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Protein Lipid Overlay (PLO) assayに！ Cayman LipiDOT Strips - PIPs Plus

掲載日情報：2024/09/24 現在Webページ番号：71704

ケイマン ケミカル /
Cayman Chemical Company
[メーカー略称：CAY]

タンパク質と脂質の相互作用を解析するためのニトロセルロースメンブレンベースのスクリーニングツールです。生物物理学的特性評価や構造生物学的手法による解析を可能にし、簡単かつ迅速に解析することができます。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


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タンパク質と脂質の相互作用

タンパク質と脂質の相互作用は、生体膜の構造、機能、ダイナミクス（動態）から、宿主と病原体の相互作用、代謝、輸送、局在化、細胞シグナル伝達まで、さまざまな生物学的プロセスにおいて多様で複雑な役割を担っています1～3。親水性の高いリガンドと同様に、多くのタンパク質は脂質結合部位を持ち、脂質と特異的に相互作用します。さらに脂質はタンパク質の構造、コンフォメーション、アセンブリを変化させ、タンパク質のリクルート、局在化、活性化に影響を与えます1,4,5。タンパク質と脂質の相互作用については、明らかにされているタンパク質が少数なため、今後多くの脂質結合タンパク質が発見される可能性があります1。つまり、タンパク質の機能調節における脂質の役割を理解することは、新たな治療法の追求に役立ちます。

参考文献

  1. Sych, T., et al., "Lipid-Protein Interactions in Plasma Membrane Organization and Function", Annu. Rev. Biophys., 51,135～156(2022). [PMID:34982570]
  2. Corradi, V., et al., "Lipid-Protein Interactions Are Unique Fingerprints for Membrane Proteins", ACS Cent. Sci., 4(6),709～717(2018). [PMID:29974066]
  3. Zhao, H and Lappalainen, P., "A simple guide to biochemical approaches for analyzing protein-lipid interactions", Mol. Biol. Cell, 23(15),2823～2830(2012). [PMID:22848065]
  4. Bogdanov, M., et al., "Lipids in the assembly of membrane proteins and organization of protein supercomplexes: implications for lipid-linked disorders", Subcell. Biochem., 49,197～239(2008). [PMID:18751913]
  5. Dowler, S., et al., "Protein lipid overlay assay", Sci. STKE., 2002(129),pl6(2002). [PMID:11972359]

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特長

  • ホスファチジルイノシトールを含むさまざまなリン脂質（リン脂質、リゾリン脂質、カルジオリピン、コレステロール、スフィンゴ脂質など） 22種類がスポットされており、ポジティブコントロールおよびネガティブコントロールを追加するための二か所のブランクスポット（青色部位）もあります。
  • ウエスタンブロットと酷似しており、操作方法は簡単かつ短時間で行えます。
  • 精製タンパク質または抗体を試料とした解析に適しています。細胞や組織のライセートは推奨していません。
  • Protein Lipid Overlay (PLO) assayに最適です。

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アレイマップ

アレイマップ1

アレイマップ（クリックすると拡大します。）

アレイマップ2

スポット
番号		 リン脂質名
L1 Phosphatidylinositol（PI）
L2 Phosphatidylinositol-3-phosphate（PI(3)P）
L3 Phosphatidylinositol-4-phosphate（PI(4)P）
L4 Phosphatidylinositol-5-phosphate（PI(5)P）
L5 Phosphatidylinositol-3,4-bisphosphate（PI(3,4)P2）
L6 Phosphatidylinositol-3,5-bisphosphate（PI(3,5)P2）
L7 Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate（PI(4,5)P2）
L8 Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate（PI(3,4,5)P3）

スポット
番号		 リン脂質名
M1 Phosphatidic Acid（PA）
M2 Phosphatidylserine（PS）
M3 Phosphatidylethanolamine（PE）
M4 Phosphatidylcholine（PC）
M5 Phosphatidylglycerol（PG）
M6 Lysophosphatidic Acid（LPA）
M7 Lysophosphatidylcholine（LPC）
M8 Lysophosphatidylethanolamine（LPE）

スポット
番号		 リン脂質名
R1 Cardiolipin（CL）
R2 Sphingosine-1-phosphate（S1P）
R3 3-Sulfogalactosylceramide（Sulfatide）
R4 Sphingomyelin（SM）
R5 Cholesterol（Chol）
R6 Diacylglycerol（DAG）
R7 Blue Blank
R8 Blue Blank


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操作方法概略

  1. あらかじめスポットされている脂質以外に解析したい脂質がある場合、スポットする（オプション）
  2. ポジティブコントロールタンパク質ををスポットする（オプション）
  3. 陰性コントロール溶液をスポットする（オプション）
  4. ブロッキング
  5. 目的のタンパク質を加える
  6. 洗浄
  7. 一次抗体反応
  8. 洗浄
  9. 二次抗体反応
  10. 洗浄
  11. 検出
ワークフロー

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別途必要な試薬

商品コードをクリックすると価格表がご覧いただけます。

作製試薬名 調製方法 使用する製品名 商品コード
Control Protein＊1 2 μg/ml in blocking buffer PtdIns-(4,5)-P2 Binding Protein 10009815
Primary Antibody 1:1,500 dilution in blocking buffer Anti-Glutathione S-Transferase, -Poly 10010013
Secondary Antibody 1:4,000 dilution in blocking buffer Anti-IgG, Rabbit, Goat-Poly, HRP 10004301
Wash Buffer PBS-T (1× PBS、pH 7.2、with 0.1% (v/v) Tween 20) ― ―
Blocking Buffer PBS-T + 3% fatty acid-free BSA ― ―

＊1 既知の脂質結合タンパク質をポジティブコントロールとして使用でき、別のストリップもしくは同一ストリップ上のブランクスポットへの直接スポットによりコントロール実験が可能です。Control Proteinは、PtdIns-(4,5)-P2 Binding Protein（#10009815）のほか、PtdIns-(3,4,5)-P3 Binding Protein（#10009817）およびAnnexin V, Human, Recombinant（#20594）もご使用いただけます。Control Proteinの調製方法などの詳細については当社テクニカルサポート（試薬担当）までお問い合わせ下さい。

Control Protein製品ラインナップ

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品名 商品コード
PtdIns-(4,5)-P2 Binding Protein 10009815
PtdIns-(3,4,5)-P3 Binding Protein 10009817
Annexin V, Human, Recombinant 20594

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使用例

GSTタグ融合したPI(4,5)P2タンパク質を用いた結果

GSTタグ融合したPI(4,5)P2タンパク質を用いた結果


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[在庫・価格 ：2025年04月26日 00時00分現在]

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Cayman LipiDOT Strips, PIPs Plus (2strips)
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説明文
試料中のタンパク質と相互作用する1つ以上の脂質を迅速に特定できる。メンブレンに22種類のリン脂質（PI, PI(3)P, PI(4)P, PI(5)P, PI(3,4)P2, PI(3,5)P2, PI(4,5)P2, PI(3,4,5)P3), PA, PS, PE, PC, PG, SM, Sulfatide, CL, Chol, LPA, LPE, LPC, S1P, DAG）がスポットされている。
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Cayman LipiDOT Strips, PIPs Plus (2strips)

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説明文 試料中のタンパク質と相互作用する1つ以上の脂質を迅速に特定できる。メンブレンに22種類のリン脂質（PI, PI(3)P, PI(4)P, PI(5)P, PI(3,4)P2, PI(3,5)P2, PI(4,5)P2, PI(3,4,5)P3), PA, PS, PE, PC, PG, SM, Sulfatide, CL, Chol, LPA, LPE, LPC, S1P, DAG）がスポットされている。
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Control Protein

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PtdIns-(4,5)-P2 Binding Protein (GST-tagged)

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抗GSTタグ抗体

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Anti-GST-tag, Rabbit-Poly <Anti-Glutathione S-Transferase>
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抗原種 免疫動物 Rabbit クラス IgG 標識 Unlabeled
交差性 Gst/Gst Fusion Proteins 適用 IP,Western Blot
クロナリティ Polyclonal フォーマット 性状 Affinity Purified 吸収処理
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Anti-GST-tag, Rabbit-Poly <Anti-Glutathione S-Transferase>

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抗原種 免疫動物 Rabbit
交差性 Gst/Gst Fusion Proteins 適用 IP,Western Blot
標識 Unlabeled 性状 Affinity Purified
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クロナリティ Polyclonal フォーマット
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HRP標識二次抗体

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Anti-IgG, Rabbit, Goat-Poly, HRP
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抗原種 Rabbit 免疫動物 Goat クラス IgG 標識 HRP
交差性 Rabbit 適用 ELISA,Western Blot
クロナリティ フォーマット 性状 Affinity Purified 吸収処理
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Anti-IgG, Rabbit, Goat-Poly, HRP

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抗原種 Rabbit 免疫動物 Goat
交差性 Rabbit 適用 ELISA,Western Blot
標識 HRP 性状 Affinity Purified
吸収処理 クラス IgG
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（テクニカルサポート 試薬担当）

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