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1つのベクターで複数のタンパク質を発現できるE. coli発現システム flEXiColi System

掲載日情報:2014/03/18 現在Webページ番号:8623

Acceptor VectorとDonor Vectorを組み合わせて、1つのベクターで複数のタンパク質をE. coliで発現できるシステムです。目的に応じて2種類のAcceptor Vectorと4種類のDonor Vectorを選択できます。

特長

  • Donor VectorとAcceptor Vectorにそれぞれ一つ、または複数の目的遺伝子を挿入し、複数のタンパク質を発現できます。
  • Donor VectorとAcceptor Vectorの融合にはCre-LoxP組換えを利用します。
  • ベクターの基本構造は、それぞれの制限サイトで区切られた4つの領域からなるシンプルかつフレキシブルな共通デザインを採用し、必要に応じて構成要素(multiple cloning sites, specific oris, recombination signalsなど)を簡単に組換えることが出来ます。
  • 使用した遺伝子カセットは、再利用することが出来ます。

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適用例

  • タンパク質の変異解析
  • 複合体タンパク質の結晶構造解析や機能解析

(例) 4つの遺伝子a、b、c、dからなる複合体タンパク質において、Donor Vectorにb、c、dの3遺伝子を組み込み、多様な変異を導入したa遺伝子を組み込んだAcceptor Vectorを用意し、遺伝子の多様な変異が複合体の構造や機能にどのような影響を及ぼすかについて調べる。

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操作方法概略

1つのベクターで複数のタンパク質を発現できる E. coli発現システム flEXiColi System
  1. 単一、または複数の目的遺伝子をDonor VectorとAcceptor Vectorに組み込む。
  2. Donor VectorとAcceptor Vectorを融合する(Cre-LoxP組み換え)。
  3. 融合されたベクターのセレクションを行い、ベクター増幅用E. coli株でベクターを増幅する。
  4. 発現用E. coli株にベクターを導入する。
  5. タンパク質を発現させる。

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ベクターの構造

基本構造

1つのベクターで複数のタンパク質を発現できる昆虫細胞発現システム flEXiBacTurbo System

application (A-Box):目的の遺伝子を組み込む領域
selector (S-Box):耐性遺伝子マーカーを含む領域
target (T-Box):特定の適用、宿主に使用するための複製起点を含む領域
maintenance (M-Box) :E. coliでベクターを増幅するための複製起点を含む領域

Acceptor vector

1つのベクターで複数のタンパク質を発現できるE. coli</span>発現システム flEXi</span>Coli System

Donor Vector

1つのベクターで複数のタンパク質を発現できるE. coli発現システム flEXiColi System 1つのベクターで複数のタンパク質を発現できるE. coli発現システム flEXiColi System

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キット内容

  • Acceptor Vector(2種類、3~4 μg DNA / vial)
  • Donor Vector(4種類、3~4 μg DNA / vial)
  • Acceptor / Donor Vectorを導入したE. coli(5 vials)
  • FlEXColi bacmidを導入したE. coli(1 vial)
  • Donor Vector増殖用E. coli agar stab:2種類(pirLC, pirHC)

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flEXiColi Systemご購入時のご注意
本製品は、大学・官公庁の研究所(Academic)にご所属の方と、営利団体・企業(Commercial Entities)にご所属の方とで価格が異なります。また、専用の「ご使用者確認書/使用目的確認書」が必要です。ご注文の際は、フナコシホームページに掲載の「ご使用者確認書/使用目的確認書」に必要事項をご記入の上、販売店担当者にお渡し下さい。

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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