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可溶性・不可溶性コラーゲンの定量キット Sircol Soluble / Insoluble Collagen Assay Kit

掲載日情報:2024/11/21 現在Webページ番号:2295

生体試料中の可溶性または不可溶性コラーゲンを定量するキットです。

可溶性コラーゲン定量キット(Sircol-2.0 Soluble Collagen Assay Kit、#SIRC2)は、従来品(Sircol Soluble Collagen Assay Kit(Original)with Bovine Standard、#S1000、#S5000)に比べて感度と簡便性が向上しています。ヒドロキシプロリン(Hydroxyproline)測定に代わる分析法として適しています。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

Sircol-2.0 Soluble  Collagen Assay Kit(#SIRC2)イメージ

Sircol-2.0 Soluble Collagen Assay Kit(#SIRC2)イメージ

96 wellフォーマットアッセイとなり、従来のキットに比べて感度が向上し、より簡便になりました。

コラーゲン(Collagen)について

コラーゲンとは

コラーゲンは、三重らせん構造のドメインを少なくとも一つ以上持つタンパク質です。これらはα鎖と呼ばれる3本のポリペプチドから構成されており、α鎖はGly-X-Yで表されるアミノ酸配列の繰り返しで成り立っているのが特徴です(Glyはグリシン、XとYは任意ですが、Xにはプロリン、Yにはヒドロキシプロリンが高頻度で出現します。)


コラーゲンの種類と機能

これまでに28種類以上のコラーゲンが同定されていますが、Ⅰ型コラーゲンが最も広汎に分布しており、特に靭帯、腱、皮膚、骨組織などによく見られます。また、コラーゲンには生化学的機能もあり、細胞の成長、増殖、分化に影響を与えます。このような機能を果たすコラーゲンは合成後の経過が浅く、また架橋が進んでいないものが多いために冷酸や酵素消化で容易に可溶化されることから可溶性コラーゲンと呼ばれます。コラーゲンの架橋反応が進行すると酸や酵素消化に対しても不溶性になります。
Biocolor社のSircol Collagen Assay Kitシリーズには、可溶性コラーゲンと不溶性コラーゲンのそれぞれを簡便に測定できるキットがあり、目的に応じてこれらのキットを使い分けることができます。


コラーゲンの応用

コラーゲンはその多様な特性により、さまざまな産業で活用されています。医学の分野では創傷治癒の役割を果たしており、生物医学では組織工学および細胞培養で必要不可欠となっています。化粧品業界では肌の若返りとして人気が高まっており、化学製剤や食品業界では機能性食品サプリメントや添加物として使用されています。


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測定原理

シリウスレッドの分子構造

シリウスレッド(Sirius Red)の化学構造式

シリウスレッドの吸光特性

シリウスレッドの吸光特性

キット中のDye reagentには陰イオン性の色素であるシリウスレッド(Sirius Red)が含まれています。この色素は側鎖にスルホン酸基を含む直鎖上の構造をしています(上図参照)。本キットの反応条件下で、この色素は可溶性コラーゲンの塩基性部分に結合します。コラーゲンの基本構造であるトロポコラーゲンは[グリシン―アミノ酸X―アミノ酸Y(Gly-X-Y)]という規則的な配列によるらせん構造を形成するため、コラーゲンの三重らせん構造が完全であるほどSircol dyeの結合が強くなります。
Sircol 2.0-Soluble Collagen Assay Kit(#SIRC2)は、Dye reagentの配合の改良により、従来のSircol Soluble Collagen Assay(#S1000、#S5000)と比べて染料とコラーゲンの特異性および測定感度が向上し、またより簡便化されています(Sircol 2.0 Quickstart Guide)。


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特長

  • プロテオグリカン、トロポエラスチン、その他可溶性細胞外マトリックス(ECM)物質存在下でも測定できます。
  • Sircol 2.0-Soluble Collagen Assay Kit/Sircol Soluble Collagen(Original)Assay Kitは、細胞培養上清または軟骨などの組織中の希酸および希酸−ペプシン可溶性コラーゲンを個別に測定できます。
  • Sircol Soluble Collagen Assay Kitを用いた希酸−ペプシン処理の残渣中の不溶性コラーゲンは、Fragmentation reagent(#SFRAG)を用いることで温和な条件で変性し、Dye reagentによって定量できます。また、測定結果から試料中の可溶性・不溶コラーゲンの含有比および全コラーゲン量を算出できます。濃酸や濃アルカリ処理は不要です。
  • 可溶性、不溶性コラーゲンの分別定量には、Sircol Soluble Collagen Assay Kit(#S1000)とSircol Insoluble Collagen Assay Kit(#S2000)を組み合わせた、お得なCombination pack(#S4000)もあります。
  • 可溶性コラーゲン測定は約1.5時間、不溶性コラーゲン分析は約4時間、また天然の不溶性コラーゲンから可溶性コラーゲンへの変性は1日以内で行えます。

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製品ラインナップ

商品コードをクリックすると各製品の価格表、検量線例の画像をクリックすると拡大画像をご覧いただけます。

測定対象 哺乳類*1由来の可溶性コラーゲン*2 哺乳類由来*1の不溶性コラーゲン
品名 Sircol 2.0-Soluble
Collagen Assay Kit
Sircol Soluble(Original) Collagen Assay Kit Sircol Insoluble
Collagen Assay Kit
with Bovine Standard
Regular size Large Economy Regular size Large Economy
商品コード SIRC2 S1000 S5000 S2000 S6000
検量線例 Sircol 2.0-Soluble Collagen Assay Kit検量線例 Sircol Soluble Collagen Assay Kit(Original)検量線例<br>0~15 μg、250 μl Alkari reagent使用 Sircol Insoluble Collagen Assay Kit検量線例
Sircol Soluble Collagen Assay Kit(Original)検量線例
アッセイ数 96 110 440 100 400
測定試料
  • in vivo:組織、軟骨、体液
  • in vitro:2D/3D培養細胞外マトリックスおよび馴化培地
  • 組織、骨、石灰化組織*3

測定範囲 2~200 μg/ml
(または0.25~20 μg/ml*4
10~150 μg/ml
(または10~500 μg/ml *5
100~1,000 μg/ml
検出限界 2 μg/ml
(または0.25 μg/ml*4
10 μg/ml 100 μg/ml
測定機器 マイクロプレートリーダー
測定方法 比色
測定波長 556 nm

  • *1 哺乳動物由来のスタンダードを用いてキャリブレーションしていますが、植物など界レベルで系統分類学的に異なる生物種由来のコラーゲンにも適用できます。ただし、哺乳動物以外では色素の結合力が低下するため、正確な測定には同種由来のスタンダードが必要になります。詳細は各製品マニュアルをご参照下さい。
  • *2 コラーゲンの可溶化には、事前に塩/酸/酸性ペプシンで溶解が必要な場合があります。
  • *3 急速な成長、発達、組織修復、リモデリング、創傷治癒の期間中において、新たに形成されたコラーゲン繊維の生成率の測定に有用です。
  • *4 オプションのコラーゲン濃縮プロトコルを使用した場合。詳細は製品マニュアルをご参照下さい。
  • *5 試料調製方法によって異なります。詳細は製品マニュアルをご参照下さい。

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操作方法概略


品名 Sircol 2.0-Soluble
Collagen Assay Kit
Sircol Solublet(Original)
Collagen Assay Kit
Sircol Insoluble
Collagen Assay Kit
Step 1 調製した試料をDye reagentとともにアッセイ用マイクロプレートのウェルに加える。30分間振とうするとコラーゲンと色素の複合体が沈殿物として形成されるため、遠心分離によってマイクロプレートウェルの底面に集める。 可溶性コラーゲンを含む試料にDye reagentを加えると、コラーゲンと染料の複合体が形成される。インキュベーション中に複合体は沈殿し、遠心分離後に未結合の色素を洗浄により除去する。 不溶性コラーゲン試料をFragmentation reagentで2~3 時間前処理する。これにより、不溶性コラーゲンが水溶性ゼラチンに変換される。
Step 2 未結合の色素を穏やかに吸引して除去し、続いてPlate wash reagentで洗浄する。 コラーゲンに結合した色素を溶出させ、マイクロプレートリーダー(556 nm)で測定する。 前処理済みの不溶性コラーゲン試料にDye reagentを加え、変性コラーゲン-色素複合体を形成させる。色素のインキュベーション中に複合体は沈殿し、その後の遠心分離で分離する。さらに洗浄により未結合の色素を除去する。その後、変性コラーゲンに結合した色素を溶出させ、マイクロプレートリーダー(556 nm)で測定する。
Step 3 さらに遠心分離を行い、Dye release reagentとインキュベートすることにより、コラーゲンに結合した色素を溶出する。溶出した色素をマイクロプレートリーダー(556 nm)で測定する。 キットに含まれるコラーゲンスタンダードを用いて作成した検量線と比較し、未知試料中のコラーゲン含有量を定量する。 キットに含まれる変性コラーゲンスタンダードを用いて作成した検量線と比較し、未知試料中の不溶性コラーゲン含有量を定量する。
Step 4 未知試料のコラーゲン含有量は、キットに付属のコラーゲンスタンダードを用いて作成した検量線と比較し、定量する。

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キット内容

商品コードをクリックすると各製品の価格表、製品外観の画像をクリックすると拡大画像をご覧いただけます。

品名 Sircol 2.0-Soluble Collagen Assay Sircol Soluble Collagen Assay(Original) Sircol Insoluble
Collagen Assay
with Bovine
Standard
製品外観 Sircol 2.0-Soluble Collagen Assay製品外観 Sircol Soluble Collagen Assay(Original)製品外観 Sircol Insoluble Collagen Assay製品外観
商品コード SIRC2 S1000 S5000 S2000 S6000
キット内容 Dye reagent*6
Alkali reagent
Reference standard*6
Fragmentation reagent
Plate wash reagent
Collagen concentration reagent
Neutralisation reagent
Dye release reagent
Assay microplate
Microplate seal
Acid-salt wash reagent
Acid neutralising reagent
Collagen isolation & concentration reagent
Micro-centrifuge tube
Screw-cap tube

*6 キットにより内容は異なります。
測定にはマイクロプレートリーダーが別途必要です。

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関連製品:変性コラーゲン検出試薬

各種病態マーカーとして注目される変性コラーゲンを簡便かつ高感度に検出する試薬です。抗体やコラーゲン染色剤とは異なり、変性コラーゲンを特異的に検出できるため、コラーゲンの生理・病理学研究に有用です。
詳細はBindCOL, biotin-conjugated(Denatured Collagen Detection Reagent)をご覧下さい。

変性コラーゲン検出試薬BindCOL, biotin-conjugated(Denatured Collagen Detection Reagent)

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FAQ

Q-1.感度はどのくらいですか?

A-1. コラーゲン1.0 μgです。Sircol Assayマニュアル記載のコラーゲン分離、濃縮方法を用いることで1 mlから1.0μg以下のコラーゲンの回収を行うことができます。

Q-2. 測定に要する時間はどのくらいですか?

A-2. 1.5時間です。

Q-3. どの形態のコラーゲンを測定できますか?

A-3. 酸可溶性およびペプシン可溶性コラーゲンです。

Q-4. どのようなタイプのコラーゲンに使えますか?

A-4. 哺乳動物由来のI~V型コラーゲンに使えます。

Q-5. 試料を測定する吸光度値は?

A-5. Sircol Dyeの最大吸収波長は556 nmですが、520~570nmの範囲であれば適正な測定値が得られます。

Q-6. Sircol Assayでどのように試料を調製すれば良いですか?

A-6. 細胞培地および組織試料の調製法の詳細については、アッセイマニュアルに記載されています。

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価格

Sircol 2.0-Soluble Collagen Assay Kit

[在庫・価格 :2025年02月16日 00時00分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
Sircol 2.0 SOLUBLE Collagen Assay Kit (96 assays)
2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • メーカーサイト
  • お問い合わせ
説明文
法規制等
保存条件 室温 法規備考
掲載カタログ

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[在庫・価格 :2025年02月16日 00時00分現在]

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Sircol 2.0 SOLUBLE Collagen Assay Kit (96 assays)

文献数: 0

説明文
法規制等
保存条件 室温 法規備考
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Sircol Soluble Collagen Assay Kit

[在庫・価格 :2025年02月16日 00時00分現在]

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詳細 商品名
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  • 包装
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  • 在庫
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納期 文献数
Sircol Collagen Assay Kit, with Bovine Standard
2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 876
  • 使用文献
  • メーカーサイト
  • お問い合わせ
説明文
コラーゲンと色素の特異的結合を基にして,可溶性コラーゲンの定量を行う。スタンダードとしてbovine collagenを含む。
別包装品 別包装品あり
法規制等 医薬用外劇物
保存条件 室温,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年8月合併号 p.14
ニュース2021年11月15日号 p.18

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2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 778
  • 使用文献
  • お問い合わせ
説明文
スタンダードとしてbovine skin collagenを含む。
別包装品 別包装品あり
法規制等 医薬用外劇物
保存条件 室温,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2019年10月1日号 p.29

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[在庫・価格 :2025年02月16日 00時00分現在]

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Sircol Collagen Assay Kit, with Bovine Standard

文献数: 876

説明文 コラーゲンと色素の特異的結合を基にして,可溶性コラーゲンの定量を行う。スタンダードとしてbovine collagenを含む。
別包装品 別包装品あり
法規制等 医薬用外劇物
保存条件 室温,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年8月合併号 p.14
ニュース2021年11月15日号 p.18

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文献数: 778

説明文 スタンダードとしてbovine skin collagenを含む。
別包装品 別包装品あり
法規制等 医薬用外劇物
保存条件 室温,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2019年10月1日号 p.29

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Sircol Insoluble Collagen Assay Kit

[在庫・価格 :2025年02月16日 00時00分現在]

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詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
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納期 文献数
Sircol Insoluble Collagen Assay Kit
ご照会下さい ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 25
  • 使用文献
  • お問い合わせ
説明文
法規制等
保存条件 室温,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年8月合併号 p.14
ニュース2021年11月15日号 p.18

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2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 25
  • 使用文献
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法規制等
保存条件 室温,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ

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[在庫・価格 :2025年02月16日 00時00分現在]

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Sircol Insoluble Collagen Assay Kit

文献数: 25

説明文
法規制等
保存条件 室温,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年8月合併号 p.14
ニュース2021年11月15日号 p.18

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文献数: 25

説明文
法規制等
保存条件 室温,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ

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Sircol S1000 plus S2000 Combination pack

[在庫・価格 :2025年02月16日 00時00分現在]

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詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
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納期 文献数
Sircol S1000 x 1 plus S2000 x 1 Combination pack
2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • お問い合わせ
説明文
法規制等 医薬用外劇物
保存条件 室温,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年8月合併号 p.14
ニュース2021年11月15日号 p.18

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[在庫・価格 :2025年02月16日 00時00分現在]

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Sircol S1000 x 1 plus S2000 x 1 Combination pack

文献数: 0

説明文
法規制等 医薬用外劇物
保存条件 室温,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年8月合併号 p.14
ニュース2021年11月15日号 p.18

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。