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付着細胞、浮遊細胞いずれにも高い導入効率のトランスフェクション試薬 GenePORTER / GenePORTER 2 Transfection Reagent

掲載日情報:2008/07/28 現在Webページ番号:3061

付着細胞、浮遊細胞のいずれにも高い効率で遺伝子を導入できるトランスフェクション試薬です。Direct Hydrophilic Conjugation(DHC) Technology による特殊な構造を持つ陽イオン性脂質と、中性脂質 DioleylPhosphatidyl-Ethanolamine(DOPE) から構成されており、多くの脂質性試薬や高分子ポリマーより高い導入効率を示します。

GenePORTER 2 は、GenePORTER に導入効率をより増大させるユニークな DNA diluent buffer を加えた製品です。

トランスフェクション試薬をお探しの方必見! トランスフェクション試薬選択ガイドはこちらをご覧ください。

特長

  • 試薬は乾固したフィルム状の GenePORTER と溶解用バッファーからなり、ボルテックスで 10 秒間懸濁して使用します。超音波処理は必要ありません。
  • 未使用の試薬は冷蔵保存で 1 年間、溶解した試薬は冷蔵下で 3 か月間安定です。
  • 多くの細胞株(例:HeLa S3, 293, NIH3T3, B16-F0, BHK-21, CHO-K1, CV-1, COS-1, COS-7)への導入に成功しています。
  • GenePORTER は、Jurkat 細胞で特に優れた導入効率を示します。また、オリゴヌクレオチドの導入にも適しています。
  • GenePORTER 2 は、DNA diluent buffer を用いることにより、血清を含む培地、含まない培地のいずれにおいても高い効率で遺伝子を導入できます。更に、導入が困難な細胞株(PC-12, マクロファージ、初代培養細胞など)でも良好な結果が得られます。
  • QuickEase Single-Use Tube は、GenePORTER を各チューブにあらかじめ分注してあり、大変便利です。



マクロファージへの導入例

GFP 遺伝子を挿入したローダミン標識 pGeneGrip ベクターを、GenePORTER 2 により RAW267.4 細胞へ導入し、24時間後に蛍光顕微鏡で観察した。図 A. より、導入効率は約80%で、図B. より約50%の細胞が GFP を発現していることがわかった。

他社製品との導入効率比較

lacZ 遺伝子を組み込んだベクターをそれぞれの細胞株へ導入し、48時間後にβ-galactosidase アッセイを行い導入効率を比較した。

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実験例

付着細胞(60mm ディッシュ)の場合
  1. 導 入日に60〜90%コンフルエントになるように、細胞をディッシュに移します。
  2. 約 6〜8μg の DNA を 1ml の無血清培地で希釈します。
  3. 約 30〜40μl の GenePORTER を 1ml の無血清培地で希釈します。
  4. 2. と 3. の溶液を混合してすばやく撹拌し、室温で 10〜45分インキュベートします。
  5. ディッシュから培地を除き、4. の溶液を加えて 37℃で 3〜5 時間インキュベートします。
  6. インキュベート後、2 ml の 20% FCS 添加培地を加え、5〜10% CO2 , 37℃で一晩培養します。

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キット内容

  • GenePORTER lipid film
  • Hydration buffer
  • DNA diluent buffer(GenePORTER 2 のみ)
  • New DNA diluent B(GenePORTER 2 のみ)

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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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