細胞培養液中の過酸化水素(H2O2)濃度測定キット Hydrogen Peroxide Cell-Based Assay Kit
掲載日情報:2018/01/10 現在Webページ番号:3784
細胞培養液中の過酸化水素濃度を、過酸化水素に高感度でかつ安定なプローブであるADHP(10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine)を用いた蛍光法により、迅速に測定するキットです。過酸化水素(H2O2)やスーパーオキシドなどの活性酸素種(ROS)は、食細胞により生成され、侵入する微生物やその他の生物学的ターゲットの損傷に関与します。

左:H2O2の検量線の例
右:RAW264.7細胞におけるIFNγとLPS添加によるH2O2の産生
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特長
- 細胞培養液中のH2O2を簡便に測定できます。
- キットにはH2O2のスカベンジャーであるカタラーゼが含まれています。
- 測定方法:蛍光法
- 測定波長:励起 530~560 nm/蛍光 590 nm
- 測定時間:1時間以内
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測定原理
HRP(horseradish peroxidase)の触媒反応により、ADHPは細胞培養液中のH2O2と1:1で反応して高い蛍光性を発するレゾルフィン(resorufin)を生成します。レゾルフィン量(=H2O2量)は、励起波長530~560 nm、蛍光波長 590 nmの蛍光強度の測定により決定されます。H2O2などやスーパーオキシドなどの活性酸素種(ROS)は、食細胞によって生成され、侵入する微生物や他の生物額的標的に損傷を与えます。本製品は、ROSによる免疫細胞の殺菌力の評価に有用です。
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関連製品
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品名 | 商品コード | 測定方法 | 測定波長 | 製品概要 |
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Hydrogen Peroxide Cell-Based Assay Kit | 600050 | 蛍光 | 励起 530 nm /蛍光 590 nm |
細胞培養液中の過酸化水素濃度を、ADHを用いた蛍光法により、迅速かつ高感度で測定するキット |
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操作方法概略
■試薬の調製
1. 超純水100 mlにCell-Based Assay Buffer Tabletを溶解する。
2. 超純水にCell-Based Assay Hydrogen Peroxide Standardを加えて1:1,000倍希釈液を調製する。
※ H2O2は不安定のため、H2O2保存溶液は使用前に調製して下さい。
3. 石英キュベットに調製したH2O2保存溶液を加えて、240 nmの吸光度を測定する。濃度(M)を、吸光度×希釈率/43.6により決定する。
算出したH2O2保存溶液の濃度に基づいて、希釈により1 mMのH2O2(×100 Working solution)を調製し、プロトコルに従って段階希釈(10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0μM)する。
4. Cell-based catalase assay catalase 2 mgをAssay buffer 500μl(96 wellキットの場合)に溶解し、Catalase solutionを調製する。
5. Cell-Based assay hydrogen peroxide detector ADHP 100μlおよびCell-based horseradish 100μlをAssay buffer 800μlに溶解し、Enzyme reaction solutionを調製する。このEnzyme reaction solutionは氷上で調製後最大1時間安定です。
■測定
1. 96-wellプレートに無血清培地100μl中104~105 cells/wellの細胞を播種する。必要に応じて、薬剤またはビークルコントロールを培地に添加する。コントロールは、細胞を播種していない実験用化合物を含んだ培地を用いる。
※ カタラーゼのコントロールウェルを別に設定して下さい。
※ 測定は、トリプリケート(同一条件で3点の測定)で実施することをお勧めします。
2. 細胞を37℃で24~48時間または設定した実験条件に従って培養する。96-well培養用プレートを400×gで5分間遠心分離する。
3. 各ウェルから上清80μlを取り出し、新しい96 well黒色プレートに添加する。各ウェルにAssay buffer(試料の活性測定用)またはCatalase solution(特異性試験用)10μlを添加する。
4. 各ウェルにEnzyme reaction solution 10μlを添加する。
5. 5分以内に、蛍光強度(励起 530 nm/蛍光 590 nm)を測定する。
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キット内容
- Cell-based assay buffer tablet
- Cell-based assay hydrogen peroxide standard
- Cell-based assay hydrogen peroxide detector ADHP
- Cell-based assay horseradish peroxide
- Cell-based assay catalase
※ 測定には蛍光プレートリーダーが必要です。
※ キットに96 well培養用プレートおよび96 well黒色プレートは含まれていません。別途ご用意下さい。
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価格
[在庫・価格 :2025年02月07日 09時55分現在]
詳細 | 商品名 |
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Hydrogen Peroxide Assay Kit, Cell-Based |
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Hydrogen Peroxide Assay Kit, Cell-Based |
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[在庫・価格 :2025年02月07日 09時55分現在]
Hydrogen Peroxide Assay Kit, Cell-Based
文献数: 0
- 商品コード:600050
- メーカー:CAY
- 包装:96tests
- 価格:¥25,000
- 在庫:無(未発注)
- 納期:2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等:医薬用外劇物
説明文 | 測定試料:細胞,検出方法:蛍光,測定波長:530~560/590 nm,アッセイ法:Assay,アッセイ数:96 tests |
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別包装品 | 別包装品あり | ||||||
法規制等 | 医薬用外劇物 | ||||||
保存条件 | 4℃,-20℃ | 法規備考 | |||||
掲載カタログ |
ニュース2018年9月15日号 p.12 ニュース2024年2月1日号 p.17
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製品記事 | ROS Detection Cell-Based Assay Kit (DHE) 過酸化水素検出用プローブとスタンダード 活性酸素種(Reactive Oxygen Species、ROS)関連製品特集 |
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- 商品コード:600050
- メーカー:CAY
- 包装:480tests
- 価格:¥91,800
- 在庫:無(未発注)
- 納期:2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等:医薬用外劇物
説明文 | 測定試料:細胞,検出方法:蛍光,測定波長:530~560/590 nm,アッセイ法:Assay,アッセイ数:480 tests |
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別包装品 | 別包装品あり | ||||||
法規制等 | 医薬用外劇物 | ||||||
保存条件 | 4℃,-20℃ | 法規備考 | |||||
掲載カタログ |
ニュース2018年9月15日号 p.12
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製品記事 | 過酸化水素検出用プローブとスタンダード 活性酸素種(Reactive Oxygen Species、ROS)関連製品特集 |
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