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AChEトレーサーを用いた競合法によりcGMPを測定するキット cGMP ELISA Kit

掲載日情報:2017/01/16 現在Webページ番号:9002

試料中のCyclic GMP(cGMP)をアセチルコリンエステラーゼ(Acetylcholinesterase、AChE)トレーサーを用いた競合法により高感度かつ特異的に比色定量するCayman Chemical社のELISA Kitです。アセチル化試薬(無水酢酸、Acetic anhydride)が付属するキット (#581021)とアセチル化試薬が付属しないキット(#581022)があり、用途に応じてフレキシブルにお選びいただけます。


Guanosine 3',5'-cyclic monophosphate(Cyclic GMP、cGMP)とは

Guanosine 3',5'-cyclic monophosphate(Cyclic GMP、cGMP)は、種々のホルモン、オータコイドおよび薬物に応答して細胞シグナル伝達を担う重要な細胞内セカンドメッセンジャー分子です。cGMPは、グアニル酸シクラーゼによりGTPから合成されます。グアニル酸シクラーゼには膜結合性と可溶性の2種類が存在します。膜結合性グアニル酸シクラーゼは、cGMP触媒ドメインと細胞表面レセプターの両方の機能を有することを特徴とします。哺乳類では、6つの膜型 (GC-A~F)が同定されており、そのうち3つのリガンドが発見されています。可溶性グアニル酸シクラーゼはα(α1またはα2)とβ(β1またはβ2)サブユニットからなるヘテロ二量体で、内因性の一酸化窒素により数百倍に活性化され、細胞内にcGMPの蓄積をもたらします。細胞内におけるcGMPの相対量は、細胞表面の膜結合性グアニル酸シクラーゼを介して作用するアゴニストによる活性化、または一酸化窒素による可溶性グアニル酸シクラーゼの細胞内活性化のマーカーとして役立ちます。



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Cyclic GMP ELISA Kitの製品ラインナップ

検量線例の画像をクリックすると拡大図を、商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。

品名 Cyclic GMP ELISA Kit*1 Cyclic GMP ELISA Kit
without Acetic Anhydride*2
商品コード 581021 581022
アセチル化試薬
フォーマット*3 96ウェルプレート(Strip/Solidプレート選択可)
サイズ*4 1プレートまたは5プレート
測定原理 競合ELISA法
測定方法 比色
測定試料 血漿、尿、培養上清、細胞抽出液、組織ホモジネート
測定波長 405~420 nm
測定時間 18時間(インキュベーション)+60~90分(呈色反応)
検量線例 Acetylated cGMP #581021 NonAcetylated cGMP #581022
測定範囲 0.023~3 pmol/ml 0.23~30 pmol/ml
IC50(Mid-Point、50% B/B0 0.46 pmol/ml 3~6 pmol/ml
感度(80% B/B0 0.1 pmol/ml 1 pmol/ml

*1 測定範囲・IC50・感度はアセチル化処理時の値です。アセチル化処理不要のプロトコルにも対応できます。
*2 測定範囲・IC50・感度はアセチル化未処理時の値です。別途、無水酢酸を用意し、アセチル化処理を行うことで、高感度プロトコルでの測定が可能です。
*3 96ウェルプレートが分割可能なストリップタイプと、96ウェルプレートが一体型のソリッドタイプがあります。
*4 96ウェルプレート1枚と96ウェルプレート1枚分の試薬が含まれる96 tests包装と96ウェルプレート5枚と96ウェルプレート5枚分の試薬が含まれる480 tests包装があります。



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特長

  • アセチル化試薬(無水酢酸、Acetic anhydride)が付属するキット (#581021)とアセチル化試薬が付属しないキット(#581022)があり、用途に応じてフレキシブルにお選びいただけます。
  • アセチルコリンエステラーゼ(Acetylcholinesterase、AChE)標識したcGMPを用いて、競合ELISA法により定量します。
  • トレーサーであるcGMP-AChE複合体の酵素活性によりEllman試薬が黄色を呈色します(吸収極大波長:412 nm)。
  • 反応停止液を使用する必要がなく、60分~90分の適当な時間でプレートの測定を行うことができます。
  • 特異性が高く、AMPやATPなど各種ヌクレオチドに対する交差反応性が低い製品です。

交差反応性

物質名 交差性
Dibutyryl cGMP 0.8%
Acetylated cAMP 0.05%
8-bromo-cGMP <0.01%
cAMP <0.01%
AMP <0.01%
ATP <0.01%
Acetylated AMP <0.01%
Acetylated Adenosine <0.01%
Acetylated Cytidine <0.01%
Acetylated Guanosine <0.01%
Acetylated Uridine <0.01%


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Cayman Chemical社アッセイキットについて

アセチルコリンエステラーゼ(Acetylcholinesterase、AChE)トレーサーのメリット

Cayman Chemical社の多くのELISAキットでは、主に酵素標識としてアセチルコリンエステラーゼ(Acetylcholinesterase、AChE)による方法が採用されています。AChEアッセイは、発色基質としてアセチルチオコリンを含むEllman試薬を使用します。この酵素反応の最終生産物である5-thio-2-nitrobenzoic acid(5-チオ-2-ニトロ安息香酸)は405~414 nmに最大吸収波長を有し黄色に発色します。AChEは、ELISA法で用いられる他の酵素に比べて以下のような長所を有しています。

  • HRP(Horse Radish Peroxidase)やAP(Alkaline Phosphatase)に比べ代謝回転速度が3倍速く、他の標識酵素に比べてカイネティック測定に適し、また高い感度が得られます。
  • AChEは安定性に優れた酵素で活性が長時間一定に保持され、アッセイ系において広範囲のダイナミックレンジが得られます。幅広いpH域(pH 5.0~10.0)で使用可能で、一般的な緩衝塩または防腐剤によって阻害されません。
  • ターンオーバー時に自己不活性化しません。

アッセイキットの感度の定義について

Cayman Chemical社アッセイキットでは、標準曲線上の80% B/B0の値を感度として定義しています。この値は信頼性が高く、再現可能なデータを提供します。

  • B0(Maximum Binding):任意の遊離分析物の非存在下で、抗体とトレーサーが最大量結合するウェルの吸光度。
  • %B/B0(%Bound/Maximum Bound):B0に対する任意の遊離分析物(試料)またはスタンダードを含むウェルの吸光度の比。
画像内容説明

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操作方法概略

cGMPとcGMP-acetylcholinesterase(AChE)conjugate(cGMP Tracer)のウサギ抗cGMP抗体の結合部位に対する競合を利用しています。

画像内容説明


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キット内容

商品コードをクリックすると、価格表をご覧いただけます。キットコンポーネントの●をクリックすると、キットコンポーネントの単品(別売品)の価格表をご覧いただけます。

品名Cyclic GMP ELISA KitCyclic GMP ELISA Kit
without Acetic Anhydride
商品コード581021581022
Cyclic GMP ELISA antiserum
Cyclic GMP AChE tracer
Cyclic GMP ELISA standard
Potassium hydroxide
Acetic anhydride-
ELISA buffer concentrate
Wash buffer concentrate
Polysorbate 20
Mouse anti-rabbit IgG coated plate
96-well cover sheet
Ellman's reagent
ELISA tracer dye
ELISA antiserum dye

測定には、マイクロプレートリーダーが別途必要です。



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価格

Cyclic GMP ELISA Kitの価格

[在庫・価格 :2025年04月26日 00時00分現在]

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cGMP, EIA Kit (Solid Plate)
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※Solid Plateは96ウェルプレートが一体型のタイプです。 acetylcholinesterase(AChE)標識したcGMPとの競合EIAにより,比色法(412 nm)でcGMPを定量するキット。感度:1 pmol/ml (non-acetylated), 0.1 pmol/ml (acetylated),測定範囲:0.23-30 pmol/ml (non-acetylated), 0.023-3 pmol/ml (acetylated),測定試料:血漿,尿,ライセート,組織,検出方法:呈色,測定波長:412 nm,アッセイ法:競合ELISA,アッセイ数:96 solids
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法規制等 医薬用外毒物,医薬用外劇物
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※Strip Plateは96ウェルプレートが分割可能なストリップタイプです。 acetylcholinesterase(AChE)標識したcGMPとの競合EIAにより,比色法(412 nm)でcGMPを定量するキット。感度:1 pmol/ml (non-acetylated), 0.1 pmol/ml (acetylated),測定範囲:0.23-30 pmol/ml (non-acetylated), 0.023-3 pmol/ml (acetylated),測定試料:血漿,尿,ライセート,組織,検出方法:呈色,測定波長:412 nm,アッセイ法:競合ELISA,アッセイ数:96 tests
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Cyclic GMP ELISA Kit without Acetic Anhydrideの価格

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。

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