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トポイソメラーゼ阻害物質のスクリーニング用キット Topoisomerase Drug Screening Kit

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:7341

スーパーコイルDNAを基質として使用し、トポイソメラーゼ活性を阻害する物質をスクリーニングするキットです。

本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
キットにトポイソメラーゼは含まれていません。別途ご用意下さい。


トポイソメラーゼとは

トポイソメラーゼ(Topoisomerase)は、DNAスーパーコイルの弛緩と形成に関与しており、複製、転写、組換え、修復などのDNA代謝に関わる酵素です。トポイソメラーゼ Ⅰ(Topo Ⅰ)は、二本鎖DNAの片方の鎖を、トポイソメラーゼ Ⅱ(Topo Ⅱ)は両方の鎖を一時的に切断します。このとき、DNAの切断部位とトポイソメラーゼの共有結合複合体である反応中間体(Cleavage Complex)を形成し、切断鎖を再結合させることにより、DNAのスーパーコイル構造を変化させます。トポイソメラーゼ Ⅳ(Topo Ⅳ)は、E.coli Topo Ⅱの一種で、キノロン系抗生物質のターゲットとされています。

トポイソメラーゼ阻害物質は、抗菌作用・抗がん作用を有することが明らかになっており、阻害様式の違いにより主に2種類に分類されます。トポイソメラーゼのDNA結合能やATPase活性を阻害するものは触媒阻害型(CIC:Catalytic Inhibitory Compound)と呼ばれ、反応中間体を安定化させDNA切断後の再結合を阻害するものはトポ毒型(IFP:Interfacial Poison)と呼ばれます。トポイソメラーゼ阻害物質は、創薬ターゲットとして盛んに探索が行われています。


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特長

  • 基質となるスーパーコイルDNAと、トポイソメラーゼ、標的化合物を反応させた後、タンパク質変性剤(Proteinase K)を用いて、DNA / Topo共有結合複合体を分解します。反応生成物のDNA構造は、アガロースゲル電気泳動(エチジウムブロミド染色)のバンドパターンとして検出されます。そのバンドパターンからトポイソメラーゼ阻害物質を同定できます。
  • Topoisomerase Ⅰ / Ⅱ / Ⅳ Drug Screening Kitでは、基質DNAとしてスーパーコイルプラスミド(pHOT1)を使用し、CICおよびIFPタイプの阻害物質を同定できます。コントロールとしてIFPタイプの阻害物質が含まれています。
  • Topoisomerase Ⅱ Drug Screening Kit(kDNA Based)では、基質DNAとして連環状DNAであるキネトプラストDNA(kDNA)を使用します。トポイソメラーゼⅡによるkDNAの脱連環反応で生じる環状DNAを指標とし、CICタイプの阻害物質を容易に同定できます。コントロールとしてIFPタイプの阻害物質が付属しているため、IFPの同定も可能です。

Topoisomerase Ⅰ Drug Screening Kit(#TG1018)とTopoisomerase Ⅰ(#2005H-RC1)を用いて酵素反応を行い(37℃、30分間、SDSで反応停止)、Proteinase Kで処理(50μg/ml、37℃、60分間)した後、1%アガロースゲルで電気泳動を行った。Topoisomerase Ⅰ阻害物質Camptothecinにより、ニックの入った反応中間体の安定化が起こり、開環状DNA(OC DNA)として検出された。

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キット内容

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Topoisomerase Ⅰ / Ⅱ / Ⅳ Drug Screening Kit

  • pHOT1 DNA, supercoiled
  • Marker DNA, linear pHOT1
  • Proteinase K
  • SDS
  • Gel loading buffer
  • Control inhibitor*1
  • Buffer*2

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Topoisomerase Ⅱ kDNA Based Drug Screening Kit

  • kDNA substrate (catented)
  • Decatenated and linearized kDNA marker
  • Buffer A / B
  • Control inhibitor, VP-16 (etoposide)
  • Proteinase K
  • SDS
  • Gel loading buffer

*1Camptothecin(#TG1018)、VP-16(etoposide)(#TG1009)、Ciprofloxacin(#TG1007)
*2キットにより内容が異なります。
キットにトポイソメラーゼは含まれていません。別途お求め下さい(下記参照)。

[在庫・価格 :2024年04月26日 19時35分現在]

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Topoisomerase I Drug Kit (100assays)
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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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