動的オルガノイド培養をハイスループット化および低コスト化します！ 三次元オルガノイド培養デバイス　Pillar/PerfusionPlate Platform

• 三次元オルガノイド培養とその問題点
• 特長
• 製品ラインナップと各製品の概要
• 製品選択ガイド
• 操作方法概略
• 使用例
• メーカー資料
• 動画
• 価格

三次元オルガノイド培養とその問題点

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特長

• ロッカー式のシェーカー（インターバル機能付き）を用いて培地の流れを作ることで、外部ポンプなしで動的細胞培養ができます。
• 既存の灌流培養デバイスよりも安価で、コストパフォーマンスに優れています。
• 1プレートあたり最大144試料の動的培養が可能で、ハイスループット解析に適しています。
• necrotic coreの形成抑制とオルガノイド成熟度の向上により、高品質なオルガノイド培養が可能です。
• 脳、肝臓、腸、膵臓、がん組織由来細胞でのオルガノイド培養実績があり、幅広い試料で使用できます。
• 製品の組み合わせを変えることで、動的培養と静置培養の両方に対応します。
• 標準的な384ウェルプレートフォーマットに対応し、自動化されたワークフローに対応します。
• 培養後、そのまま顕微鏡やウェルプレートリーダーで解析可能です。

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製品ラインナップと各製品の概要

Pillar/PerfusionPlateプラットフォームは、PillarPlate、PerfusionPlate、PetriLid、DeepWellPlate、LoadingPlateの5つの製品群から構成されています。培養手法（動的培養／静置培養）や培養スケールに応じて、最適な製品を選択できるように設計されています。

PillarPlateについて

PillarPlateは、先端に十字型のスリットを持つ円柱（Pillar）が並べられたプレートです。1プレートあたりのPillarの数に応じて36PillarPlate、144PillarPlate、384PillarPlateの3種類がラインナップされています。スリット内部の空間にマトリゲルなどのハイドロゲルに懸濁した細胞またはスフェロイドをロードし、三次元培養を行います。PillarPlateには4種類の方法で細胞またはスフェロイドをロードできますが（操作方法概略をご参照下さい）、その中でもLoadingPlateを用いることで、低コストかつ効率よくPillarPlateに細胞を封入できます。

PerfusionPlateについて

PerfusionPlateは、動的培養専用に設計されたプレートです。PillarPlateと組み合わせて使用します。36PillarPlateに対応する36PerfusionPlateと、144PillarPlateに対応する144PerfusionPlateの2種類がラインナップされています（384PillarPlateには対応しません）。プレート中央にPillarPlateをセットするスペースがあり、その左右に列ごとに区切られた培地リザーバーがあります。ロッカー式のシェーカー（インターバル機能付き、MIMETAS社製OrganoFlow L Digital Rocker、Next Advance社製RoboRocker 210 seriesなど）で振とうすることで、PillarPlateとPerfusionPlateの間の隙間に培地が流れます。ポンプやチューブ配管を接続することなく、灌流培養と同様の培地の流れを生み出し、新鮮な培地を細胞に供給できます。それぞれのPillarに異なる細胞を封入しての共培養実験や、薬剤感受性試験などの用途に使用できます。また、培養途中でセットしたPillarPlateを90度回転させることで、共培養実験中に細胞の組み合わせを変更したり、薬剤試験中に処理する薬剤を変えたりすることも可能です。

PetriLidについて

PetriLidは、PillarPlateがフィットする形の穴が空いたペトリ皿のフタです。36PillarPlateに対応する36PetriLidと、144PillarPlateに対応する144PetriLidの2種類があります（384PillarPlateには対応しません）。どちらも直径90 mm×高さ15 mmのペトリ皿と組み合わせて使用するように設計されています。PillarPlateにロードしたハイドロゲルがゲル化するまでのインキュベート用容器として用いるほか、単一条件下での静置培養、シェーカーを用いた動的培養にも使用できます。
※ PetriLidは直径90 mm×高さ15 mm以外に直径100 mm×高さ20 mmのペトリ皿にも適合します。使用する培地量・試薬量に応じて使い分けて下さい。

DeepWellPlateについて

DeepWellPlateは、静置培養専用のプレートです。36PillarPlate、144PillarPlate、384PillarPlateのすべてに対応します。

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製品選択ガイド

ラインナップの中から、以下のフローに従って必要な製品をお選び下さい。

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操作方法概略

ここでは、PillarPlateへの細胞のローディングと、PillarPlateにロードした細胞の培養の概要のみを記載しています。詳細についてはマニュアルをご参照下さい。

ステップ1：PillarPlateへの細胞・スフェロイドのローディング

1. PillarPlateをセットしたPetriLidを、5 mlの滅菌水を分注した直径100 mm×高さ20 mmのディープペトリ皿にセットし、37℃、5％CO₂インキュベーター内で30分インキュベートする。

※ 気泡が入ることを防ぐため、事前にPillarPlateの表面を湿潤環境下で水和させ、親水化する必要があります。ただし、過剰な水分は均一な親水化を妨げる可能性があるため、PillarPlateが水に直接触れないようにして下さい。

2. PillarPlateに以下の4つの方法のいずれかで、細胞またはスフェロイドをロードする。

• ハイドロゲルに懸濁した細胞を、マイクロピペットでPillarPlateに一つずつ分注する。
• ハイドロゲルに懸濁した細胞をLoadingPlateに塗り広げ、PillarPlateを逆さにして押し当てることでロードする（Pillar stamping）。
• ハイドロゲルに懸濁した細胞を、自動分注ロボットでPillarPlateに一つずつ分注する。
• スフェロイドをロードする場合は、市販の384ウェル超低接着プレートでスフェロイドを事前に形成した後、ハイドロゲルをロードしてゲル化させたPillarPlateを384ウェルプレートにセットする。プレートを逆さにして、スフェロイドをPillarPlateのスリット内に沈殿させてロードする（Spheroid transferring）。

ステップ2：PillarPlate上のハイドロゲル懸濁液のゲル化処理

細胞またはスフェロイドをロードしたPillarPlateを、対応するサイズのPetriLidおよび直径100 mm×高さ20 mmのディープペトリ皿にセットし、ハイドロゲルのゲル化処理を行う。

• アルギン酸ゲルを用いる場合、ペトリ皿に分注した20 mM CaCl₂、5 mM BaCl₂溶液中で、アルギン酸ゲルと細胞懸濁液が封入されたPillarPlateを5分間インキュベートする。その後、0.9％ NaCl溶液で5分間洗浄する。
• マトリゲルの場合、マトリゲルと細胞懸濁液が封入されたPillarPlateをPetriLidにセットし、滅菌水を入れたペトリ皿上で37℃、15～20分インキュベートする。
• アルギン酸／マトリゲルの混合ゲルの場合は、上記に従ってマトリゲル、アルギン酸の順でゲル化処理を行う。

ステップ3：PillarPlateにロードした細胞、スフェロイドの培養

PillarPlateを目的に応じてPerfusionPlate、PetriLid、DeepWellPlateのいずれかにセットして培養を行う。培養後は、そのまま顕微鏡観察や免疫染色などの下流解析を行うことが可能。

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使用例

PillarPlate上での各種細胞の培養例

ヒト肝臓オルガノイドのPerfusionPlateを用いた培養例

ヒト脳オルガノイドのDeepWellPlateを用いた培養例

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メーカー資料

詳細な使用方法については、下記のマニュアルをご参照下さい。

• SOPs_Immune-Tumor Cell Co-Culture_052226（がん細胞と免疫細胞の共培養）
• SOPs_Cell Suspension Culture in Alginate on Pillar Plate_052226（アルギン酸ゲルを用いた培養）
• SOPs_Cell Suspension Culture in Alginate-Matrigel on Pillar Plate_052226（アルギン酸ゲル、マトリゲルの混合ゲルを用いた培養）
• SOPs_Cell Suspension Culture in Matrigel on Pillar Plate_052226（マトリゲルを用いた培養）
• SOPs_Dynamic Cell Culture in Perfusion Plate_052226（PerfusionPlateを用いた動的培養）
• SOPs_Spheroid Culture in Alginate-Matrigel on Pillar Plate_052126（アルギン酸ゲル、マトリゲルの混合ゲルを用いたスフェロイド培養）
• SOPs_Spheroid Culture in Matrigel on Pillar Plate_052126（マトリゲルを用いたスフェロイド培養）

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動画

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価格

36PillarPlate / 36PerfusionPlate / 36PetriLid

144PillarPlate / 144PerfusionPlate / 144PetriLid

384PillarPlate / 384DeepWellPlate

LoadingPlate

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