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ダウンストリーム実験に最適な、組換え体タンパク質および抗体の発現・精製サービス 組換え体タンパク質 & 組換え抗体受託作製サービス(GenScript社)

掲載日情報:2022/11/28 現在Webページ番号:7838

GenScript社の組換え体タンパク質、および組換え抗体(リコンビナント抗体)受託作製サービスです。いただいた目的タンパク質の配列情報をもとに、GenScript社独自のGenSmart™コドン最適化ツールおよび高密度培養により、目的タンパク質の発現レベルを大幅に向上することができ、高品質の製品を柔軟かつ効率の高い方法でお届けします。バクテリア昆虫細胞、および哺乳動物細胞発現系を含む多様なタンパク質発現システムをご提供します。そして、エンドトキシン(Endotoxin)の除去、品質管理(QC)を実施後に高品質の製品をお届けします。

GenScript社の組換えタンパク質&組換え抗体受託作製サービスワークフロー

  • ①:ご提供いただいた目的タンパク質の配列情報
  • ②:GenScript社でコドンの最適化、遺伝子の合成および発現システムの設計
  • ③:発現ベクターの構築
  • ④:形質転換および細胞培養

  • ⑤:タンパク質精製
  • ⑦:QC

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発現系のご案内

バクテリア
昆虫細胞
哺乳細胞

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GenSmart™コドン最適化について

GenSmart™コドン最適化(特許番号:WO2020024917A1)は、CHO、ヒト、大腸菌、T細胞、酵母、昆虫、シロイヌナズナ、トウモロコシ、イネ、大豆、フルーツフライ(fire fly)など、約50種類の宿主生物に適用されています。GenSmart™コドン最適化ツールを使用することで、バクテリアや哺乳類の発現システム等において、より高い遺伝子発現を実現する最適化された遺伝子配列の設計を実施できます。

GenSmartコドン最適化

GenSmart™コドン最適化

GenSmart™コドン最適化は、遺伝学と免疫学の両方の理論を活用したアルゴリズムに基づいて設計されています。このアプローチでは、GC含量、コドンUsage、コンテンツインデックス、RNaseスプライシングサイト、シス作用型mRNA不安定化モチーフなど、遺伝子発現に関わる200因子以上をスクリーニングし、検証しています。計算に単一因子シミュレーションを適用するのではなく、標的遺伝子配列のすべての重要な因子に重みを持たせるために多因子アプローチを採用しています。その結果、各遺伝子の最適化は完全にカスタマイズされ、機能的で活性のあるタンパク質を得る可能性を最大限に高めることができます。

特長

  • 包括的な因子分析: 200因子以上をシステムにより検証します。
  • 高度なコンピューティング: 特許取得済みのアルゴリズムにより最適な結果が得られます。
  • 個別の遺伝子配列ベース: 重要な因子への重み配分のへの偏りが生じないよう、高度にカスタマイズされています。

検証例 1. GenSmart™コドン最適化ツールの効果検証 (GenScript社内データ)

  • 目的:JNK3およびGFPタンパク質の発現を増加させるためのGenSmart™コドン最適化ツールの性能評価。
  • アプローチ:野生型と、最適化された各遺伝子の配列を発現ベクターにクローニングし、CHO 3E7細胞を用いて3つの異なるクローンからのタンパク質発現を、ウエスタンブロット法により評価した。
  • 結果:GenSmart™によって最適化された配列から得られた3つのGFPおよびJNK3クローンは、最適化されていないネイティブの遺伝子配列と比較して、タンパク質発現がそれぞれ18倍および8倍程度の有意な増加を示した(下図参照)。
Western Blotting
Relative Expression Level

図をクリックすると拡大します(拡大図

検証例 2. 各社コドン最適化ツールを用いて最適化したコドンの編集効率の評価(ユーザー様提供データ)

  • 目的:様々なコドン最適化ツールを用いて最適化されたBE4ベースエディターバリアントの遺伝子発現が遺伝子編集効率に及ぼす影響の調査。
  • アプローチ:A社、B社, C社, GenScript社(GS)のコドン最適化ツールを用いてBE4の核局在化コドンを最適化し、HEK293細胞における遺伝子発現と編集効率を評価した。
  • 結果:GenScript(GS)社、B社、C社のツールで最適化されたコドンは、A社のものと比較して編集効率が向上した。GenScriptのコドン最適化のみで最適化されたキメラバリアントは、他のツールよりも高い編集効率を導いた。

Western Blotting

図をクリックすると拡大します(拡大図

各社コドンを用いて最適化したコドンの編集効率の評価

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BacPowerカスタムタンパク質産生サービス(バクテリア発現系)

GeneScript社では、膜タンパク質、毒性を有するタンパク質、さらにイオンチャネルタンパク質などの発現が困難な一部のタンパク質の産生や、スケールアップに伴う様々な問題にも対応するため、専門的知識と技術を基盤としたバクテリア発現系タンパク質産生サービスを用意しており、最先端のソリューションを提供します。コドン最適化から遺伝子合成、小スケールでの発現評価、生産のスケールアップ、さらに産生タンパク質の精製に至るまで、工程ごとに対応した必要な処理を行います。この革新的な BacPowerカスタムタンパク質産生サービスにより、これまでに10,000件の組換え体タンパク質発現に成功しました。プロジェクト成功率は>92%であり、キナーゼ、サイトカイン、さらに困難とされる膜貫通型タンパク質やイオンチャネルタンパク質など、多岐におよぶタンパク質を産生/精製実績を誇ります。また、頻繁に使用されるE. coli発現系に加え、低エンドトキシンレベル(<10 EU/mg)、またGRAS(generally regard as safe)タンパク質の発現や分泌タンパク質の発現に理想的な、B. Subtilisによる発現プラットフォームにも新たに対応しています。

特長

  • 困難なタンパク質産生などに最適です。
  • ご要望を満たす柔軟なテーラーメードサービスを低価格で提供します。
  • 納期:最短4週間で精製タンパク質を出荷します。
  • 独自のコドン最適化を使用した遺伝子設計、BacPower発現系、タンパク質リフォールディングを含む最先端技術を使用します。
  • One-stopサービスプラットフォーム:遺伝子合成からタンパク質産生まで一貫したサービスをご提供します。

BacPowerカスタムタンパク質産生の包括的サービス内容の一覧

  • ①:遺伝子合成
  • ②:サブクローニング
  • ③:発現の最適化
  • ④:パイロットスケールでの発現評価と精製
  • ⑤:タンパク質リフォールディング
  • ⑥:タグの除去
  • ⑦:SDS-PAGEとウェスタンブロッティングによる評価
  • ⑧:HPLC
  • ⑨:質量分析による評価
  • ⑩:LC-MS/MSによる分析
  • ⑪:サイズ排除クロマトグラフィーによる分析
  • ⑫:N-末端シークエンシング
  • ⑬:タンパク質の多段階精製
  • ⑭:アイソトープ標識タンパク質産生による評価
  • ⑮:タンパク質の大規模生産
  • ⑯:プロトコルの移行
  • ⑰:産生タンパク質の活性試験

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BacuVanceカスタムタンパク質産生サービス(バキュロウイルス発現系)

バキュロウイルスを感染させた昆虫細胞を用い、組換え体タンパク質を産生させるBacuVanceバキュロウイルス発現系によるタンパク質産生サービスです。GenScript社は、米国における最大規模の遺伝子合成サービス提供事業者であり、目的タンパク質の発現を増強させるため、Sf9、Sf21、およびHi-5の昆虫細胞株における特異的なコドン最適化をcodon optimization技術によって無償で行っています。
バキュロウイルス発現系には発現タンパク質の溶解性、翻訳後修飾の導入、分泌型タンパク質の産生量増加など、E. coli発現系にはない複数の利点があります。哺乳動物細胞発現系の低価版代替法として真核生物による発現系を検討しつつも、産生される組換え体タンパク質の品質を犠牲にはできない場合、本発現系の使用を強くお奨めします。

概要

ステップ 概要 作業期間*4 納品物

遺伝子合成 and/or
サブクローニング
  • 独自プラットフォームによる遺伝子合成とコドン最適化
    (オプション)
  • 1種類以上のベクターにサブクローニング
2週間
  • コンストラクトに関する報告書

ウイルス発現系作製
  • 組換えBacmid DNA作製
  • 昆虫細胞に組換えBacmid DNAをトランスフェクション
  • P1ストック(低力価)およびP2ストック(高力価)産生、およびqPCRによりウイルス力価の測定
  • 抗Hisまたは抗GST抗体によりタンパク質発現を検証
2週間

パイロット発現&
タンパク質を精製評価
  • 昆虫細胞をP2ストックにより感染
  • ワンステップでのアフィニティ精製
  • SDS-PAGEおよびウェスタンブロッティングによる検証
1.5週間
  • 発現データ

1Lでのタンパク質発現と精製
  • 昆虫細胞1L培養によりタンパク質産生
  • ワンステップでのアフィニティ精製
  • QC*3
1~2週間
  • 精製タンパク質
  • QCデータ

*3 タンパク質の純度はSDS-PAGE、タンパク質濃度はBCAまたはBradford試験により測定。タンパク質の同定は抗Hisまたは抗GST抗体を用いてウェスタンブロッティングにより識別、必要に応じてLC-MSによるペプチドマッピングを実施。
*4 作業期間は、プロジェクトの内容に応じて変更となる可能性があります。
:本サービスの納品物は、「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律(通称:カルタヘナ法)」使用規制対象となりますので、ご使用に際しては、規制に則し、適切にお取り扱い下さい。

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TurboCHO™カスタムタンパク質産生サービス(哺乳動物細胞発現系)

哺乳動物細胞における一過性発現は、下流のアプリケーションのために翻訳後修飾や適切なタンパク質フォールディングが必要な場合に特に重要です。GenScript社が開発した独自の次世代CHO一過性発現は、収量を大幅に向上させ、作業期間を短縮します。スモールスケール(μgレベル)からラージスケール(kgレベル)までのタンパク質産生も可能であり、高い費用対効果を得ることが出来ます。本発現システムでは、スケール間で一貫性があるため、不測の事態を最小限に抑えることができます。

特長

  • 作業期間には遺伝子合成が含まれます。
  • フルレンジのQCおよび特性解析を実施します。
  • 豊富な経験を活用し、高い費用対効果を実現します。
  • 独自のQRコードによる追跡と自動化により、エラー率ゼロを達成しています。
  • 同一のCHO細胞株でスケールアップするため、一貫性が担保されます。
TurboCHOによるタンパク質&抗体発現サービス

動画 Next Generation CHO Transit Expression

概要

サービスの分類 CHO-HT(ハイスループット) CHO-Express CHO-HP*9
ご依頼のタンパク質量 発現スクリーニングまたはタンパク質の納品(目標量*5 0.1~5 mg) ≤500 mg 500 mg~kg
最少試料数 8
作業期間最短
(遺伝子合成を含む)
2週間*6 3週間 6週間
平均収量(抗体) 300 mg/L 400 mg/L 1.5 g/L
納品物
  • 純度:≥90%
  • エンドトキシン含量*7
    :≤1 EU/mg
  • 純度:≥95%(抗体)、≥90%(タンパク質)
  • エンドトキシン含量*8:≤1 EU/mg
  • 濃度:5~10 mg/ml(抗体)、≥1.0 mg/ml(タンパク質)
基本QC SDS-PAGE, A280 SDS-PAGE, SEC-HPLC, エンドトキシン
追加QCおよび特性解析 エンドトキシン*7, LC-MS*7、SEC-HPLC LC-MS
親和性試験、交差反応性、エピトープマッピング、in vitroin vivoでの有効性、凍結融解サイクルによる安定性試験、
無菌試験など
精製 標準のワンステップ精製法
(オプション*8:2または3ステップ)
複数の精製ステップを含む
  • *5 目標量(0.1~5 mg)は、全長IgGの一般的なアイソタイプに基づいたものであり、保証されておりません。
  • *6 2週間の作業期間は抗体および抗体フラグメントに基づいています。
  • *7 サンプルの5%をランダムに選択し、エンドトキシンとLC-MSの分析を行います。全試料の試験は、追加料金にて承ります。
  • *8 タンパク質のタイプに基づいたワンステップ精製が基本ですが、ご要望に応じて追加の精製ステップをご提供できます。
  • *9 パイロット発現評価は、CHO-HPでのみご依頼可能です。

Note

  • このカスタマイズされたソリューションは、あらゆるタイプのタンパク質、抗体種およびアイソタイプ、フラグメントに対応します。
  • すべてのプロジェクトが評価の対象となります。
  • ご要望に応じて追加のQCと特性解析を別料金でご提供できます。

発現量の比較例

CHO-HT

図をクリックすると拡大します(拡大図

CHO-Epress/-HP

図をクリックすると拡大します(拡大図

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特長

  • スケールアップが簡単です。
  • 納期が短く、ご希望の抗体を迅速に産生し納品します。
  • 低コストです。
MamPilot 組換え抗体発現サービス

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ご注文方法

サービスによってご提供いただくものが異なっています。詳細は当社受託・特注品担当(下記参照)までお気軽にお問い合わせ下さい。
※価格、納期等については、ご依頼内容に応じて個別にお見積りします。

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