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簡便に使用できる三次元培養用の生体模倣ゲル 3-D Life Hydrogel Kit

掲載日情報:2021/01/20 現在Webページ番号:4146

チオール反応性水溶性ポリマーのマレイミド修飾PVA(非分解性)またはDextran(ユーザー分解性)と,チオール基を有するPEG-Link(細胞非分解性)またはCD-Link(細胞分解性)のいずれかの架橋剤とを組み合わせて架橋することにより,非分解性,細胞分解性(細胞の産生するMMPによる分解),ユーザー分解性(ユーザーによるDextranase添加による分解),または細胞およびユーザー分解性のいずれかの特性を有する3-D Hydrogelを作製できます。また,目的に応じて水溶性ポリマーと架橋剤との配合比や反応時のpHを調整することにより,ご自身でゲル化に要する時間や,ゲル硬度を自由に調節することも可能です。

ポリマーとクロスリンカー

これらの3-D Hydrogelは,細胞に結合せず,細胞機能に影響を与えないことから,接着性ペプチドや細胞外マトリックスタンパク質またはそのフラグメントなどの生物活性因子の添加による細胞の表現型の解析に有用です。

「Fast Gelling」製品は,キット内容が変更になりました。新製品はThioglycerolおよびDextranaseが付属していませんのでご注意下さい。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

使用例

MDCK細胞

3-D Life PVA-PEG Hydrogel中で9日間培養したMDCK細胞の共焦点レーザー顕微鏡での観察像。アクチン細胞骨格()と細胞核()を染色した。スケールバー:50μm。

MDCK細胞:PEG-Linkを使用

A:コントロールとしてThioglycerolを添加したハイドロゲルでは細胞が極性を持たず,凝集して存在している。

MDCK細胞:CD-Linkを使用

B:細胞接着を促進するRGDペプチドを添加したハイドロゲルでは,細胞が極性を持って単層化し,内腔構造を取り囲んで嚢胞を形成している様子が見られる。

3T3線維芽細胞

2種類のクロスリンカーで重合した3-D Life PVA-PEG Hydrogel中で14日間培養した3T3線維芽細胞の共焦点レーザー顕微鏡での観察像。アクチン細胞骨格()と細胞核()を染色した。いずれも細胞接着を促進するRGDペプチドを添加してある。スケールバー:200μm。

3T3線維芽細胞:Thioglycerol添加(コントロール)

C:PEG-Linkを使用したハイドロゲルでは,細胞の形態は丸いままで局所的に凝集して存在している。

3T3線維芽細胞:RGDペプチド添加

D:CD-Linkを使用した場合,細胞は伸展し,ゲル内に広く存在している。

MCF-7細胞と線維芽細胞の共培養

MCF-7細胞,線維芽細胞,およびMCF-7と線維芽細胞を共培養で,それぞれRGDペプチド修飾デキストランゲル内で14日間培養した落射蛍光顕微鏡での観察像。MCF-7細胞の単培養では腫瘍様スフェロイドを形成し,線維芽細胞の単培養ではin vivoに典型的な皮膚線維芽細胞の伸長を示す。MCF-7と線維芽細胞の共培養では,腫瘍間質モデルとして,追加因子による共培養の影響の分析を可能にする。細胞核()とアクチン骨格()を染色した。スケールバー:100μm。

3T3線維芽細胞:Thioglycerol添加(コントロール)

A:MCF-7細胞の単培養

3T3線維芽細胞:RGDペプチド添加

B:線維芽細胞の単培養

3T3線維芽細胞:RGDペプチド添加

C:MCF-7と線維芽細胞の共培養

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製品の種類

商品コードをクリックすると価格表がご覧いただけます。調製済みのユーザー分解性,細胞分解性のハイドロゲルを作製する3-D Life ToGro Hydrogelについては,品名をクリックすると製品の詳細がご覧いただけます。

品名 ポリマー 架橋剤 商品コード ゲル化速度 Dextranase分解性 細胞分解性
3-D Life Dextran-PEG Hydrogel FG Mal-Dextran PEG-Link FG90-1 Fast
3-D Life Dextran-CD Hydrogel FG Mal-Dextran CD-Link FG91-1
3-D Life PVA-PEG Hydrogel FG Mal-PVA PEG-Link FG80-1
3-D Life PVA-CD Hydrogel FG Mal-PVA CD-Link FG81-1
3-D Life Dextran-PEG Hydrogel SG SG-Dextran PEG-Link G92-1 Slow
3-D Life Dextran-CD Hydrogel SG SG-Dextran CD-Link G93-1
3-D Life Dextran-HyLink Hydrogel SG SG-Dextran HyLink G95-1
3-D Life PVA-PEG Hydrogel SG SG-PVA PEG-Link G82-1
3-D Life PVA-CD Hydrogel SG SG-PVA CD-Link G83-1
3-D Life PVA-HyLink Hydrogel SG SG-PVA HyLink G85-1
3-D Life ToGro Hydrogel RGD-Dextran CD-Link G94-1 Preconfigured


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特長

  • マレイミド修飾ポリマーとして,ポリビニルアルコール(Polyvinyl Alcohol:PVA)と,デキストラン(Dextran)の2種類があります。
  • PVAベースのハイドロゲルは安定で重合後に分解できませんが,デキストランベースのハイドロゲルはデキストラナーゼ*1を用いて分解できます。培養後に細胞を回収したい場合(抗体を用いた免疫染色など)に適しています。
  • クロスリンカーとして,ポリエチレングリコール(Polyethylene Glycol)PEG-Linkと,PEGにMMP切断ペプチドを付加したCD-Link,ヒアルロン酸のHyLinkの3種類があります。CD-Linkにより重合したハイドロゲルは,細胞が産生するMMPによって分解するため,三次元培養における細胞移動,伸長,浸潤などの解析に適しています。
  • ポリマーとクロスリンカーの反応時のpHや濃度を変更することで,ゲル化速度やゲル硬度を簡単に調節できます。また,ペプチドやタンパク質の添加も可能です。
  • N末端にシステイン残基を持つペプチドを用いて,共有結合によりゲルを修飾することもできます*2
  • ゲル内の細胞は,光学顕微鏡や位相差顕微鏡,共焦点レーザー顕微鏡,蛍光顕微鏡などで観察できます。
  • ゲルは低分子を透過するため,二次元培養で用いられている,細胞固定法や標識法を使用できます*3
  • ポリマーとクロスリンカーは細胞と結合せず,また細胞の増殖も阻害しません。
  • MDCK, HeLa, T47D, NIH3T3など,多くの細胞種で使用できます。

*1:デキストラナーゼはキットに含まれていません。別途ご用意下さい。
*2:共有結合の形成に必要な修飾条件については,当社テクニカルサポート(試薬担当)までお問い合わせ下さい。
*3:抗体などの高分子は,ゲルを透過できないため使用できません。


ポリマーの種類と適用

ポリマーの種類 PVA
ハイドロゲル
Dextran
ハイドロゲル
共有結合によるペプチド修飾
PEG-Link(stable)/CD-Link(cell degradable)クロスリンカーを用いた架橋
低分子色素を用いた細胞の標識
ユーザーによる分解 *4
細胞の生化学的解析 *4
細胞の回収および継代 *4
免疫染色
長期培養における安定性 +/-

*4 ゲルがCD-Linkを含有し,トリプシンにより消化した場合にのみ可能です。

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製品の構造

PEG-Link,CD-Linkの構造

チオ反応性基で官能化されたポリマー(PVA またはDextran)の構造

クロスリンカー(架橋剤)PEG-Link,CD-Link,HyLinkの構造

  • PEG-Linkは,2つの末端チオール基が結合した線状PEGポリマーで構成されています。
  • CD-Linkは,末端に結合した細胞分解性ペプチド,および2つの末端に結合したチオール基を持つ線状PEGポリマーで構成されています。
  • HyLinkは,骨格に沿って複数のチオール基が結合したヒアルロン酸ポリマーで構成されています。

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ハイドロゲルの形成原理

ハイドロゲル形成

修飾ペプチドを用いたハイドロゲル形成のイメージ図

  • A. クロスリンカーの種類による3-D Life PVA Hydrogelの重合の違い。PEG-Linkで重合したハイドロゲルは安定で分解することなく,細胞は移動できない。
  • B:MMP切断ペプチドを持つCD-Linkで重合したハイドロゲルは,細胞が産生するMMPにより分解され,網目構造が緩くなるため,ゲル中での細胞移動が可能となる。

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操作方法概略

Hydrogel Kitの操作方法概略
  1. Maleimide-polymer,Conjugation buffer,水(Cell biology grade),修飾用ペプチドを混合し,インキュベートする。
  2. 1. の混合液に培養細胞を添加後,培養プレート上でThiol crosslinkerと混合,ピペッティングする。
  3. ゲル化を確認後,ゲルを完全に覆うように培養液を添加し,培養する。

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キット内容

キットの商品コードをクリックすると価格表がご覧いただけます。リンクを設けたコンポーネント名をクリックすると単売品の価格表がご覧いただけます。

種別 Fast Gelling Slow Gelling Thiol-Reactive Polymerセット品
品名 Dextran PVA Dextran PVA FG SG
-PEG FG -CD FG -PEG FG -CD FG -PEG SG -CD SG -HyLink -PEG SG -CD SG -HyLink -PVA -Dextran -PVA -Dextran
商品コード FG90-1 FG91-1 FG80-1 FG81-1 G92-1 G93-1 G95-1 G82-1 G83-1 G85-1 M82-3 M92-3 M81-3 M91-3
キット
内容
Maleimide-Dextran
SG-Dextran
Maleimide-PVA
SG-PVA
PEG-Link
CD-Link
HyLink
CB (pH 5.5)
CB (pH7.2)
Water

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製品案内/ユーザーガイド

下記の画像をクリックすると,それぞれ3-D Life Hydrogelの製品案内,ユーザーガイドおよび3-D Life Hydrogel Kitのプロトコルがダウンロードいただけます。

Hydrogelの製品案内

3-D Life Hydrogel
製品案内

ユーザーガイド

ユーザーガイド

プロトコルFast

3-D Life Fast Gelling Hydrogels

プロトコルSlow

3-D Life Slow Gelling Hydrogels

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価格

3-D Life Fast Gelling Hydrogels

[在庫・価格 :2022年05月17日 12時51分現在]

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3-D Life Dextran-PEG Hydrogel FG Kit
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※輸入諸費用(1回のご注文につき80,000円)を別途いただく製品です。 三次元培養用の生体模倣ゲル。ゲル化速度:Fast。キット内容:Maleimide-Dextran, PEG-Link, CB(pH 5.5), Water。
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掲載カタログ ニュース2021年2月15日号 p.8
ニュース2019年2月15日号 p.17

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3-D Life Slow Gelling Hydrogels

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3-D Life Dextran-PEG Hydrogel SG
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3-D Life Dextran-CD Hydrogel SG
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3-D Life Dextran-HA Hydrogel
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3-D Life PVA-PEG Hydrogel SG
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3-D Life PVA-CD Hydrogel SG
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3-D Life PVA-HA Hydrogel
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3-D Life Dextran-CD Hydrogel SG

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3-D Life Dextran-HA Hydrogel

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3-D Life PVA-PEG Hydrogel SG

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3-D Life PVA-CD Hydrogel SG

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3-D Life PVA-HA Hydrogel

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3-D Life FG-Dextran Set (3×170μl)
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3-D Life FG-PVA Set (3×170μl)
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3-D Life FG-PVA Set (3×170μl)

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3-D Life SG-Dextran Set (3×170μl)

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3-D Life SG-PVA Set (3×170μl)

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[在庫・価格 :2022年05月17日 12時51分現在]

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3-D Life RGD Peptide
3~4週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 3
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※輸入諸費用(1回のご注文につき80,000円)を別途いただく製品です。 3-D Life PVA Hydrogel(#09-G-001)の修飾に用いるRGDペプチド。M.W.:1,022,純度:>90%(HPLC)
別包装品 別包装品あり
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3-D Life RGD Peptide
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※輸入諸費用(1回のご注文につき80,000円)を別途いただく製品です。
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製品記事 三次元培養(3D culture)製品特集
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3-D Life Scrambled RGD Peptide
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※輸入諸費用(1回のご注文につき80,000円)を別途いただく製品です。 3-D Life PVA Hydrogel(#09-G-001)の修飾に用いるRGDペプチドのネガティブコントロール。M.W.:1,022,純度:>90%(HPLC)
別包装品 別包装品あり
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3-D Life Scrambled RGD Peptide
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[在庫・価格 :2022年05月17日 12時51分現在]

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3-D Life RGD Peptide

文献数:3

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3-D Life RGD Peptide

文献数:3

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文献数:0

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別包装品 別包装品あり
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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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