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ゲノム編集効率の確認キット T7EI Genome Editing Detection Kit / T7 Endonuclease I

掲載日情報:2025/04/07 現在Webページ番号:71678

T7 Endonuclease I Genome Editing Detection Kitは、T7エンドヌクレアーゼIを用いた、ゲノムDNAの変異導入確認・プロトコルのゲノム編集効率を検出を行うキットです。
CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)、TALEN(Transcription activator-like effector nuclease)、ZFN(Zinc-finger nuclease)などによってゲノム編集された試料は、キットに付属のバッファーによって溶解・保存が可能で、希釈を行うだけでPCRに用いることができます。PCR産物を再アニール後、切断酵素によってミスマッチを切断・電気泳動を行い、切断量を比較することでゲノム編集効率の確認が可能です。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

T7EI Kit外観

T7 endonuclease Iとは

T7エンドヌクレアーゼI(T7EI / T7E1)は、T7ファージ由来の149アミノ酸サブユニットからなるホモ二量体酵素です。T7EIは相同組換えと部位特異的組換えの両方で生成される重要な中間体・4方向ホリデイジャンクション(Holliday junction)の分解に加えて、分岐鎖から塩基不一致ヘテロ二本鎖まで、さまざまなミスマッチDNA構造に対して切断活性を持っています。この特長を利用することでDNAの変異をDNA切断の有無によって検出することが可能です。


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特長

  • 細胞溶解~切断試験までをセットにした製品です。
  • 細胞溶解は5分で完了し、室温で長期保管可能です。
  • ゲノム精製不要で、希釈後に直接PCRに使用できます。
  • 切断試験はわずか15分で完了します。
  • キットにはコントロールのテンプレート・プライマーが含まれています。
  • キットにはコントロール反応を含めて50反応分の酵素が含まれています。

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操作方法概略

ゲノム編集を行った細胞を回収し、細胞溶解保存液を用いて溶解した後、Dilution Bufferで希釈し、PCRの反応を行います。AmpliconをT7 Endonuclease Iで切断し、電気泳動で切断量を測定します。

T7EI Kit操作方法概略

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使用例

コントロールアンプリコンの切断

付属のControl Template & PrimersのAmpliconをT7EIを用いて切断した。

変異/非変異ハイブリッドの切断

未変異DNA断片と変異DNA断片を混合・再アニールし、 T7EIを用いて切断した。

CISPRで変異導入したDNAの切断

AAVS1 locusとHPRT1 locusのそれぞれに対して、CRISPR-Cas9を用いて変異導入を行った。その後、変異導入部位のAmpliconをT7EIを用いて切断した。


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参考文献

  1. Guan, C. and Kumar, S., Nucleic Acids Res., 33 (19), 6225-6234 (2005). [PMID:16264086]
  2. Arvind, L., et al., Nucleic Acids Res., 28 (18), 3417-3432 (2000). [PMID:10982859]
  3. Mashal, R.D., et al., Nature Genetics, 9 (2), 177-183 (1995). [PMID:7719346]

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キット内容

  • Lysis buffer(細胞溶解保存液)
  • 100× Dilution buffer
  • 2× PCR mix
  • 10× T7 endonuclease I
  • 10× Digestion buffer
  • PCR control template & primers

ゲノム編集部位を特異的に増幅可能なPrimerペア、およびNuclease-free waterが別途必要です。必要な機器・器具類については、製品マニュアルをご確認下さい。


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価格

[在庫・価格 :2025年04月25日 19時55分現在]

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T7EI Genome Editing Detection Kit
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説明文
T7エンドヌクレアーゼIを用いたゲノム編集効率の確認キット。CRISPR/Cas9などによってゲノム編集を行った遺伝子について編集効率を確認できる製品で、細胞溶解~切断試験までに必要な試薬のセット。コントロール反応を含めて50反応分の酵素が含まれている。
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4方向ホリデイジャンクションの分解に加えて、分岐鎖から塩基不一致ヘテロ二本鎖まで、さまざまなミスマッチDNA構造に対して切断活性を持っています。10 μlの反応系で50反応分の酵素を含みます。

T7 Endonuclease Iのセット内容

  • 10× T7 endonuclease I
  • 10× Digestion buffer
  • Digestion control

T7 Endonuclease Iの価格

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T7エンドヌクレアーゼIと反応バッファー、切断コントロールのセット(50反応分)。T7エンドヌクレアーゼIは4方向ホリデイジャンクションの分解に加えて、分岐鎖から塩基不一致ヘテロ二本鎖まで、さまざまなミスマッチDNA構造に対して切断活性を持つ。
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説明文 T7エンドヌクレアーゼIと反応バッファー、切断コントロールのセット(50反応分)。T7エンドヌクレアーゼIは4方向ホリデイジャンクションの分解に加えて、分岐鎖から塩基不一致ヘテロ二本鎖まで、さまざまなミスマッチDNA構造に対して切断活性を持つ。
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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