HOME > 試薬 > 細胞培養 > 細胞培養一般試薬 > 3次元細胞培養試薬・器材 > SpheroTribe - The all-in-one kit for easy 3D cell culture

均一なサイズのスフェロイドを形成するポリマー試薬 SpheroTribe - The all-in-one kit for easy 3D cell culture

掲載日情報:2024/04/05 現在Webページ番号:71302

培地の粘性を高め、細胞同士の接触を促進することにより、均一なサイズのスフェロイドを形成します。多くの細胞種での実績もあり、試料間のばらつきを最小限に抑え、遊走/浸潤アッセイ、免疫染色、薬物スクリーニング、またはin vivo移植実験などのダウンストリームアッセイの一貫性を向上させるのに役立ちます。


SpheroTribeのボトル


SpheroTribeの利点

SpheroTribeのアドバンテージ1

細胞凝集促進作用

培地の粘性を高めることで細胞間の接触を促進するゲル状の足場を作ります。固形腫瘍を模倣した高密度なスフェロイド形成、難しい細胞のスフェロイド形成の改善、幹細胞由来のオルガノイド形成の迅速化が期待されます。

SpheroTribeのアドバンテージ2

均一性の向上

細胞凝集を最大化することでユニークでばらつきのない均一なサイズのスフェロイド形成を促進し、増殖、がん転移、免疫系細胞の浸潤、in vivo導入などの一貫性の高いアッセイを可能にします。

SpheroTribeのアドバンテージ3

扱いやすさ

氷上での作業や専用の機器が不要で、スフェロイドを簡単に作製できます。


SpheroTribeのアドバンテージ4

高い汎用性

生物学的に不活性な合成高分子を、タンパク質、脂質、成長因子を含まない基礎培地に溶解したものです。ご自身の培地で希釈し、必要に応じて添加物を追加することもできます。


目次に戻る

特長

  • 生物学的に不活性な化合物であるメチルセルロースと基礎培地で構成されており、タンパク質、脂質、成長因子を含みません。
  • 細胞培養用培地の粘性を高め、細胞間の接触を促進するゲル状の足場を作ることでスフェロイド形成を促進します。
  • 必要に応じて血清、抗生物質、分化因子などを添加できます。
  • 試薬のほか、スフェロイド形成に適した96ウェル丸底プレート、回収に適した口径の大きなピペットチップが付属しています。

目次に戻る

使用方法

細胞懸濁液に37℃に温めたSpheroTribe を加え、丸底96 ウェルプレートで細胞凝集を形成させます。

使用方法の画像


プロトコール動画

SpheroTribe video protocol on Vimeo



目次に戻る

使用実績のある細胞

  • GB P3、BL13、T033、T042(患者由来幹細胞様グリオブラストーマ細胞)
  • HMV-Ⅱ(ヒト悪性黒色腫 (Ⅱ))
  • ヒト原発性結腸直腸がん細胞
  • ヒトiPS細胞、iPS細胞由来オルガノイド
  • ヒト初代大腸がん細胞
  • ラット胚(E18)初代神経細胞
  • HeLa細胞
  • U87、T98G(ヒト神経膠芽腫細胞株)
  • MDA-MB 231(ヒト乳がん細胞株)
  • ヒト結腸がん細胞株
  • COS-7(サル腎臓線維芽細胞様細胞株)
  • B16F10(マウス黒色腫細胞株)


目次に戻る

キット内容

品名 SpheroTribe
(2.5 mL Kit)
SpheroTribe
(25 mL Kit)
商品コード TDA-SPK-MINIKIT TDA-SPK-KIT
SpheroTribe溶液 2.5 ml 25 ml
U底96穴プレート 1枚 10枚
広口径ピペットチップ
(200 μl)
20本 96本×2ラック

SpheroTribeのキット構成品

画像をクリックすると拡大します拡大図


目次に戻る

使用例

図. 1 患者由来グリオブラストーマスフェロイドの、Ⅰ型コラーゲンのマトリックスへの浸潤 グリオブラストーマスフェロイドの画像

画像をクリックすると拡大します

SpheroTribe溶液を用いて4日間培養したグリオブラストーマスフェロイドを、コラーゲンマトリックス中に包埋した。
包埋直後(T=0)と24時間後(T=24)に撮影した。
画像提供:Dr. Thomas Daubon, Research Director CNRS, France.



図. 2 免疫チェックポイント阻害後のB16F10スフェロイドへの免疫浸潤 B16Fスフェロイドの画像

画像をクリックすると拡大します

A. B16F10細胞1×104個をSpheroTribeを用いて6日間培養し、スフェロイド作製した(3日目、6日目の画像)。
B. マウス脾臓由来PBMC1×105個を、IL-15(40 ng/ml)で活性化し、抗PD1抗体(10 μg/ml)と1時間インキュベートした後、B16F10スフェロイドの培地に添加し3日間培養した。
グラフは、処理に応じて回収したスフェロイドのリンパ球浸潤差異をフローサイトメトリーで定量したグラフ(N=4)、P < 0.05 by the Mann? Whitney?test)。
画像提供:Dr. Guillaume Mestrallet, Tisch Cancer Institute, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, New York, US.
Lugand, L., et al., "Methods for Establishing a Renal Cell Carcinoma Tumor Spheroid Model With Immune Infiltration for Immunotherapeutic Studies.", Front. Oncol., 12, 898732 (2022). [PMID: 35965544]



目次に戻る

使用文献

  • Guyon, J., et al., "A 3D Spheroid Model for Glioblastoma.", J. Vis. Exp., 158 (2020). [PMID: 32338647]
  • Guyon, J., et al., "Lactate dehydrogenases promote glioblastoma growth and invasion via a metabolic symbiosis.", EMBO Mol. Med., 14(12), e15343 (2022). [PMID: 36278433]
  • Guyon, J., and Daubon, T., "Histological analysis of invasive glioblastoma organoids embedded in a 3D collagen matrix.", STAR Protoc., 4(3), 102521 (2023). [PMID: 37597188]


目次に戻る

SpheroTribeのFAQ

Q-1. SpheroTribeの作用メカニズムを教えて下さい。
A-1. SpheroTribeは、スフェロイドへの効率的な細胞凝集を促進することがよく知られている分子クラウディング(molecular crowding)剤であるメチルセルロースの機能を利用しています。 メチルセルロースは培地で希釈されると培地の粘度を高め、細胞の動きを制限するゲル状の環境を作り出し、高密度なスフェロイドの形成のための細胞間の接触を促します。



Q-2. SpheroTribeは、細胞生理やその後のアッセイに影響しますか?
A-2. SpheroTribe溶液は、メチルセルロースで構成されています。メチルセルロースはセルロースの誘導体で、生物学的に不活性であることが知られています。メチルセルロースは、バイオインクを含むさまざまなバイオファブリケーションツールにも使用されています。加えて、SpheroTribeでは、外来ECM成分なしで細胞を培養することができるため、細胞情報伝達に及ぼす可能性のある既知のバイアスを回避することができます。必要に応じて、SpheroTribeはプロトコルのどの段階でも容易に洗浄除去でき、その後のアッセイに使用できるスフェロイドを残すことができます。



Q-3. SpheroTribeは、どのような細胞で使用されていますか?
A-3. SpheroTribeは、各種の細胞でスフェロイド/オルガノイドの作製に成功しています。本記事内の「使用実績のある細胞」をご参照下さい。
このリストを、皆様の研究成果で補足していただけませんか?貴重なご意見をお寄せ下さい!



Q-4. SpheroTribeを使用するために必要な、専用の培地はありますか?
A-4. SpheroTribe濃縮溶液は、基礎培地で構成されており、タンパク質、脂質、成長因子は含まれていません。任意の培地で希釈し、必要に応じて他の物質(血清、抗生物質など)を加えることができます。



Q-5. 25 mL Kit(#TDA-SPK-KIT)で何回の実験ができますか?
A-5. 本キットで、最大960個のスフェロイドを作製することができます。細胞凝集に使用するSpheroTribe溶液の濃度、スフェロイドの総増殖期間、培地の更新頻度により、1キットで作製できるスフェロイドの総数は異なる場合があります。



Q-6. メチルセルロース溶液だけを購入することはできますか?
A-6. はい。メチルセルロース溶液単品はMethylcellulose Solution for SpheroTribe(#TDA-SPK-2-25)としてお買い求め下さい。



Q-7. SpheroTribeを用いてスフェロイドを作製するにはどのくらいの時間がかかりますか?
A-7. 三次元細胞培養を開始するまでの時間は、合わせて30分以内です。その後、目的のスフェロイドサイズを得るための最適な培養時間は、細胞増殖率や対象とする用途によって異なります。一般的には、3日間の培養後に高密度で均一なスフェロイドが形成されます。



Q-8. 各ウェルに何個の細胞を播種すればよいですか?
A-8. 最適な播種密度は、細胞の種類、増殖速度、対象となる用途によって大きく異なります。どの密度で培養するのが最も適しているか、検討する必要があります。原則として、初代細胞には1ウェル当たり1×104~2×104細胞、腫瘍性/不死化細胞株には1ウェル当たり2×103~7×103細胞の使用を使用することをお勧めします。



Q-9. スフェロイドはどのくらいの大きさになりますか?
A-9. スフェロイドの大きさは、細胞型の特性、初期密度、使用する培養条件によって大きく異なります。最適な条件を選択するために、異なる細胞型と播種密度で到達したサイズの例をいくつか挙げておきます:

SpheroTribeFAQテーブル



Q-10. ダウンストリームに関して、推奨するアッセイはありますか?
A-10. SpheroTribeで作製したスフェロイドを用いて、さまざまなダウンストリームアッセイが実施されています。SpheroTribeはスフェロイド形成用に作られていますので、スフェロイド形成に関するプロトコルのみを提供しています。しかし、必要であればSpheroTribeで作製した神経膠芽腫スフェロイドを用いたさまざまなアッセイのプロトコールが記載されている以下の文献をご参照下さい。これらは他の細胞種にも簡単に応用できます。

  • Guyon, J., et al., "A 3D Spheroid Model for Glioblastoma.", J. Vis. Exp., 158 (2020). [PMID: 32338647]
  • Guyon, J., et al., "Lactate dehydrogenases promote glioblastoma growth and invasion via a metabolic symbiosis.", EMBO Mol. Med., 14(12), e15343 (2022). [PMID: 36278433]



Q-11. 作製したスフェロイドがユニークかつ均一であることを確認するにはどうすればよいですか?
A-11. SpheroTribeキットは、多くの細胞種で試験を行い、ユニークで均一なスフェロイドを形成することが示されています。ただし、特にスフェロイド作製が難しい細胞の場合には、各ウェルで単一均一なスフェロイドを得るチャンスを最大限に高めるために留意すべきいくつかのヒントを以下に示します。

  • ①凝集していない単一の細胞懸濁液から始めること:播種時の細胞懸濁液に凝集塊が存在すると、ユニークで均一なスフェロイドの取得が困難になる可能性があります。単離された初代細胞から始める場合は、必要に応じてフィルターまたはカラムを使用して慎重に細胞を分離することをお勧めします。
  • ②使用前にSpheroTribe溶液を37°Cで予め温めること:温度が低いほど粘度が高くなり、複数の細胞凝集塊の形成が促進される可能性があります。
  • 上記のアドバイスで上手く行かない場合は、プレートを300gで3分間遠心操作を行うと、スフェロイドの形成が促進されます。







目次に戻る

価格

[在庫・価格 :2025年02月08日 00時00分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
SpheroTribe, The all-in-one kit for easy 3D Cell Culture(1x96 well)
3~4週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • メーカーサイト
  • お問い合わせ
説明文
法規制等
保存条件 4℃,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2024年9月1日号 p.21

製品記事
関連記事
SpheroTribe, The all-in-one kit for easy 3D Cell Culture(10x96 well)
3~4週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • メーカーサイト
  • お問い合わせ
説明文
法規制等
保存条件 4℃,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2024年9月1日号 p.21

製品記事
関連記事

[在庫・価格 :2025年02月08日 00時00分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。

SpheroTribe, The all-in-one kit for easy 3D Cell Culture(1x96 well)

文献数: 0

説明文
法規制等
保存条件 4℃,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2024年9月1日号 p.21

製品記事
関連記事

SpheroTribe, The all-in-one kit for easy 3D Cell Culture(10x96 well)

文献数: 0

説明文
法規制等
保存条件 4℃,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2024年9月1日号 p.21

製品記事
関連記事



目次に戻る

関連製品

[在庫・価格 :2025年02月08日 00時00分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
Methylcellulose Solution for SpheroTribe
3~4週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • メーカーサイト
  • お問い合わせ
説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事

[在庫・価格 :2025年02月08日 00時00分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。

Methylcellulose Solution for SpheroTribe

文献数: 0

説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事



目次に戻る

お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。