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タンパク質複合体の精製システム One-STrEP/One-TAP System

掲載日情報:2008/11/04 現在Webページ番号:3271

ストレプトアビジンに結合するユニークなタグ(One-STrEP-tag) とストレプトアビジン変異体タンパク質(Strep-Tactin)との可逆的な結合を利用して,目的因子(bait)と相互作用するタンパク質(prey)と複合体を簡便に精製するシステムです。One-STrEP システムは 1 ステップで,One-TAP システムは 2 ステップで複合体を精製します。

特長

  • キットに含まれるバッファーは生理的条件に近く,穏やかな条件で複合体を精製できます。
  • One-STrEP システムは迅速に複合体を精製できます。低濃度のビオチンを含む穏和な条件で溶出するため,結合力の弱い prey タンパク質を含む複合体の精製に適しています。また,複合体の機能や立体構造を保持したまま精製することも可能です。
  • One-TAP システムは,2 回の精製工程を経ることにより,One-STrEP システムよりも優れたシグナル/ノイズ比(S/N 比)で精製できます。また,より強固に複合体を形成している prey タンパク質の精製に適しています。
  • 哺乳動物細胞用と,E. coli 用の製品があります。いずれも,One-STrEP-tag を bait タンパク質の C 末端に融合させて発現するベクターと,N 末端に融合させて発現するベクターが含まれています。
  • 哺乳動物細胞用製品に含まれる発現ベクターの pESG-IBA は,CMV プロモーターにより One-STrEP-tag 融合組換え体 bait タンパク質を高レベルで恒常的に発現できます。また,ネオマイシン耐性遺伝子を含むため,安定化細胞の樹立が可能です。
  • E. coli 用製品に含まれる発現ベクターの pASG-IBA は tetA オペロンを含み,無水テトラサイクリン(AHT)による誘導発現が可能なため,宿主に対して細胞毒性を示す bait タンパク質でも発現可能です。
  • 相同組換えを利用した StarGate Cloning System により,簡便に発現ベクターのクローニングを行えます。



MEMO

One-STrEP-tagとは


One-STrEP-tag は,ストレプトアビジンに結合する 8 アミノ酸残基(Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)から成る StreptagII を改変したタグで,bait-prey 複合体の精製に大変便利なツールです。Strep-tagIIからの改変により,発現量の少ない bait-prey 複合体でも効率良く精製できるようになっています。また,Strep-tagII に比べ,様々な界面活性剤を含むバッファー中でも使用できるため,複合体の精製に最適なバッファー条件を検討できます。


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原理

キットに含まれる発現ベクターに bait タンパク質をコードする DNA 断片を挿入し,One-STrEP-tag を有する組換え体 bait タンパク質を哺乳動物細胞,または E. coli で発現させ,細胞中で bait-prey 複合体を形成させます。One-STrEP システムでは Strep-Tactin 固相化カラムにより 1 ステップで複合体を精製します。One-TAP システムでは,引き続き One-STrEP-tag のモノクローナル抗体である StrepMAB Classic を固相化したカラムにより 2 ステップで複合体を精製します。


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キット内容

  • StarGate Standard Entry Cloning Kit
  • StarGate Transfer Reagent Set
  • Acceptor vectors*1, *2
  • Gravity flow Strep-Tactin Superflow column(0.2 ml, 1 ml)
  • Gravity flow StrepMAB-Classic MacroPrep column(One-TAP Set のみ)
  • StrepMAB-Classic HRP conjugate
  • Avidin
  • Strep-tag II peptide(One-TAP Set のみ)
  • Buffers
  • Control donor vector
  • AHT( E. coli 用製品のみ)
  • PP2Ac affinity-purified goat polyclonal antibody(哺乳動物細
  • 胞用製品のみ)

*1哺乳動物細胞用製品:pESG-IBA105, pESG-IBA103
*2 E. coli 用製品:pASG-IBA105, pASG-IBA103
すべてのキット構成品は,単独製品としても取り扱っています。

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価格

[在庫・価格 :2020年06月04日 23時08分現在]

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One-STrEP Set, for Mammalian Cell
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Standard Entry Cloning Kit, StarGate (20reactions)

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  • 商品コード:5-1601-000
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One-STrEP Purification Kit, Mammalian

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  • 商品コード:2-1121-011
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  • メーカー:IBA
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  • 商品コード:2-1003-100
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(テクニカルサポート 試薬担当)

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