大腸菌ゲノムのコンタミネーションが検出限界以下のPfu DNAポリメラーゼ Pfu DNA polymerase, UltraPure
掲載日情報:2013/10/03 現在Webページ番号:8058
高いFidelity(正確性)を必要とするPCR反応に広く使用されているPfu DNA polymeraseは,Pyrococcus furiosus由来の耐熱性DNA polymeraseです。 3'→5'エキソヌクレアーゼ活性による高い校正活性を有しています。
しかし,PCR酵素のFidelityは,バッファー条件によって容易に変動することが知られています。本製品のPfu DNA polymeraseは,各ロット毎に添付の反応BufferとdNTPを用いてFidelityを検定し,Taq DNA polymeraseの10倍以上であることを確認しています。
また,PCR酵素へのホスト大腸菌ゲノムのコンタミネーションが,しばしば実験を混乱させる要因になることが報告されています。本製品は高度に精製されており,発現宿主である大腸菌ゲノムDNAは検出されません。
追加しました。
-
2020/11/16
試薬 特別価格
[BDL]バイオダイナミクス研究所年度末10%~30%OFFキャンペーン
[~2021/02/26]期間:2020/11/16 ~2021/02/26
BioDynamics Laboratory Inc.(株式会社バイオダイナミクス研究所)(BDL)
Pfu DNAポリメラーゼ(Pfu DNA Polymerase)の特長
- 高いをFidelityを要求するPCR反応に適しています。
- 添付の酵素と10 × Reaction Buffer,dNTPの組み合わせで各ロット毎のPCR反応における増幅能を確認しています(図1参照)。
- ホストである大腸菌ゲノムのコンタミネーションは,現在のBioDynamics Laboratory社の検定基準の下限値である0.05分子/unit未満を保証しています(図2及び図3参照)。

図1: 本製品を用いて,λDNAを鋳型として種々のサイズのDNA断片を増幅した結果
0.8%アガロースゲル電気泳動。分子量マーカーは,Dynamaker DNA High D (#DM112)

図2: 本製品とA社製品のDNA polymerase中の大腸菌ゲノムのコンタミネーションの比較
各1 unit酵素中の大腸菌16S rRNA領域を40サイクルの高感度のPCR反応にて増幅した結果。矢印は大腸菌16S rRNA領域からの増幅断片(366 bp)の位置を示す。A社製品のPfu DNA polymeraseとすべてのPfu関連製品から,大腸菌ゲノムが検出されていることがわかる。”Native”はPyrococcus furiosusより精製されたものであるが,検出された増幅断片をTAクローニングし,シークエンスを行った結果,Pyrococcus由来ではなく大腸菌由来のrRNAであることが確認された。精製過程で汚染されたものと思われる。
3.5%アガロースゲル電気泳動。分子量マーカーは,DynaMarker DNA Low D (#DM112)
追加しました。
大腸菌ゲノムのコンタミネーション検定法
各製品ロット毎のコンタミネーションを,direct PCR法により高感度に検定しています。このアッセイ法では,大腸菌ゲノムを1分子まで検出可能です。
図3: 大腸菌ゲノムのコンタミネーションの検定
1 unitのPfu DNA polymeraseに,外部から量の異なる大腸菌ゲノム(0分子~1分子)を添加し,大腸菌16S rRNA領域検出用プライマーを用いて40 サイクルの direct PCRを行った。矢印で示した位置に,大腸菌16S rRNA領域由来のバンド(366 bp)が検出された。外部から添加した大腸菌ゲノムの平均分子数は,0分子~1分子と少ないことから各チューブの中にゲノムが存在する確率(0分子, 1分子, 2分子, 3分子…)は,ポアソン分布に従っている。40バッチ中何個のバッチで大腸菌ゲノムが検出されるかは,理論値として右端に示している。実際の実測値は,右から2列目に示している。これら実測値は,理論値に近く,本方法で1分子の大腸菌ゲノムが,検出できていることを示している。また,外部から大腸菌ゲノムを添加していない場合では,40バッチの検定でもバンドが検出されていない。このことから,大腸菌ゲノムのコンタミネーションは,1 unitあたり0.05分子未満(理論値1.95バッチ未満)であることがわかる。
[在庫・価格 :2021年01月21日 16時51分現在]
詳細 | 商品名 |
|
文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Pfu DNA Polymerase, UltraPure (with dNTP) |
|
本製品は取扱中止になりました | 0 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Pfu DNA Polymerase, UltraPure |
|
本製品は取扱中止になりました | 0 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
[在庫・価格 :2021年01月21日 16時51分現在]
■関連製品
[在庫・価格 :2021年01月21日 16時51分現在]
詳細 | 商品名 |
|
文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
DynaMarker, DNA Low D |
|
0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
[在庫・価格 :2021年01月21日 16時51分現在]
DynaMarker, DNA Low D
文献数:0
- 商品コード:DM112
- メーカー:BDL
- 包装:1set
-
価格:
¥15,000特別価格 ¥12,000 - 在庫:2個
- 納期:2~3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等:
キャンペーン期間 |
2020/11/16 ~ 2021/02/26
[BDL]バイオダイナミクス研究所年度末10%~30%OFFキャンペーン [~2021/02/26] |
||
---|---|---|---|
説明文 |
DNA分子量ラダーマーカー(DNA Ladder Marker)。Ready-to-LoadのDNA分子量マーカー。50~1,000 bp。6×BPB loading dye(1 ml)添付。容量:1 ml(5~10μl/lane)。容量:1 ml(5~10μl/lane) |
||
法規制等 | |||
保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
掲載カタログ |
ニュース2019年5月1日号 p.27 ニュース2018年11月15日号 p.59
|
||
製品記事 |
DynaMarker DNA Ladder Marker バイオダイナミクス研究所 製品特集 DNA分子量ラダーマーカー(DNA Ladder Marker)選択ガイド |
||
関連記事 |
追加しました。
製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。