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目的のタンパク質の発現・培養・精製条件を検討します。 タンパク質発現・精製受託サービス

掲載日情報：2022/08/22 現在Webページ番号：835

ユニーテック /
ユニーテック（株）
[メーカー略称：YNK]

ユニーテック（株）では、豊富な経験と実績に基づき、独自に使用目的に合わせた試験計画をご提案し、目的のタンパク質の発現・培養・精製条件を検討します。受託サービスを通して収得されたタンパク質および確立したプロトコールはご依頼主様に帰属し、実験に使用したり、スケールアップにご利用いただけます。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

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特長

  • ベクター構築～発現・精製条件検討、大量培養・精製までトータルサービスをご提供いたします。
  • ご希望のベクター構築、ベクター設計のコンサルティングも可能です。
  • Gene情報（GenBankのAccession No.もしくは配列）のみでタンパク質の使用目的に合わせた試験計画をご提案します。
  • 大腸菌（E. coli）、酵母、昆虫細胞（バキュロウイルス）、動物細胞の系を同時に発現・比較検討が可能です。
  • 検討後の新たなプロトコールはすべてお客様に帰属します。

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タンパク質発現・精製受託サービス選択ガイド

メニューをクリックすると、各タンパク質発現・精製受託サービスの詳細をご覧いただけます。

メニュー サービスの概要
☞ タンパク質発現用ベクター構築
  • 遺伝子情報・タンパク質発現目的のみで最適な発現ベクターを数週間で作製いたします。
☞ 大腸菌・酵母を用いたタンパク質発現・精製受託
  • 豊富な経験（数千のベクター設計）に基づいた適切な設計をします。
  • 目的、宿主細胞に合わせたPromoter、Enhancerを選択します。
☞ バキュロウイルスを用いた昆虫細胞系タンパク質発現・精製受託
  • より真核生物に近いタンパク質が得られます。
  • 大腸菌の発現系で目的タンパク質が不溶化して得られなかった場合にお勧めします。
☞ 動物細胞を用いたタンパク質発現・精製受託
  • 分子量の大きいタンパク質の発現、および複数のタンパク質の同時発現により複合体の再構成が可能です。
  • 少量の哺乳類系糖タンパク質発現・精製に最適です。
  • お急ぎのときや、活性が必要な際に対応が可能です。


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タンパク質発現用ベクター構築

特長

  1. Kozak、Signal配列、Tag、Reporterなど、目的に合わせて設計いたします。
  2. PCRや制限酵素サイトを用いてcDNAを挿入します。
  3. insert部のDNAシークエンスを確認します。

価格


工程番号 工程名 作業内容 価格 期間
1 ベクター構築 cDNAの発現ベクターへの挿入、配列確認 150,000円～ －

☞ タンパク質発現・精製受託サービス選択ガイド




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大腸菌・酵母を用いたタンパク質発現・精製受託

☞ 遺伝子組換え酵母を用いた培養・タンパク質精製

遺伝子組換え大腸菌の培養・タンパク質精製

内容

  • codon usageを最適化（アミノ酸配列はそのままで大腸菌の好む塩基配列に変換）します。
  • より可溶性発現のしやすい誘導条件、および培養条件を探索します。
  • 不溶性画分（inclusion body）発現タンパク質のRefoldingを実施します。
  • 坂口フラスコ1本からファーメンター培養まで、ご希望の培養量に対応可能です。

実施例

大腸菌を用いたタンパク質発現・精製の一例

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大腸菌を用いたタンパク質発現・精製の一例

破砕上清のSDS-PAGE：37℃、30℃、16℃でそれぞれ培養し、3時間後、6時間後、18時間後、24時間後の菌体を回収、破砕し上清をSDS-PAGEした。
30℃、3時間培養が、上清に最も可溶化した目的タンパク質が多いことがわかる。37℃培養だと目的タンパク質の多くは不溶化していた（data not shown）。

Trial精製の一例（Ni-NTAによるアフィニティ精製）

図をクリックすると拡大します（拡大図）

Trial精製の一例（Ni-NTAによるアフィニティ精製）

250 ml Trial培養からNi-NTAを用いた精製の一例
破砕上清をNi-NTAに結合させ、素通り画分、洗浄画分、溶出画分をそれぞれSDS-PAGEした。
アフィニティ精製でもかなり純度良く精製出来ている。

価格


工程番号 工程 作業内容 価格 期間
1 発現ベクター構築 cDNAの発現ベクターへの挿入、配列確認 150,000円～ －
2 発現条件検討*1
（定性試験）		 温度、培養時間による発現検討
必要によってはIPTG濃度やホスト大腸菌の検討		 220,000円 2週間
3 Trial培養（250ml） 条件検討で良かった条件でTrial培養 140,000円 1週間
4 Trial精製 アフィニティ精製（Hisタグ精製の場合）
（SDS-PAGE、ウエスタンブロット含む）		 240,000円 1週間
5 ゲルろ過カラム精製

（オプション）

 HPLCを使いカラム精製 270,000円 1週間
イオン交換カラム精製

（オプション）

 180,000円 1週間
6 中間報告書提出 SDS-PAGE、ウエスタンブロット、収量の報告 30,000円 2日間
7 本培養 収量から必要な培養量を計算し、本培養の実施 基本料金 100,000円 ＋ 25,000円/L －
8 本精製 別途お見積り 別途お見積り －

＊1 発現条件検討内容：(1)温度3条件、(2)培養時間4条件の計12条件；試験によってIPTG濃度やホスト大腸菌の検討を行います。

☞ タンパク質発現・精製受託サービス選択ガイド

遺伝子組換え酵母を用いた培養・タンパク質精製

特長

  1. 比較的分子量が大きいタンパク質を可溶性タンパク質として発現できる可能性が高まります。
  2. 真核生物に近いタンパク質が得られます。
  3. 動物細胞に比べ、ウイルスの混入の危険性が少なくてすみます。
  4. ファーメンターでの培養に対応できます。
  5. 発現条件、培養条件、精製条件を探索、検討いたします。また、検討したプロトコルはすべてお渡し致します。

価格


工程番号 工程 価格 期間
1 発現ベクター構築 150,000円～ －
2 発現条件検討（定性試験） 250,000円 3週間
3 Trial培養（200ml） 200,000円 1週間
4 Trial精製（通常アフィニティ精製、SDS-PAGE、ウエスタンブロット含む） 300,000円 2週間
5 ゲルろ過カラム精製（オプション） 270,000円 1週間
イオン交換カラム精製（オプション） 180,000円 1週間
6 中間報告書提出：SDS-PAGE、ウエスタンブロット、収量の報告 30,000円 2日間
7 本培養 基本料金 100,000円＋ 40,000円/L －
8 本精製 別途お見積り －

☞ タンパク質発現・精製受託サービス選択ガイド


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バキュロウイルスを用いた昆虫細胞系タンパク質発現・精製受託

ワークフロー

バキュロウイルスを用いた昆虫細胞系タンパク質発現・精製受託ワークフロー

  • ❶：Sf9細胞培養（ヨトウガ昆虫細胞）
  • ❷：遺伝子改変バキュロウイルスの感染
  • ❸：バキュロウイルス感染細胞の培養
  • ❹：目的タンパク質の精製
  • ❺：純度を確認して納品

バキュロウイルスを用いた昆虫細胞系タンパク質発現・精製受託

特長

  1. 発現量は動物細胞を大きく上回りながら、動物細胞に近い修飾されたタンパク質取得が可能です。
  2. Trial培養・精製～30 L培養まで承ります。
  3. クローニング・ベクター構築も受託しています。
  4. 発現量目安：0.1～数 mg/L

価格


工程番号 工程 作業内容 価格 期間
1 発現ベクター構築 cDNAの発現ベクターへの挿入、配列確認 150,000円～ 2週間
2 バキュロウイルス作製*2 バキュロウイルスの作製、力価測定 450,000円 5週間
3 発現条件検討（定性試験） 基本的にMOIを 2条件、時間3条件で検討 250,000円 2週間
4 Trial培養（250ml） 条件検討で良かった条件でTrial培養 200,000円 1週間
5 Trial精製
（Hisタグ精製の場合）		 SDS-PAGE、ウエスタンブロットを含む 280,000円 1週間
6 ゲルろ過カラム精製

（オプション）

 HPLCを使いカラム精製 270,000円 1週間
イオン交換カラム精製

（オプション）

 180,000円 1週間
7 中間報告書提出 SDS-PAGE、ウエスタンブロット、収量の報告 30,000円 2日間
8 本培養 収量から必要な培養量を計算し、本培養を行う 160,000円/L －
9 本精製 別途お見積り 別途お見積り －

＊2 必要なキット一式を供与いただく必要がございます。
※ 納品されたタンパク質はバキュロウイルスの残存が否定出来ないため、拡散防止措置のされた実験室にて取り扱って下さい。

☞ タンパク質発現・精製受託サービス選択ガイド


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動物細胞を用いたタンパク質発現・精製受託

☞ 安定発現細胞株作製

動物細胞一過性発現タンパク質精製

特長

  • 発現量目安：0.01～1 mg/ml
  • 分子量の大きいタンパク質の発現および複数タンパク質の同時発現による複合体の再構成が可能です。
  • 少量の哺乳類系糖タンパク質の発現・精製も可能です。
  • Expi293、ExpiCHOなどの浮遊細胞も対応しています。

実施例

Trial培養／本培養の一例

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Trial培養／本培養の一例

500 mlフラスコによる振とう培養

発現条件の検討例／Trial精製の一例

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発現条件の検討例／Trial精製の一例

  • 左：発現量の経時変化
  • 右：Protein Gによるアフィニティ精製

価格

工程番号 工程 作業内容 価格 期間
1 発現ベクター構築 cDNAの発現ベクターへの挿入、配列確認 150,000円～ －
2 発現条件検討
（定性試験）		 トランスフェクション条件の検討、タンパク質発現の確認 280,000円 2週間
3 Trial培養（200 ml） 最適の条件でTransfection 440,000円 1週間
4 Trial精製 アフィニティ精製（Hisタグ精製の場合、SDS-PAGE、ウエスタンブロット含む） 220,000円 1週間
5 ゲルろ過カラム精製

（オプション）

 HPLCを使いカラム精製 270,000円 1週間
イオン交換カラム精製

（オプション）

 180,000円 1週間
6 中間報告書提出 SDS-PAGE、ウエスタンブロット、収量の報告 30,000円 2日間
7 本培養 収量から必要な培養量を計算し、本培養を行う 基本料金100,000円 ＋ 350,000円/L －
8 本精製 別途お見積り 別途お見積り －

☞ タンパク質発現・精製受託サービス選択ガイド


安定発現細胞株作製

特長

  • 安定株樹立によりTransfectionを繰り返すことなく目的タンパク質の発現・精製が可能です。
  • 血清不含培地での安定株樹立も可能です。
  • スクリーニング方法：Western blot、RT-PCR、基質酵素活性など
  • 動物細胞宿主株：接着系CHO、浮遊系CHO、接着系HEK293、浮遊系HEK293、COS7、その他
安定発現細胞株作製

価格

工程番号 工程 作業内容 価格 期間
1 発現ベクター構築 cDNAの発現ベクターへの挿入、配列確認 150,000円～ －
2 発現条件検討
（定性試験）		 トランスフェクション条件の検討、タンパク質発現の確認 280,000円 2週間
3 安定発現株の作製 Transfection、コロニーのピックアップ、限界希釈によるクローニング 720,000円 1.5ヶ月
4 発現株の選定 ウエスタンブロット、ELISA等
  • ウエスタンブロット：50,000円
  • ELISA：別途お見積り
 2週間
5 中間報告書提出 SDS-PAGE、ウエスタンブロット、収量の報告 30,000円 2日間
6 本培養

 収量から必要な培養量を計算し、本培養を行う 基本料金100,000円＋140,000円/L －
7 本精製 別途お見積り 別途お見積り －

☞ タンパク質発現・精製受託サービス選択ガイド


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ご注文方法

ご提供いただいた情報を基に、お見積り、および納期を提示させていただきます。ご要望に応じて、秘密保持契約の締結も可能です。詳細は☞ 当社受託・特注品担当（下記参照）までお問い合わせ下さい。

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お問い合わせ先

（受託・特注品業務担当）

jutaku@funakoshi.co.jp

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タンパク質発現