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Anaspec社 技術:β-アミロイドペプチドの溶解性および繊維化に対する溶媒およびバッファーの影響 Effect of Solvents and Buffer Systems on the Solubility and Fibrillization of β-Amyloid Peptides

掲載日情報:2015/10/28 現在Webページ番号:4571

Anaspec社β-Amyloid(β‐アミロイド)ペプチド製品の溶解性および繊維化に、溶媒やバッファーが及ぼす影響について、メーカーの研究者が調査、解析した結果です。

その他のβ-アミロイドペプチドについては、「β-Amyloid(β‐アミロイド)ペプチド」をご覧下さい。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

Zhijie Qin, Daniel H, Cecilia Po, Trini Arroyo and Anita Hong
AnaSpec, Inc. 34801 Campus Dr. Fremont, CA 94555, USA

イントロダクション

アルツハイマー病(Alzheimer's Disease、AD)は最も一般的な神経変性疾患です。アルツハイマー病の神経変性は、βアミロイド仮説によれば、脳内へのβアミロイドペプチド(Aβ)の蓄積がアルツハイマー病の主な原因であると考えられています。
アルツハイマー病研究や治療法の大部分はこの仮説に基づいており、合成βアミロイドペプチドはin vitroでの病態形成過程を模倣するために広く使用されており、治療の標的分子とされています。ペプチドの溶解度と初期状態がペプチドの凝集に重要な役割を果たすため、ペプチドを期待される状態(主にモノマー)にするための適切な条件が必要とされています。
許容可能な非凝集ペプチドを得るために、一般的に使用される溶媒(NAOH、NH4OH、HFIP)への合成βアミロイド(1-40)および(1-42)の溶解度、およびこれらの緩衝液中での凝集特性を試験し、比較しました。このデータは、合成βアミロイドペプチドの凍結乾燥固体形態を1% NH4OHまたは0.1M NaOHに溶解して、ペプチドの線溶化および凝集特性に影響を与えることなく、単量体ペプチド溶液を得ることができることを示唆しています。

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検証方法

  • β-Amyloid peptides (1-40 and 1-42): Synthesized by AnaSpec, Fremont, CA.
  • SEC data were obtained on Waters 2695 Separation Module (Millfold,MA) with a Waters 996 Photodiode Array Detector using a Thermo Biobasic SEC-120 column.
  • Thioflavin T assay was performed to monitor peptide fibrillization kinetics using a Fluoroskan Ascent CF plate reader (Labsystems, Inc). Fluorescence was measured with excitation at 444 nm and emission at 485 nm.
  • Transmission electron micrographs were obtained using a JEOL JEM-100B microscope, operation at an acceleration voltage of 80 kV to reveal the morphology of the fibrils/aggregates.

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結果:βアミロイドペプチドの可溶性

■Peptides Resuspension

β-Amyloid peptides were re-suspended in either 0.1 M NaOH or 1% NH4OH, to a final concentration of 5.0 mg/ml.
Peptides were vortexed for 30 seconds followed by bath sonication for 5 minutes. They were then centrifuged at 20,000g for 10 minutes. Insoluble materials were removed and the supernatants used for analysis.

β-Amyloid Peptide の溶解性および繊維化に対する溶媒およびバッファーの影響

Figure 1. Solubility analysis of β-amyloid (1-42)(cat.#AS-20276) by SEC-HPLC Peptide was dissolved in 0.1 M NaOH (A) or 1% NH4OH (B). Flow rate was 1ml/min.


β-Amyloid Peptide の溶解性のSEC-HPLC結果

Figure 2. SEC-HPLC results showing the solubility of β-amyloid (1-40) (cat.#AS-24236) dissolved in 0.1 M NaOH (A). 1% NH4OH (B), and pre-treated with HFIP then dissolved in 0.1 M NaOH (C). At a flow rate of 1 ml/min, all the solutions showed a major peak at the predominance of monomeric state.


β-Amyloid Peptide のSEC-HPLCで用いたα-Synuciein
Figure 3. α-Synuciein protein was used as a internal standard marker in the SEC-HPLC analysis of β-amyloid peptides. Flow rate was 1ml/min.

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結果:βアミロイドペプチドの繊維化カイネティクス


β-Amyloid Peptide の繊維化カイネティクス

Figure 4. Fibrillization kinetics of β-amyloid (1-40) (left panel) and β-amyloid (1-42)(top panel) under different conditions. Peptides were dissolved in 1% NH4OH and diluted into the buffers to a final concentration of 0.2 mg/ml. Fibrillization was initiated by incubating the samples in a plate reader with gentle agitation at 37℃.


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結果:フィブリルの透過型電子顕微鏡(TEM)像


フィブリルの透過型電子顕微鏡(TEM)像

Figure 5. TEM images of the fibrils grown from β-amyloid peptides under different conditions. (A) Aβ (1-40) in HEPES buffer, pH7.3. (B) Aβ (1-42) dissolved in 0.1 M NaOH and fibrillized in 0.1 M Tris-HCl, pH7.4; (C) Aβ (1-42) dissolved in 0.1 M NaOH and fibrillized in 0.1 M phosphate buffer, pH7.4; and (D) Aβ (1-42) dissolved in 1% NH4OH and fibrillized in 0.1 M HEPES buffer, pH7.4.

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結論

合成βアミロイドペプチドの固体形態は、1% NH4OHまたは0.1 M NaOHに溶解することにより、ペプチドの線溶化および凝集特性に影響を与えることなく、単量体ペプチド溶液を得ることができます。

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β-amyloid peptideの価格

β-amyloid(1-40)

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β-Amyloid(1-42), Human, HFIP

文献数: 0

説明文 M.W.:4514.4,純度:Peak Area by HPLC ≥95%,化学式:C203H311N55O60S,形状:Lyophilized,由来:Human
CAS No:107761-42-2
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 -20℃,乾燥状態(デシケータ内)で保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年6月15日号 p.43
ニュース2023年8月合併号 p.43

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説明文 M.W.:4514.4,純度:Peak Area by HPLC ≥95%,化学式:C203H311N55O60S,形状:Lyophilized,由来:Human
CAS No:107761-42-2
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 -20℃,乾燥状態(デシケータ内)で保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2019年6月15日号 p.34

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