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OneStep PLUS qMethyl PCR Kit
定量PCRを用いたメチル化DNA測定キット OneStep PLUS qMethyl PCR Kit
掲載日情報:2024/10/09 現在Webページ番号:71783
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特長
- DNAのバイサルファイト(亜硫酸水素塩)処理は、不要です。
- 標的ゲノム領域の正確なメチル化DNA定量をリアルタイムPCRで行います。
- 単一遺伝子座および多遺伝子座の迅速なDNAメチル化スクリーニングに最適です。
- SYBR GreenおよびTaqManプローブに対応しています。
- 最適なDNA量:20 ng / 5 μl(有効範囲:5 ng~1 μg / 5 μl)
- 用いるDNAの純度:A260 / A280>1.8、A260 / A230>1.8
- 対応機器:CFX-96、CFX Opus 96(Bio-Rad社)、QuantStudio qPCR Systems(Thermo Fisher Scientific社)、LightCycler 480(Roche Diagnostics社) など
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測定原理
同じDNA試料について、Test反応とReference反応を並行して分析します。Test反応は、非メチル化DNAを選択的に分解するメチル化感受性制限酵素(MSRE)を加えるため、次の工程のリアルタイムPCRではメチル化DNAのみが増幅されます。一方、Reference反応は、MSREが含まれていないため、メチル化DNAと非メチル化DNAの両方が増幅されます。メチル化率は、Percent Methylation = 100×2-ΔCt で求めます。ΔCt値は、Test反応からReference反応のCt値を引いた数値になります。
非メチル化CpG部位とメチル化CpG部位を白丸と黒丸で表記している。図Cと図Dは、ヒト非メチル化DNAスタンダードとメチル化DNAスタンダードから得られた増幅曲線の例。図CのTest反応のCt値がReference反応のCt値より高いので、非メチル化DNAフラクションがメチル化感受性制限酵素(MSRE)反応中に分解されたことを示している(画像をクリックすると拡大表示します)。
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FAQ
別の蛍光色素や分子プローブを使用することもできますが、選択した色素にお手持ちのリアルタイムPCR装置が適合しているかを確認して下さい。
あらゆる生物種のゲノムDNAに適応します。A260 / A230比は約1.8、260 / 280比は約1.8をおすすめします。不純物の多いDNAは、DNA Clean & Concentrator-5 Kit(#D4013)を使用してクリーンアップして下さい。
ターゲットが150 bp以上の長さになるように、プライマー設計して下さい。また、試料がcfDNAの場合は、50 ng以上用いて下さい。
ターゲットのプライマーは通常の方法で設計できますが、最適なアニーリング温度を決定するために条件検討を行って下さい。qMethyl Control Primer Ⅰ&Ⅱのアニーリング温度は56~64℃です。58℃が最適なアニーリング温度になります。
MSRE反応(30℃で12時間)は、インキュベーター内でも行えます。2~24時間の範囲で検証をしていますが、12時間が最適です。
使用可能です。ROXをオフにしたプロトコルで検証しています。
二重標識TaqManプローブを用いたマルチプレキシングで検証しています。TaqManプローブを使用することで、同一反応内で複数のターゲットを測定できます。
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キット内容
- 2×Test PreMix
- 2×Reference PreMix
- Fluor dye(SYBR Green Filterと互換性があります)
- qMethyl control primer Ⅰ&Ⅱ
- Human methylated DNA standard
- Human non-methylated DNA standard
- DNase / RNase free water
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価格
[在庫・価格 :2025年04月25日 20時55分現在]
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OneStep PLUS qMethyl PCR Kit |
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[在庫・価格 :2025年04月25日 20時55分現在]
OneStep PLUS qMethyl PCR Kit
文献数: 0
- 商品コード:D5312
- メーカー:ZYR
- 包装:1kit
- 価格:¥100,000
- 在庫:無(未発注)
- 納期:2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等:
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製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
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