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汎用性の高いクローニングシステム StarGate Cloning System

掲載日情報：2021/08/16 現在Webページ番号：3685

アイビーエー /
IBA GmbH
[メーカー略称：IBA]

E. coli、 酵母、哺乳動物細胞、昆虫細胞で目的タンパク質を発現する Destination vector を相同組換えにより作製するシステムです。様々な種類の発現ベクターを、簡便な操作で効率良く構築できます。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

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特長

  • 目的の遺伝子断片を Entry vector に挿入して Donor vector を構築した後、Donor vector と Acceptor vector との相同組換えにより Destination vector を構築します。
  • 目的遺伝子は 4 塩基のアダプター配列を付加して Entry vector に組み込まれるため、目的外のアミノ酸配列の付加が抑えられます。
  • 発現宿主（ E. coli、酵母、哺乳動物細胞、昆虫細胞）、シグナル配列（OmpA）、 融合タグ（Strep-tag II、6 × His タグ、GST タグ、FLAG タグ） が異なる 114 種類の Acceptor vector がラインナップされています。
  • 一度 Donor vector を作製した後は Acceptor vector を変えることにより、発現宿主やシグナル配列、およびタグが異なる目的タンパク質の発現ベクターを構築できます。
  • Entry vector への挿入、 および Donor vector と Acceptor vector の相同組換え反応は、それぞれ1 チューブ内で行うことができます。

各種 Acceptor Vectorの特長

ベクター 宿主 特長
pASG-IBA E. coli tetA プロモーター／オペレーターを有し、anhydrotetracycline（AHT）により誘導発現するため、宿主に対して細胞毒性のあるタンパク質でも発現可能。OmpA シグナル配列によるペリプラズム発現用ベクターも選択可能。
pPSG-IBA pPSG-IBA T7 プロモーターを有し、in vitro 転写／翻訳反応に有用。
pESG-IBA 哺乳動物細胞 CMV プロモーターを有し、高効率の恒常的発現が可能。
pCSG-IBA CMV プロモーターを有する。EBV 由来の oriP と EBNA-1 を有し、エピゾーマルに複製するため、安定発現細胞株を樹立せずに目的タンパク質を安定的に発現する細胞を得ることが可能。
pLSG-IBA 昆虫細胞 ポリヘドリンプロモーターを有する。
pYSG-IBA 酵母 酵母CUP1 プロモーターを有し、銅イオンにより誘導発現を行う。

各種シグナル配列・タグ

シグナル配列 OmpA 目的タンパク質をペリプラズムで可溶性タンパク質として分泌発現する。
BM40 目的タンパク質を細胞培養上清に分泌させる。
融合タグ Strep-tagⅡ Strep-tag/Strep-Tactin System によるタンパク質精製が可能。
One-STrEP One-STrEP Kit によるタンパク質相互作用の解析が可能。
6 × His タグ Ni-NTA マトリクス（QIAGEN 社製品）によるタンパク質精製が可能。
GST タグ PreScission Protease（GE Healthcare 社製品） により切断可能なGST タグを融合する。
FLAG タグ Anti-FLAG M2 agarose（Sigma-Aldrich 社製品） による精製が可能。

※Strep-tag / Strep-Tactin System の詳細は「Strep-Tactinカラム／レジン」または「Strep-Tactin XT システム」をご覧下さい。

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製品ラインナップ

商品コードをクリックすると製品の詳細をご覧いただけます。

宿主 E. coli 哺乳類 酵母 昆虫細胞 分泌発現 N末端 C末端
プロモーター tet CMV CUP1 ポリヘドリン
Vector pASG pDSG(MEXi) pCSG pESG pYSG pLSG
IBAwt1 5-4000-001 5-5200-001 5-5000-001 5-4400-001 5-4600-001 5-4800-001 no
IBA5 5-4005-001 － 5-5005-001 5-4405-001 － 5-4805-001 no Strep-tag Ⅱ
IBA105 5-4105-001 5-5222-001 5-5105-001 5-4505-001 5-4705-001 5-4905-001 no Twin-Strep-tag
IBA3 5-4003-001 － 5-5003-001 5-4403-001 5-4603-001 5-4803-001 no Strep-tag Ⅱ
IBA103 5-4103-001 5-5220-001 5-5103-001 5-4503-001 5-4703-001 5-4903-001 no Twin-Strep-tag
IBA45 5-4045-001 5-5214-001 5-5045-001 5-4445-001 5-4645-001 5-4845-001 no Strep-tag Ⅱ 6×His-tag
IBA145 5-4145-001 － 5-5145-001 5-4545-001 5-4745-001 5-4945-001 no Twin-Strep-tag 6×His-tag
IBA43 5-4043-001 5-5211-001 5-5043-001 5-4443-001 5-4643-001 5-4843-001 no 6×His-tag Strep-tag Ⅱ
IBA143 5-4143-001 － 5-5143-001 5-4543-001 5-4743-001 5-4943-001 no 6×His-tag Twin-Strep-tag
IBA23 5-4023-001 － 5-5023-001 5-4423-001 5-4623-001 5-4823-001 no GST-tag Strep-tag Ⅱ
IBA123 5-4123-001 － 5-5123-001 5-4523-001 5-4723-001 5-4923-001 no GST-tag Twin-Strep-tag
IBA62 5-4062-001 － 5-5062-001 5-4462-001 5-4662-001 5-4862-001 no Flag-tag Strep-tag Ⅱ
IBA162 5-4162-001 － 5-5162-001 5-4562-001 5-4762-001 5-4962-001 no Flag-tag Twin-Strep-tag
IBA64 5-4064-001 － 5-5064-001 5-4464-001 5-4664-001 5-4864-001 no Strep-tag Ⅱ Flag-tag
IBA164 5-4164-001 － 5-5164-001 5-4564-001 5-4764-001 5-4964-001 no Twin-Strep-tag Flag-tag
IBA167 5-4167-001 － 5-5167-001 5-4567-001 5-4767-001 5-4967-001 no Twin-Strep-tag
Flag-tag
IBA168 5-4168-001 － 5-5168-001 5-4568-001 5-4768-001 5-4968-001 no Twin-Strep-tag
Flag-tag
IBAwt2 5-4001-001 5-5201-001 5-5001-001 5-4401-001 － 5-4801-001 yes
IBA4 5-4004-001 － － － － － yes Strep-tag Ⅱ
IBA104 5-4104-001 5-5221-001 5-5104-001 5-4504-001 － 5-4904-001 yes Twin-Strep-tag
IBA2 5-4002-001 － － － － － yes Strep-tag Ⅱ
IBA102 5-4102-001 5-5219-001 5-5102-001 5-4502-001 － 5-4902-001 yes Twin-Strep-tag
IBA44 5-4044-001 － － － － － yes Strep-tag Ⅱ 6×His-tag
IBA144 5-4144-001 － 5-5144-001 5-4544-001 － 5-4944-001 yes Twin-Strep-tag 6×His-tag
IBA142 － － 5-5142-001 5-4542-001 － 5-4942-001 yes 6×His-tag Twin-Strep-tag


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操作法概略

■ Entry Reaction

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■ Transfer Reaction

Transfer Reactionの操作法概略イメージ

■ Entry Reaction（Standard Kit の場合）

  1. 目的遺伝子を、アダプター配列を含むプライマーを用いて PCR で増幅する。
  2. PCR 産物、StarSolution E と Entry vector を反応させて、Donor vector を作製する。
  3. 作製した Donor vectorをコンピテントセルに導入後、インキュベートし、増幅したDonor vector をミニプレップする。

■ Entry Reaction（Mutagenesis Kit の場合）

  1. アダプター配列（MFN）と内部配列（MRN）を含むプライマー、および変異配列（MFC）とアダプター配列（MRC）を含むプライマーを用いて個別にPCR を行い、目的遺伝子を増幅する。
  2. 2 種類の PCR産物、StarSolution Mと Entry vectorを反応させて、Donor vector を作製する。
  3. 作製した Donor vector をコンピテントセルに導入後、インキュベートし、増幅した Donor vector をミニプレップする。

■ Transfer Reaction（共通）

  1. Donor vector, StarSolution A1, A2, A3 と Acceptor vector を反応させ、相同組換え反応でDestination vector を作製する。
  2. 作製した Destination vector をコンピテントセルに導入し、インキュベート後、増幅した Destination vector をミニプレップする。

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StarGate ENTRY Vector価格表

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StarGate ENTRY Vector pENTRY-IBA51

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pCSG-IBA62, StarGate Acceptor Vector

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pCSG-IBA64, StarGate Acceptor Vector

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pCSG-IBA102, StarGate Acceptor Vector

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pCSG-IBA167, StarGate Acceptor Vector

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