筋萎縮性側索硬化症（ALS）や神経筋疾患のin vitroモデリングに有用です ヒトiPS細胞由来運動ニューロン RealMOTO／運動ニューロンへの分化キット Moto-DM

RealMOTOは、ヒトiPS細胞（hiPSC）由来運動ニューロンです。また、わずか7日間で簡便かつ効率的にhiPSCから運動ニューロンへ分化誘導できるキットもあります。分化誘導キットMoto-DMは、ALSに限らずシャルコー・マリー・トゥース病（Charcot-Marie-Tooth disease、CMT）など神経筋疾患のin vitroモデリングに有用です。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

• hiPSC由来運動ニューロンです。
• 主要な運動ニューロンマーカーHB9、ISL1およびChATを発現します。
• 播種後わずか7日間で成熟します。
  ※ RealMOTOの成熟には運動ニューロン成熟化培地Moto-MM（#3030-B002）が必要です。Moto-MMを用いた成熟化のプロトコルは下記クイックガイドからご確認下さい。

クイックガイド

RealMOTOを20,000 cells/cm²で解凍し、Moto-MM培地で1週間成熟させた。
A：位相差顕微鏡を用いた観察では、運動ニューロンに典型的な複数の樹状突起と長く単一の軸索をもつ細胞体がみられた。2週間以上、運動ニューロンは単一の細胞として維持し、クラスター形成は認められなかった。
B：運動ニューロンは、運動ニューロンの主要な特異的マーカーであるHB9、ISL1、およびChATが高発現した。
C：qPCRは初代ヒト脊髄由来の運動ニューロンのmRNAと比較して、運動ニューロン特異的遺伝子の発現量が高いことが示された。

hiPSC由来の運動ニューロンは機能的に活性化し、成熟後1週間以内にMEAにおいて、活動電位（スパイク）やバースト発火のパターンを示す。
A：Axion BioSystems社 CytoView MEA 24ウェルプレート上で運動ニューロンの播種密度および培養条件の再現性を得るため最適化した。運動ニューロンは24時間以内に急速に軸索を伸長した。
B：培養7日目の代表的なラスタープロットでは、20,000 cells/wellに比べ、40,000 cells/wellで播種した条件において、高頻度で活動電位（スパイク）やバースト発火のパターンが確認された。
C：活性電極比、MFR、wMFRを指標として定量評価を行った。

培養14日目の運動ニューロンにカルシウム指示薬のCalbryte 520 AMを添加し、アゴニストとアンタゴニストに対する応答を評価した。
運動ニューロンは、ナトリウムチャネル活性化因子であるベラトリジン（1 μM）と高カリウム（30 mM）に同期的なカルシウム活動で応答した。
さらに、電位依存性ナトリウムチャネル阻害物質テトロドトキシン（1 μM）により、これらの応答の阻害を確認した。

hiPSC由来運動ニューロンRealMOTOおよび初代ヒト骨格筋をニューロンの形態観察用チャンバーXonaChip 150 μm（#XC150、Xona Microfluidics LLC）に播種した。
運動ニューロンは、長さ150 μmの微小溝を通って軸索を迅速に伸長させ、骨格筋上にシナプスのような神経筋接合部を形成した。

微小電極アレイ（MEA）を用いた機能解析およびやhiPSCから9日間で迅速に分化誘導させたシュワン細胞前駆体RealSCPとRealMOTOとの共培養の詳細・操作手順は、以下のクイックガイドをご確認下さい。各画像をクリックすると、PDFをダウンロードいただけます。

hiPSCから運動ニューロンへ分化誘導するキットです。Anatomic社のPrimal Ectoderm Platformは、hiPSCを24時間で「原始外胚葉」に向かって分化し、わずか7日間で簡便（基本操作は培地交換のみ）かつ効率的にHB9/ISL1/TUJ1陽性未成熟運動ニューロンへ分化誘導します。Moto-DMは、ALS、CMT、または脊髄性筋萎縮症（Spinal muscular atrophy、SMA）などの神経筋疾患のモデリングに最適であり、効率的で再現性のある結果が得られます。

図. Moto-DMを用いてhiPSCから運動ニューロンへ分化誘導した各段階のマーカー発現
24時間でhiPSCから原始外胚葉に分化し、2日目までに脊髄外胚葉（SOX2、HOXB1）が形成される。4～6日目の間に、運動ニューロン前駆細胞への分化誘導が進み、OLIG2の発現が確認できる。その後、HB9/ISL1/TUJ1陽性の未成熟な運動ニューロンに分化する。

特長

• わずか7日間でhiPSCからHB9/ISL1/TUJ1陽性の未成熟な運動ニューロンに分化誘導できます。
• 基本操作は培地交換のみです。従来のプロトコルと比較して、迅速かつ簡便です。
• 純度75%の優れた効率で最大1,000万個のHB9/ISL1/TUJ1/CHAT陽性の運動ニューロンを製造できます。

キット内容

操作方法概略／各段階の細胞状態

培養スキーム

価格

Anatomic社hiPSC由来運動ニューロンのアプリケーション情報です。
画像をクリックすると、ポスター請求フォームにジャンプします。請求フォームよりご依頼いただいた方にポスターのPDFデータを送付させていただきます。

ヒト多能性幹細胞の運動ニューロンへの迅速な分化誘導

同一ドナーのhiPSC由来シュワン前駆細胞、運動ニューロン、感覚ニューロンを用いた髄鞘形成および脱髄促進化合物のハイスループットスクリーニングプラットフォームの開発

健常人／ALS患者のhiPSC由来シュワン前駆細胞と運動ニューロンの共培養システムの確立と運動ニューロンの活性変化

同一ドナーhiPSC由来のシュワン細胞、運動ニューロン、骨格筋細胞を用いた神経筋接合部モデル構築

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