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熱安定性が高い組換え体FGF2(線維芽細胞成長因子) FGF2-STAB

掲載日情報:2025/03/04 現在Webページ番号:71985

従来型(野生型)FGF2と比較して、半減期を約25倍に向上させた安定化変異体です。
FGF2(basic FGF、bFGF)はヒト多能性幹細胞の多能性を維持するために不可欠ですが、熱に不安定なため、新鮮なFGF2を用いて培地を毎日交換する必要があり、貴重な時間と資源を消費しています。BioBendor社が開発したFGF2-STABを用いることで、より効率的かつ費用対効果が高く、ヒト多能性幹細胞の培養が行えます。

製品外観

製品外観

FGF2(線維芽細胞成長因子)とは

FGF2は非グリコシル化ヘパリン結合増殖因子で、脳、脳下垂体、腎臓、網膜、骨組織、精巣、副腎、肝臓、単球、上皮/内皮細胞で発現します。また、細胞増殖や分化をはじめとするさまざまな細胞プロセスに重要な役割を担っています。さらに、FGF2はヒト多能性幹細胞の多能性を維持するために必須な成分です。



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特長

  • E. coliで産生したヒトFGF2組換え体(リコンビナント)タンパク質です。
  • 従来型(野生型)FGF2は37℃で不安定で、半減期が9時間であるのに対し、本製品は37℃で20日間、完全な生物学的活性を維持します。
  • 熱安定性の向上により毎日の培地交換が不要なため、作業時間を節約することができます。
  • 少量で細胞増殖効果が得られるため、コスト削減にも寄与します。
  • 純度:>95%(SDS-PAGE)
  • エンドトキシンレベル:<1.0 EU/μg

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使用例

図1. SDS-PAGE像

図1. SDS-PAGE像
右レーン:本製品
左レーン:タンパク質マーカー
(116、66、45、35、25、18、14 kDa)

図2. 免疫染色像

図2. 免疫染色像
5継代後、細胞を多能性マーカー抗Oct4抗体および抗Nanog抗体を用いて免疫染色した。従来型(野生型)FGF2(上段)と同等に、本製品(中段)はヒト胚性幹細胞(ESC)の多能性マーカーの発現を維持した。
ネガティブコントロール(下段)は、一次抗体なしでインキュベートした。スケールバー:100 μm


図3. ウエスタンブロット像

図3. ウエスタンブロット像
培地にFGF2(10 ng/ml)を添加し、37℃で6、12、24時間、および2、6、10、16、18、20日間インキュベートした。その後、FGF2飢餓条件下で培養したヒト多能性幹細胞(hPSC)に、プレインキュベーション済みのFGF2を含む培地で2時間培養し、リン酸化ERK1/2に対する抗体を用いてウエスタンブロットを行った。
従来型(野生型)FGF2の生物活性はインキュベーション(加熱)時間とともに低下した(上段)が、本製品は37℃で20日間経過後も完全な生物学的活性を維持した(下段)。

図4. 顕微鏡観察像

図4. 顕微鏡観察像
ヒトES細胞(CCTL14)を、マウス胚性線維芽細胞(MEF)フィーダー層存在下で増殖させた。培養培地に4 ng/mlの本製品を添加したところ、未分化形態を維持した。


図5. NIH/3T3細胞の増殖アッセイ


図5. NIH/3T3細胞の増殖アッセイ
本製品が安定した細胞増殖効果を示し、多能性維持に有用であることを示すため、NIH/3T3細胞を用いた増殖アッセイを行った。
細胞は37℃で48時間培養し、本製品と従来型(野生型)FGF2の生物学的活性を比較した。本製品のED50値は従来型FGF2の約5分の1であり、同一条件下において細胞増殖に所定の効果を得るために必要な量がより少なくてすむことがわかる。これは、本製品が従来型FGF2と比較して安定性が高く、37℃での半減期が長いことからも説明できる。



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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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