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細胞周期をモニタリングできるキット Cell-Clock Cell Cycle Assay Kit

掲載日情報:2016/12/07 現在Webページ番号:8445

レドックス色素を用いて,培養中の哺乳動物細胞の細胞周期をモニタリングできるキットです。細胞周期(G1,S,G2,M期)の進行に伴い発色が変化するため,顕微鏡観察および画像解析による細胞周期のモニタリングが可能です。

特長

  • キットに含まれるレドックス色素(Cell-Clock dye)は,生細胞のみに取り込まれ,酸化・還元状態により色調が変化します。細胞周期の進行に伴い,細胞内の酸化・還元状態が変化するため,色調の変化を指標として細胞周期のモニタリングを行うことができます(下表参照)。
  • 倒立型顕微鏡での観察結果を撮影し,画像解析ソフトウェアを用いて色調を解析し,細胞周期ごとの比率を算出します。
  • レドックス色素は短時間(37℃,1時間)で細胞に取り込まれます。細胞毒性はなく,細胞の形態にも影響を与えません。
  • キットには24ウェル培養プレートが添付されています。その他のフォーマットでも使用可能です。

画像解析ソフトウェア『ImageJ』のご使用をお勧めします。ImageJ公式ウェブサイトからダウンロード可能です。

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細胞周期と色調

細胞周期をモニタリングし,生細胞を検出できるキット Cell-Clock Cell Cycle Assay Kit

Cell-Clock dyeによる染色パターンと,対応する細胞周期

酸化/
還元状態
細胞の
色調
対応する
細胞周期
細胞の形状/特徴
細胞周期をモニタリングし,生細胞を検出できるキット Cell-Clock Cell Cycle Assay Kit 還元
細胞周期をモニタリングし,生細胞を検出できるキット Cell-Clock Cell Cycle Assay Kit
酸化
黄色 G0期/G1 新たに産生された細胞。小さく丸い形状を示す。G1期停止試薬で処理すると,膨張した形状になる。
緑色 S期/G2初期 S期の途中では核部分が白色がかった染色が見られる。G2期へ進むにつれ,青色の染色となる。
濃青色 G2後期/M期 M期に入ると濃青色に染色されると同時に,細胞の形態が変化する。ダンベル状になって分裂が起こり,2個の丸い娘細胞が形成される。

細胞周期停止試薬を使用しない場合,M期の有糸分裂により,レドックス色素は排出され,色素を含まない娘細胞が2個形成されます。

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アプリケーション例

  • 培地添加物,細胞密度,培養時間,継代回数などが,細胞周期に及ぼす影響の解析
  • 由来が異なる株細胞における細胞周期パターンの解析
  • 細胞周期特異的に影響を及ぼす化合物の効果確認
  • 細胞周期停止機能を有する化合物を用いた,細胞コロニーの同調培養モニタリング(細胞周期の同調に要する時間の確認など)

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使用実績がある細胞例

  • 3T3, BHK, CHO, HT1080, PMH, V79, VERO

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操作方法概略

1. 細胞を播種し,>50%コンフルエントになるまで培養する。

2. 培地を交換し,検証したい化合物などを添加する。

3. Cell-Clock dye reagentを添加し,37℃のインキュベーター内で1時間インキュベートする。

4. Cell-Clock dye reagentを除去し,Cell dye wash reagentで2回洗浄する。

5. Cell dye wash reagentを加え,15分以内に顕微鏡下で観察し,画像を撮影する。

6. ImageJソフトウェアを用いて,各色調(黄色,緑色,濃青色)ごとにピクセルデータを取得し,総ピクセル値に占める各色調の割合から,細胞周期ごとの細胞数を比率として算出する。

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使用例

CHO細胞の染色像

Cell-Clock dyeを用いたCHO細胞の染色像

細胞周期をモニタリングし,生細胞を検出できるキット Cell-Clock Cell Cycle Assay Kit

Cell-Clock dyeを用いた細胞染色と画像データの解析例

図1:CHO細胞をDMEM / F12培地(血清含有)で22時間培養後,Cell-Clock dyeで染色した(A)。ImageJソフトウェアにより,各色調の細胞を赤色で表示し,ピクセルデータを取得した(B~D)。
B:黄色で染色された細胞
C:緑色で染色された細胞
D:濃青色で染色された細胞

細胞周期をモニタリングし,生細胞を検出できるキット Cell-Clock Cell Cycle Assay Kit

Cell-Clock dyeを用いたM期停止細胞の染色像

CHO細胞を播種後,20時間培養し,分裂阻害物質であるDocetaxel(1μM)で一晩処理し(A),更に5時間(B),21時間(C)培養した。それぞれ培養終了時間の1時間前にCell-Clock dyeを添加し,染色を行って画像を撮影した。

ピクセルデータを
取得した色調
各色調のピクセル値
(pixels)
総ピクセル値に
占める割合
黄色 304,332 52%
緑色 256,926 44%
濃青色 19,037 4%
全色 580,295 100%

図2:図1で取得したデータを元に,各色調ごとの割合を算出した。

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キット内容

  • Cell-Clock dye reagent
  • Cell dye wash reagent (DMEM)
  • 24 well Cell culture plate

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価格

[在庫・価格 :2019年04月20日 00時11分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数 リスト
CELL-CLOCK Standard Assay Kit
2週間程度  1 追加
説明文
染色の色調により細胞周期をモニタリングできる,生細胞検出キット。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,暗所保存,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2018年7月1日号 p.28

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CELL-CLOCK Economy Assay Kit
2週間程度  1 追加
説明文
染色の色調により細胞周期をモニタリングできる,生細胞検出キット(400 assays)。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2018年7月1日号 p.28

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[在庫・価格 :2019年04月20日 00時11分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。

CELL-CLOCK Standard Assay Kit

文献数:1

  • 商品コード:C1000
  • メーカー:QBS
  • 包装:1kit
  • 価格:¥81,000
  • 在庫:無(発注済)
  • 納期:2週間程度 
  • 法規制等:

説明文 染色の色調により細胞周期をモニタリングできる,生細胞検出キット。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,暗所保存,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2018年7月1日号 p.28

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CELL-CLOCK Economy Assay Kit

文献数:1

  • 商品コード:C2000
  • メーカー:QBS
  • 包装:1kit
  • 価格:¥242,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:2週間程度 
  • 法規制等:

説明文 染色の色調により細胞周期をモニタリングできる,生細胞検出キット(400 assays)。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2018年7月1日号 p.28

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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