R&D Systems(R&Dシステムズ)社 Quantikine Kit 操作マニュアル
掲載日情報:2017/09/01 現在Webページ番号:80555
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- R&D Systems(R&Dシステムズ)社 Quantikine Kit 操作マニュアル
- キット内容
- 準備する物
- 測定可能試料および調製法
- 試薬の調製
- スタンダードの調製法
- 操作時の注意点
- アッセイ方法
R&D Systems(R&Dシステムズ)社 Quantikine Kit 操作マニュアル
R&D Systems(R&Dシステムズ)社 Human VEGF Quantikine ELISA Kit(#DVE00)の操作方法概略です。一般的なELISA キットの操作の参考にして下さい。
※ご注意
ご使用前に必ず各製品添付のデータシートをご覧の上、その指示に従って下さい。
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キット内容
- VEGF microplate(捕捉用抗VEGF 抗体がコートされた96well マイクロストリッププレート)
- VEGF conjugate(HRP 標識検出用抗VEGF 抗体)
- VEGF standard(VEGF スタンダード)
- Assay diluent RD1W(測定用バッファー)
- Calibrator diluent RD5K( 細胞培養上清試料用希釈バッファー)
- Calibrator diluent RD6U(血清・血漿試料用希釈バッファー)
- Wash buffer concentrate(洗浄用バッファー)
- Color reagent A(安定化させたH2O2 )
- Color reagent B(TMB:HRP の基質)
- Stop solution(反応停止液)
- Plate sealer(プレートシーラー)
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準備する物
- マイクロプレートリーダー(450 nm で吸光度を測定可能な物。 補正波長の540 または570 nm が測定できる物がよい。)
- ピペット、ピペットチップ
- 蒸留水
- プレートウォッシャーまたは、プレート洗浄用ボトル
- 500 ml シリンダー
- ポリプロピレンチューブ(12 mm × 75 mm)
- 測定試料
- Human VEGF コントロール(別売品:必要に応じて)
…など
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測定可能試料および調製法
- 細胞培養上清(VEGF の安定化のために、少なくとも1%のfetal calf serum を加えて下さい。)
- 血清
- 血漿(抗凝血剤としてEDTA、クエン酸、ヘパリンのいずれかで処理した試料)
※ 詳細は製品添付のデータシートの「SAMPLE COLLECTION &STORAGE」の項目をご覧下さい。
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試薬の調製
※ 使用する前に試薬はすべて室温に戻して下さい。
洗浄用バッファー :バッファー中に沈殿物が生じている場合は室温に戻し、よく混合して下さい。その後、最終容量が500 mになるように480 ml の蒸留水を加えて20 ml のWash buffer concentrate を希釈して下さい。
基質溶液 :使用する15 分前にColor reagent A・B を等量ずつ混合して下さい。各ウェルに200 μ l ずつ必要です。混合後は 必ず遮光して下さい。
VEGF スタンダード :測定する試料(因子)によって希釈に使用するCalibrator diluent が異なります。添付のプロトコルをご覧下さい。希釈前に、15 分間穏やかに撹拌して下さい。
※ スタンダードを調製する際は、ポリプロピレンチューブ(12mm × 75 mm)をご使用下さい。
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スタンダードの調製法
* Calibrator diluent はあらかじめ500 μ l ずつ各チューブに分注して下さい。
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操作時の注意点
- すべての試料、スタンダードおよびコントロールは二重試験法でアッセイして下さい。
- タンパク質を含む試薬を取扱う際には、気泡を立てないようにして下さい。
- クロスコンタミネーションを避けるために、ピペットチップやリザーバーは試薬ごとに変えて下さい。
- インキュベーション中は必ずプレートシーラーでふたをして下さい。
- プレートウォッシャーを使用してプレート洗浄を行う場合には、プレートを30 秒間洗浄液にソークし、次の洗浄を行う前にプレートの左右の向きを入れ替えて下さい。
- 基質溶液は使用する15 分前に調製して下さい。調製後は必ず遮光して下さい。調製直後は青色ですが、ウェルに添加後、反応停止液を添加すると黄色に変化します。
- 基質溶液、反応停止液をウェルに添加した際に、ウェル中の溶液が緑色になってしまった場合は、プレートを軽くゆすって試薬を混合して下さい。
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アッセイ方法
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