー 成分 50 mM NaHPO4 20 mM Tris HCl 25 mM Tris, 250mM Sucrose
pH 7.47.57.4
界面活性剤 非イオン性界面活性剤
品名 SoluLyse Bacterial Protein Extraction Reagent SoluLyse Bacterial Protein Extraction Reagent, in Tris Buffer SoluLyse-M Mammalian Protein Extraction Reagent
商品コード L100125 L100500 L200125 L200500 L300125 L300500
包装 125 ml 500 ml 125 ml 500 ml 125 ml 500 ml
製品概要 バクテリアから、簡便、迅速、高効率に非変性タンパク質を抽出できる試薬です。Lysozyme処理は通常不要ですが、不溶性タンパク質の場合は、Lysozymeの併用により完全に封入体からタンパク質を可溶化することができます。 哺乳動物培養細胞から、簡便、迅速、高効率に非変性タンパク質を抽出できる試薬です。
特長
  • 可溶性タンパク質に対して、他社競合品と比べて数倍の回収率が得られます。
  • GSTや6×Hisタグ付きタンパク質などのアフィニティー精製にも適応します。
  • DNaseⅠ、Lysozyme、プロテアーゼ阻害剤、塩類、キレート剤などとの併用が可能です。
※ 本製品の抽出効率は細胞株の種類によって異なります。大腸菌BL21株では特に有効です。pLysS株またはpLysE株ではT7 lysozymeによって抽出は促進されますが、ライセートの粘度が高くなるためDNase Ⅰの併用をお勧めします。
  • 細胞質および核タンパク質を抽出できます。
  • 接着培養および浮遊培養のいずれの細胞にも使用できます。
  • 抽出したタンパク質は、レポーターアッセイ、イムノアッセイ、タンパク質の精製に使用できます。
  • 透析により容易に除去できるため、ウエスタンブロットやクマシー染色、BCA アッセイによる解析にも使用可能です。
  • プロテアーゼ阻害剤や還元剤と併用可能です。


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使用例

SoluLyse Bacterial 使用例

Mycobacterium tuberculosis 由来のACPドメインを含むpolyketide synthase ppsCを導入したE. coli 細胞より超音波、SoluLyse、A社タンパク質抽出試薬およびLysozymeを用いてタンパク質を抽出し、下記の分析に供した。

左：それぞれの抽出方法の可溶性画分とペレット（不溶性画分）について、同一条件で単一プロテインの発現の蛍光シグナルを96ウェルプレート上で比較した。SoluLyse抽出物は超音波処理抽出物と類似した蛍光シグナルのパターンを示し、A社製品抽出物ではLysozyme抽出物と類似した蛍光シグナルのパターンを示した。

右：それぞれの方法を用いて抽出した各構成物のシークエンシングを行い、溶解度で分けてACPドメインを含むppC遺伝子領域にマッピングした。棒グラフの着色は可溶性画分とペレットの割合から算出した％溶解度を表す（赤、橙および黄色：可溶分≦50％、緑、暗青色および明青色：可溶分＞50％）。縦の点線は、既知のACP、KRおよびERドメインの境界を示す（マップの表示の単純化のためにppCの3つのC末端ドメインのみを示した）。

引用文献：
Pawel L., et al., J. Struct. Funct. Genomics, 11, 41～49 (2010).

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Bacterial Protein Extraction Reagent, SoluLyse
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お問い合わせ先

（テクニカルサポート 試薬担当）

reagent@funakoshi.co.jp

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