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PinPoint Targeted Integration System
同質細胞株の作製に有用な遺伝子導入システム PinPoint Targeted Integration System
掲載日情報：2015/06/10 現在Webページ番号：8066
プロモーターと発現遺伝子の組み合わせなどの遺伝的特徴をゲノム部位特異的に導入できます。様々な目的遺伝子を ゲノム上の同部位にノックインし、同じ遺伝的背景を持つアイソジェニック細胞株を作製できます。
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原理
1. ゲノムの標的部位へ PinPoint Site を導入する
Placementベクターを用いて、ゲノム上に目的遺伝子の挿入サイト（PinPoint Site）を指定します。
●方法１：PinPoint-FCシステム
phiC31インテグラーゼ発現プラスミドとPinPoint-FC Placement Vector をトランスフェクションし、phiC31イ ンテグラーゼにより、標的部位に PinPoint Siteを導入する。
●方法2：PinPoint-HRシステム
CRISPR/Cas9とPinPoint-HR Placement Vectorをトランスフェクションし、相同組み換え修復（HDR）により切断した領域にPinPoint Siteを導入する。
2. PinPoint Siteに目的遺伝子を導入する
PinPoint ドナーベクターとPinPointインテグラーゼ発現ベクターを細胞にトランスフェクションし、①で指定した PinPoint Siteに目的遺伝子カセットを挿入する。
3.（オプション）
用途に応じて、Cre / LoxP反応により、導入した遺伝子のカセットを除去することもできます。
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特長
- 目的遺伝子の導入位置を指定するPlacementベクターと、目的遺伝子を導入するPinPointドナーベクター、PinPointインテグラーゼ発現プラスミドを用いて、二段階反応で目的遺伝子をゲノムに組み込めるシステムです。
- ノックイン位置が異なることによる影響を排除できるため、より正確に遺伝子と表現型の関連性を解析できます。
- ゲノムの標的部位へPinPoint Siteを導入する際、PinPoint-FC attP Placement ベクターまたはPinPoint-HR attP Placement ベクター を用いる2種類の方法があります。
- TAL EffectorもしくはCRISPRでPinPoint-HR attP Placement ベクターを挿入させることにより、ドナーベクターで任意の領域に遺伝子を導入することができます（TAL Effector とCRISPRについてはこちらをご参照下さい）。
- 位置効果を出さないように、組換えを起こすことができます。
- Cre / LoxP反応を用いてplacementベクターのカセット配列を除くことも可能です。
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使用例
コロニーカウンティングアッセイ
HEK293細胞に、PinPoint-FC attP Placement Vector (#PIN300A-1)とphiC31 Integrase Expression Plasmid（#FC200PA-1）をトランスフェクションした。Neomycinを添加し、11日間培養した後、細胞をメチレンブルーで染色し、コロニーカウンティングアッセイを行った。
PinPoint-FC attP Placement Vectorが導入されたHEK293細胞にPinPoint Donor Positive Control Vector (#600A-1)とPinPoint Integrase Expression Plasmid (#PIN200A-1)をトランスフェクションした。Neomycinを添加し培養した後、GFP蛍光画像を観察した。
Placementベクター由来のPGKプロモーター領域と、ドナーベクター由来のPuro配列に対するプライマーを設計し、ドナーベクターが正しく導入されているかPCRで確認した。三つの細胞株においてドナーベクターが正しく導入されていることがわかる。
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セット品
インテグラーゼ発現ベクター、PinPoint Site 導入用ベクター、PinPoint ドナーベクターなどがセットになった製品です。
| 品 名 | PinPoint-FC System for Platform Cell Line Generation & Retargeting |
|---|---|
| 用 途 | PinPoint-FC システムによりプラットホーム細胞株の作製・遺伝子導入を行うキット |
| キット内容 | ● phiC31 インテグラーゼ発現プラスミド(#FC200PA-1) ● PinPoint-FC attP Placement ベクター (#PIN300A-1) ● PinPoint インテグラーゼ発現プラスミド (#PIN200A-1) ● PinPoint ドナーベクター (#PIN510A-1) ● GFP 及びルシフェラーゼを発現するポジティブコントロール用PinPoint ドナーベクター (#PIN600A-1) |
| 商品コード | PIN300A-KIT |
| 品 名 | PinPoint-HR System for Platform Cell Line Generation & Retargeting |
|---|---|
| 用 途 | PinPoint-HR システムによるプラットホーム細胞株の作製・遺伝子導入を行うキット |
| キット内容 | ● PinPoint-HR attP Placement ベクター (#PIN400A-1) ● PinPoint インテグラーゼ発現プラスミド (#PIN200A-1) ● PinPoint ドナーベクター (#PIN510A-1) ● GFP 及びルシフェラーゼを発現するポジティブコントロール用PinPoint ドナーベクター (#PIN600A-1) ※別途、細胞内でCas9を発現させる必要があります。 |
| 商品コード | PIN400A-KIT |
| 品 名 | PinPoint-HR System for Platform Cell Line Generation & Retargeting of AAVS1 Safe Harbor Locus |
|---|---|
| 用 途 | AAVS1遺伝子を標的とするTALE-Nuclease を用い、PinPoint-HR システムによりプラットホーム細胞株の 作製・遺伝子導入を行うキット |
| キット内容 | ● PinPoint-HR attP AAVS1 Placement ベクター (#PIN410A-1) ● AAVS1 を標的としたTALE Nuclease ペアを発現するベクター(#GE601A-1) ● PinPoint ドナーベクター (#PIN510A-1) ● GFP 及びルシフェラーゼを発現するポジティブコントロール用PinPoint ドナーベクター (#PIN600A-1) |
| 商品コード | PIN410A-KIT |
| 品 名 | PinPoint-HR System for Platform Cell Line Generation & Retargeting of AAVS1 Safe Harbor Locus |
|---|---|
| 用 途 | AAVS1遺伝子を標的とするCRISPR-Cas9 を用い、PinPoint-HR システムによりプラットホーム細胞株の 作製・遺伝子導入を行うキット |
| キット内容 | ● PinPoint-HR attP AAVS1 Placement ベクター (#PIN410A-1) ● Cas9 と、AAVS1 遺伝子を標的としたgRNA を発現するAll-in-oneベクター (#CAS601A-1） ● PinPoint インテグラーゼ発現プラスミド (#PIN200A-1) ● PinPoint ドナーベクター (#PIN510A-1) ● GFP及びルシフェラーゼを発現するポジティブコントロール用PinPoint ドナーベクター (#PIN600A-1) |
| 商品コード | PIN412A-KIT |
| 品 名 | PinPoint-FC 293T Platform Kit for Targeted Gene Insertion |
|---|---|
| 用 途 | PinPoint サイトを挿入済みの293T 細胞を用いて遺伝子導入を行うキット |
| キット内容 | ● PinPoint サイトを挿入済みの293T 細胞（#PIN320-A） ● PinPoint インテグラーゼ発現プラスミド (#PIN200A-1) ● PinPoint ドナーベクター (#PIN510A-1) ● GFP 及びルシフェラーゼを発現するポジティブコントロール用PinPoint ドナーベクター (#PIN600A-1) |
| 商品コード | PIN320A-KIT |
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インテグラーゼ発現用ベクター
[在庫・価格 ：2025年04月28日 16時55分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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PinPoint Integrase Expression Plasmid |
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[在庫・価格 ：2025年04月28日 16時55分現在]
PinPoint Integrase Expression Plasmid
文献数： 0
- 商品コード：PIN200A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥174,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2018年6月1日号 p.34 ニュース2017年6月15日号 p.28
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PinPoint Site Placementベクター
[在庫・価格 ：2025年04月28日 16時55分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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PinPoint-FC attP Placement Vector |
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PinPoint-HR attP Placement Vector - Empty MCS for cloning HR Arms |
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PinPoint-HR attP Placement Vector - for targeting the Human AAVS1 Safe Harbor |
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[在庫・価格 ：2025年04月28日 16時55分現在]
PinPoint-FC attP Placement Vector
文献数： 0
- 商品コード：PIN300A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥182,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2018年6月1日号 p.34 ニュース2017年6月15日号 p.28
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PinPoint-HR attP Placement Vector - Empty MCS for cloning HR Arms
文献数： 0
- 商品コード：PIN400A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥298,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2018年6月1日号 p.34 ニュース2017年6月15日号 p.28
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PinPoint-HR attP Placement Vector - for targeting the Human AAVS1 Safe Harbor
文献数： 0
- 商品コード：PIN410A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥298,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
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ニュース2018年6月1日号 p.34 ニュース2017年6月15日号 p.28
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追加しました。
PinPointドナーベクター
[在庫・価格 ：2025年04月28日 16時55分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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EF1alpha PinPoint Donor Vector (pPP-EF1a-MCS-pA-attB-Puro-pA) |
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CAG PinPoint Donor Vector (pPP-CAG-MCS-WPRE-pA-attB-Puro-pA) |
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Empty PinPoint Donor Vector (pPP-MCS-WPRE-pA-attB-Puro-pA) |
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PinPoint Donor Positive Control Vector: CAG->GFP+Luciferase (pPP-CAG-GFP-T2A-Luc-WPRE-pA-attB-Puro-pA) |
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PinPoint Donor Positive Control Vector: CM->Luciferase (pPP-CMV-Luc-pA-attB-Puro-pA) |
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[在庫・価格 ：2025年04月28日 16時55分現在]
EF1alpha PinPoint Donor Vector (pPP-EF1a-MCS-pA-attB-Puro-pA)
文献数： 0
- 商品コード：PIN500A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥242,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||
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| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
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ニュース2018年6月1日号 p.34 ニュース2017年6月15日号 p.28
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CAG PinPoint Donor Vector (pPP-CAG-MCS-WPRE-pA-attB-Puro-pA)
文献数： 0
- 商品コード：PIN510A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥242,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
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| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
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ニュース2018年6月1日号 p.34 ニュース2017年6月15日号 p.28
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Empty PinPoint Donor Vector (pPP-MCS-WPRE-pA-attB-Puro-pA)
文献数： 0
- 商品コード：PIN520A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥242,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
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| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
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ニュース2018年6月1日号 p.34 ニュース2017年6月15日号 p.28
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PinPoint Donor Positive Control Vector: CAG->GFP+Luciferase (pPP-CAG-GFP-T2A-Luc-WPRE-pA-attB-Puro-pA)
文献数： 0
- 商品コード：PIN600A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥242,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
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| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
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PinPoint Donor Positive Control Vector: CM->Luciferase (pPP-CMV-Luc-pA-attB-Puro-pA)
文献数： 0
- 商品コード：PIN610A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥242,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
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| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
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