in vitroモデリングに有用なヒトiPS細胞由来メラノサイト ヒトiPS細胞由来メラノサイト RealMELO

継代翌日のDay -3は約20％コンフルエンシーとなり、Day -1には約60％コンフルエンシーになる。

サプリメントMelo DMによる分化誘導開始の前日に、約60％コンフルエンシーのhiPSCを細胞外基質Matrix1でコートしたフラスコに播種する。

ROCK阻害物質でシングルセルに分散させると、尖った小さなhiPSCのコロニーが見られる。

サプリメントMelo DM1を用いた培養によって、均質な外胚葉に分化する。少数の細胞死が生じ、また小さなコロニーが集合して大きなコロニーを形成することで全体として表面積が小さくなっているため、細胞の培養密度が低く見える。サプリメントMelo DM2を含む培地に交換する。

サプリメントMelo DM2を用いた培養によって、HOXB4およびSOX2陽性のSpinal neural populationが産生される。コロニーの顕微鏡像はより明るくなり、エッジはより滑らかになる。数日後にはコロニーの中心部の密度が高くなる。サプリメントMelo DM3を含む培地に交換する。

サプリメントMelo DM3を用いた培養によって、PAX3陽性のNeural plate border populationが形成される。コロニーはより尖った形状になる。サプリメントMelo DM4を含む培地に交換する。

サプリメントMelo DM4を用いた培養によって、神経堤（Neural crest）前駆細胞（PAX3/SOX10陽性）に分化する。コロニーの端からシート様の塊となって広範囲に遊走し始める。コロニーの中心部はより立体的になり、色が黄色になってくる。コロニーの中心がより立体的になり、黄色に呈色することがある。サプリメントMelo DM5を含む培地に交換する。

サプリメントMelo DM5を用いた培養によって、PAX3とSOX10を発現するNeural crestの数が増加する。メラニン芽細胞に分化誘導させるために、サプリメントMelo DM6を含む培地に交換する。

サプリメントMelo DM6を用いた培養によって、細胞はMITF/SOX10/PAX3陽性のメラニン芽細胞に分化誘導されていき、樹状突起が伸長し始める。サプリメントMelo DM7を含む培地に交換する。

サプリメントMelo DM7を用いた培養によって、樹状突起の伸長を開始する未成熟のメラノサイト（単層）に完全に分化する。このメラノサイトの割合は、播種密度に依存して変動するが、70％以上になると考えられる。

このメラノサイトは未成熟な状態であり、分散して凍結保存＊1することに適していますが、メラニンを産生しません＊2。

＊1 凍結保存方法については、Melo-DM Technical Manualの「7.0 Dissociation of melanocytes produced with Melo-DM」および「8.0 Cryopreservation of melanocytes produced using Melo-DM」をご確認下さい。
＊2 この細胞をメラニン産生メラノサイトに成熟化させるにはMelo-MM（#2030）が必要です。成熟化についてはMelo-DM Technical Manualの「9.0 Plating and maturation of melanocytes produced」をご確認下さい。