高感度かつ高精度なmiRNAプロファイリング解析を行います ID3EAL miRNAプロファイリング解析受託サービス

MiRXES社独自のID3EAL（アイディール）テクノロジーを用いて、お客様の試料に含まれるmiRNAのプロファイリング解析を高感度かつ高精度に行う受託サービスです。
※ ID3EALテクノロジーを用いたmiRNA定量・解析用試薬製品についてはこちらをご覧下さい。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

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RT-qPCR法によるmiRNAの検出は、逆転写によるcDNAの合成とその後のqPCRによる検出の2段階の反応を経て行われます。これらの反応のうち、逆転写には逆転写用のRTプライマー1種類、qPCR検出にはForwardとReverseの2種類のプライマーが必要となります。これら合計3つのプライマーのうち、既存手法では1つまたは2つのユニバーサルプライマー（すべての標的miRNAに共通のプライマー）が使われています。一方でMiRXES社のID3EALテクノロジーでは、ステムループ構造も特異的な設計を施した、成熟型miRNAのみに特異的なRTプライマーを用いており、qPCR用のプライマー2つも標的miRNA特異的に設計することで、既存手法よりも優れた検出特異性と検出感度を実現しています。

ID3EALテクノロジーはmiRNA定量において重要となる、相同性の高いmiRNA間の識別においても極めて高い精度を実現しています。下図のlet-7 miRNAファミリーを用いた特異性の検討例では、各アイソフォームは1塩基程度の差しかない高い相同性を有するにもかかわらず、明確に識別することができました。

let7ファミリーそれぞれに対応するqPCR用プライマーペアを用いた場合の相対的検出率
let-7ファミリーの各アイソフォームcDNAをテンプレートとし、let7ファミリーそれぞれに対応するプライマーペアを用いてqPCRを行った。相対的検出率はプライマーペアごとに得られたCt値の差から計算している。

ID3EALテクノロジーでは既存製品と比較して、高い増幅効率を実現し微量なmiRNAを検出することが可能です。また、通常は増幅が難しいとされるAT含有率の高いmiRNAでも他社製品に比べて高効率に検出できます。

ID3EALテクノロジーは高い再現性も実現しています。異なる2つの研究室で、1年以上の期間中に30人のがん患者由来の血清中に含まれる200種の標的miRNAを解析した例では、相関係数0.92～0.96という非常に高い再現性が得られました。

独立した２つの実験における測定結果の再現性
X軸は手作業でのRNA単離とBio-Rad CFX-384を用いたqPCRによって得られた測定結果を示しています。Y軸は自動でのRNA単離とLifeTech ViiA7によるqPCRでの測定結果を示しています。グラフ上には測定した200種類の標的miRNAすべてがプロットされています。

複数疾患、がん、血清・血漿・尿試料に関する独自研究により厳選したmiRNAパネルを用いて相対定量を行う受託サービスです。
※ miRNAパネル製品についてはこちらをご覧下さい。