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創薬研究に有用です VEGFR1:VEGF165 [Biotinylated] Inhibitor Screening Chemiluminescence Assay Kit

掲載日情報:2025/05/01 現在Webページ番号:72261

VEGFRとVEGF165の結合を阻害する中和抗体や低分子化合物のスクリーニングを簡便かつ高感度に測定するアッセイキットです。化学発光検出システムにより効率的に測定できます。


VEGF165(Vascular Endothelial Growth Factor 165)とは

VEGF-AのアイソフォームであるVEGF165(Vascular Endothelial Growth Factor 165)は、ホモ二量体糖タンパク質のVEGFファミリーに属し、血管新生に不可欠でさまざまな細胞から産生され、分泌されます。血管新生には内皮細胞の増殖、遊走、および血管の形成が関与し、正常な条件下では血管は発生または創傷治癒中の組織に栄養と酸素を供給します。しかし、腫瘍細胞は血管新生促進因子を分泌することによって新しい血管形成を促進することができます。VEGF-Aは、内皮細胞または腫瘍細胞表面上のvascular endothelial growth factor receptor 1(VEGFR1、fms related receptor tyrosine kinase 1、FLT1)およびKDR(kinase insert domain receptor)としても知られるVEGFR2の両方に結合します。VEGFR2はVEGF-Aの主要なシグナル伝達レセプターと考えられていますが、VEGFR1も弱いシグナル伝達をもたらすため、デコイレセプターとして機能します。リガンド結合はVEGFR2レセプターの二量体化を誘導し、そのチロシンキナーゼ活性を活性化します。その結果、MAPK(mitogen activated protein kinase)経路を含む複数の下流シグナル伝達カスケードが活性化されます。



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特長

  • 検出方法:化学発光
  • フォーマット:96 well
  • VEGFRとVEGF165の結合に対する阻害物質のハイスループットスクリーニングに対応しています。
  • 化学発光検出システムにより、高い感度が得られます。


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操作方法概略

Figure 1: Illustration of the mechanism of VEGFR1: VEGF165 [Biotinylated] Inhibitor Screening Chemiluminescence Assay Kit

  1. Fc-Avi-tag標識VEGFR1タンパク質を 96ウェルプレートにコーティングする。
  2. ブロッキング後、プレートを阻害物質または中和抗体とプレインキュベートする。
  3. ビオチン標識VEGF165をプレートに添加し、インキュベーションする。
  4. プレートを洗浄し、ストレプトアビジン-HRPを添加し、次いでELISA ECL基質を添加し、生じた発光をマイクロプレート用ルミノメーターで測定する。
  5. 化学発光シグナルは、VEGFR1のVEGF165への結合に比例する。



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使用例

VEGFRブロッカーによるVEGFR1:VEGF165結合の阻害作用
図. VEGFRブロッカーによるVEGFR1:VEGF165結合の阻害作用

VEGFRブロッカー(#102019)の存在下でVEGFR:VEGF165結合を評価した。ブロッカー非存在下での結合活性を100%とした活性パーセントとして表した。



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キット内容

  • VEGFR1, Fc-Avi-tag
  • VEGF165, His-Avi-tag, biotin-labeled
  • Immuno buffer 1
  • Blocking buffer 2
  • Streptavidin-HRP
  • ELISA ECL substrates A/B
  • White 96-well microplate

測定には、化学発光を検出できるプレートリーダーが別途必要です。



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N末端にHisタグを含む。産生:Sf9 cells,M.W.:67.5 kDa,純度:≧70%,タグ:N-terminal His-tag,由来:Human,形状:Aqueous buffer solution,活性:7 pmol/min/µg
別名:Flt1,FMS-like tyrosine kinase 1,VEGFR1,Vascular endothelial growth factor receptor 1
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reagent@funakoshi.co.jp

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