ゲノム内の「安全な」遺伝子領域を標的として、相同組換えを起こすためのキット AAVS1 Safe Harbor TALE-Nuclease Kit
掲載日情報：2020/06/12 現在Webページ番号：7577
ゲノム内の「安全な」領域（Safe Harbor）であるAAVS1遺伝子を標的として、TALEN（Transcription Activator-Like Effectors Nucleases）を用いて目的遺伝子を組み込むためのキットです。
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特長
- AAVS1を標的とするTALENは、AAVS1を効率良く切断することを確認済みです。
- ドナーベクターはGFP遺伝子を含むため、目的遺伝子の組み込みを蛍光顕微鏡観察で確認することができます。
- 同一のAAV1遺伝子領域に、繰り返し相同組換えを起こすことができます。
- ES細胞やiPS細胞へのターゲティング効率は、40～80％です。
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原理
まず、ホストゲノム内に組み込みたい目的遺伝子（cDNAやmiRNA）を、ドナーベクター上のMCSに組み込む。AAVS1を標的としたTALEN発現ベクターを発現させてAAVS1遺伝子を切断し、次いで目的遺伝子を組み込んだドナーベクターを発現させ、相同組換え修復を利用して、ホストゲノム内に目的遺伝子を組み込ませる。
AAVS1を標的とするTALENペアとその標的部位（AAVS1遺伝子）の塩基配列
プラスミドマップ
(上)AAVS1を標的とするTALEN発現ベクター。
(左下)AAVS1領域で相同組換えを起こすためのドナーベクター。ポジティブコントロール用として、RFP遺伝子を含む。
(右下)AAVS1領域で相同組換えを起こすためのドナーベクター。MCSに目的遺伝子を組み込んで使用する。
ポジティブコントロールドナーベクター＋AAVS1を標的としたTALENペア発現ベクターを、HEK293T細胞に導入した。
ポジティブコントロールドナーベクターを単独で導入した場合は、ほとんど組換えが起こらない。コントロールドナーベクターと共にTALEN発現ベクターを導入した場合は、 相同組換えが良く生じたことが分かる。
ポジティブコントロールドナーベクターとTALENペア発現ベクターを、HEK293T細胞に導入した。その後、HEK293T細胞ゲノムDNA試料（200 ng）と、キットに付属のJunction PCR用プライマーを用いて、ドナーベクター由来の配列がHEK293T細胞ゲノムに組み込まれたかを、Junction PCRにより解析した。その結果、TALENの切断部位の上流（5’側）に位置する領域（レーン1）、下流に位置する領域（レーン2）がそれぞれPCRで増幅された。このことから、相同組換えが成功したことが分かる。
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キット内容
- pZT-AAVS1-L1/R1 vectors (L+R TALEN constructs)
- pAAVS1D-PGK-MCS-EF1a-copGFP-T2A-puro cloning donor vector
- pAAVS1D-CMV-RFP-EF1a-copGFP-T2A-puro positive control donor vector
- 5' and 3' AAVS1 positive control donor vector primer mixes for Junction PCR assays
※キット付属品の別売りもあります（下記参照）。
[在庫・価格 ：2024年04月20日 15時35分現在]
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AAVS1 Safe Harbor TALE Nuclease Kit |
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[在庫・価格 ：2024年04月20日 15時35分現在]
■キット別売品
[在庫・価格 ：2024年04月20日 15時35分現在]
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AAVS1 Safe Harbor TALE Nuclease pair [pZT-AAVS1-L1 and pZT-AAVS1-R1] |
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AAVS1 Safe Harbor cDNA/miRNA Donor Vector [pAAVS1D-PGK.MCS-EF1a.copGFPpuro] |
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AAVS1 Safe Harbor Positive Control Donor Vector [pAAVS1D-CMV.RFP-EF1a.copGFPpuro] |
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5' and 3' AAVS1 Positive Control Donor Vector Primer Mixes for Junction PCR Assays |
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[在庫・価格 ：2024年04月20日 15時35分現在]
AAVS1 Safe Harbor TALE Nuclease pair [pZT-AAVS1-L1 and pZT-AAVS1-R1]
文献数： 0
- 商品コード：GE601A-1
- メーカー：SBI
- 包装：1set
- 本製品は取扱中止になりました
| 説明文 | |||
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 法規備考 | ||
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 | |||
| 関連記事 | |||
AAVS1 Safe Harbor cDNA/miRNA Donor Vector [pAAVS1D-PGK.MCS-EF1a.copGFPpuro]
文献数： 0
- 商品コード：GE602A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥260,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
AAVS1 Safe Harbor Positive Control Donor Vector [pAAVS1D-CMV.RFP-EF1a.copGFPpuro]
文献数： 0
- 商品コード：GE603A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥260,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
5' and 3' AAVS1 Positive Control Donor Vector Primer Mixes for Junction PCR Assays
文献数： 0
- 商品コード：GE603PR-1
- メーカー：SBI
- 包装：1set
- 価格：¥52,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
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