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細胞周期モニタリングキット Cell-Clock Cell Cycle Assay Kit

掲載日情報:2020/05/25 現在Webページ番号:8445

レドックス色素(Cell-Clock dye)を用いて,培養中の哺乳動物細胞の細胞周期をモニタリングできるキットです。細胞周期(G1,S,G2,M期)の進行に伴い発色が変化するため,顕微鏡観察および画像解析による細胞周期のモニタリングが可能です。

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細胞周期と色調

細胞周期をモニタリングし,生細胞を検出できるキット Cell-Clock Cell Cycle Assay Kit
細胞周期をモニタリングし,生細胞を検出できるキット Cell-Clock Cell Cycle Assay Kit

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Cell-Clock dyeによる染色パターンと,対応する細胞周期

酸化/還元状態 細胞の色調 対応する細胞周期 細胞の形状/特徴
還元
細胞周期をモニタリングし,生細胞を検出できるキット Cell-Clock Cell Cycle Assay Kit
酸化
黄色 G0期/G1 新たに産生された細胞。小さく丸い形状を示す。G1期停止試薬で処理すると,膨張した形状になる。
緑色 S期/G2初期 S期の途中では核部分が白色がかった染色が見られる。G2期へ進むにつれ,青色の染色となる。
濃青色 G2後期/M期 M期に入ると濃青色に染色されると同時に,細胞の形態が変化する。ダンベル状になって分裂が起こり,2個の丸い娘細胞が形成される。

細胞周期停止試薬を使用しない場合,M期の有糸分裂により,レドックス色素は排出され,色素を含まない娘細胞が2個形成されます。

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特長

  • キットに含まれるレドックス色素(Cell-Clock dye)は,生細胞のみに取り込まれ,酸化・還元状態により色調が変化します。細胞周期の進行に伴い,細胞内の酸化・還元状態が変化するため,色調の変化を指標として細胞周期のモニタリングを行うことができます(上表参照)。
  • 倒立型顕微鏡での観察結果を撮影し,画像解析ソフトウェアを用いて色調を解析し,細胞周期ごとの比率を算出します。
  • レドックス色素は短時間(37℃,1時間)で細胞に取り込まれます。細胞毒性はなく,細胞の形態にも影響を与えません。
  • キットには24ウェル培養プレートが添付されています。その他のフォーマットでも使用可能です。

画像解析ソフトウェア『ImageJ』のご使用をお勧めします。ImageJ公式ウェブサイトからダウンロード可能です。

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アプリケーション例

  • 培地添加物,細胞密度,培養時間,継代回数などが,細胞周期に及ぼす影響の解析
  • 由来が異なる株細胞における細胞周期パターンの解析
  • 細胞周期特異的に影響を及ぼす化合物の効果確認
  • 細胞周期停止機能を有する化合物を用いた,細胞コロニーの同調培養モニタリング(細胞周期の同調に要する時間の確認など)

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製品の種類

商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 Cell-CLOCK Assay Kit
Standard Large Ecomonomy
アッセイ数 100 assays 400 assays
商品コード C1000 C2000
使用実績がある細胞例 3T3, BHK, CHO, HT1080, PMH, V79, VERO


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使用文献

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操作方法概略

  1. 細胞を播種し,>50%コンフルエントになるまで培養する。
  2. 培地を交換し,検証したい化合物などを添加する。
  3. Cell-Clock dye reagentを添加し,37℃のインキュベーター内で1時間インキュベートする。
  4. Cell-Clock dye reagentを除去し,Cell dye wash reagentで2回洗浄する。
  5. Cell dye wash reagentを加え,15分以内に顕微鏡下で観察し,画像を撮影する。
  6. ImageJソフトウェアを用いて,各色調(黄色,緑色,濃青色)ごとにピクセルデータを取得し,総ピクセル値に占める各色調の割合から,細胞周期ごとの細胞数を比率として算出する。

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使用例

Cell-Clock dyeを用いたCHO細胞の染色像

CHO細胞の染色像

Cell-Clock dyeを用いた細胞染色と画像データの解析例

Figure1
Figure2
Figure3
Figure4

図1:5%ウシ血清サプリメント含有DMEM/F12でCHO細胞を22時間培養後,Cell-Clock dyeで染色した(A)。 ImageJソフトウェアにより,各色調の細胞を赤色で表示し,それぞれのピクセルデータを取得した(B~D)。上図で取得したデータを元に,各色調ごとの割合を算出した(下表参照)。

ピクセルデータを
取得した色調
細胞周期 Imaje Jで赤色に表示したしきい値 赤色に表示された
ピクセル値(pixels)
赤色表示の
パーセンテージ
濃青色赤色(B) G2後期~M期 75 452,052 6%
緑色赤色(C) S期 470 2.095,921 28%
黄色赤色(D) G0/G1 230 4,982,241 66%
全着色細胞 7,530,214 100%

Cell-Clock dyeを用いたM期停止細胞の染色像

図2:CHO細胞を播種後,20時間培養し,分裂阻害物質であるDocetaxel(1μM)で一晩処理し,直後(A),更に5時間(B),21時間(C)培養した。それぞれ培養終了時間の1時間前にCell-Clock dyeを添加し,染色を行って画像を撮影した。

Figure5

Docetaxel処理直後

Figure6

Docetaxel処理後5時間培養

Figure7

Docetaxel処理後21時間培養

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キット内容

  • Cell-Clock dye reagent
  • Cell dye wash reagent (DMEM)
  • 24 well Cell culture plate





製品外観

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フライヤーダウンロード

下の図をクリックすると,本製品のフライヤーpdfをダウンロードいただけます。

細胞周期をモニタリングし,生細胞を検出できるキット Cell-Clock Cell Cycle Assay Kit

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価格

[在庫・価格 :2021年07月23日 20時05分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
CELL-CLOCK Standard Assay Kit (100assays)
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 18
説明文
染色の色調により細胞周期をモニタリングできる,生細胞検出キット。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,暗所保存,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年4月1日号 p.27
ニュース2019年5月1日号 p.18

製品記事 細胞周期・微小管研究用製品特集
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CELL-CLOCL Large Economy Assay Kit (400assays)
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 1
説明文
染色の色調により細胞周期をモニタリングできる,生細胞検出キット(400 assays)。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年4月1日号 p.27
ニュース2019年5月1日号 p.18

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[在庫・価格 :2021年07月23日 20時05分現在]

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CELL-CLOCK Standard Assay Kit (100assays)

文献数:18

説明文 染色の色調により細胞周期をモニタリングできる,生細胞検出キット。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,暗所保存,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年4月1日号 p.27
ニュース2019年5月1日号 p.18

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CELL-CLOCL Large Economy Assay Kit (400assays)

文献数:1

説明文 染色の色調により細胞周期をモニタリングできる,生細胞検出キット(400 assays)。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年4月1日号 p.27
ニュース2019年5月1日号 p.18

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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