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新型コロナウイルスのRdRp活性を低バックグラウンドで測定できます RdRp (SARS-CoV-2) TR-FRET Assay Kit

掲載日情報:2024/07/17 現在Webページ番号:71258

RdRp(RNA-dependent RNA Polymerase)は、新型コロナウイルス(SARS-CoV-2)のライフサイクルにおいて重要な酵素であり、COVID-19の治療薬として最も有望なターゲットの一つです。SARS-CoV-2では、NSP12、NSP7、NSP8タンパク質の複合体がRdRpとして機能します。本製品は、RdRpによってビオチン標識ATPが二本鎖RNA基質に直接取り込まれる段階をTR-FRETで測定するホモジーニアスキットです。TR-FRETシグナルの増加は、RNAに取り込まれたATPの量に比例するため、本製品を用いてHTS酵素阻害スクリーニングやプロファイリングが行えます。

BPS Bioscience社のSARS-CoV-2 Spike:ACE2 Inhibitor Screening Assay Kitシリーズについてはこちらを3CL Protease (SARS-CoV-2) Assay Kitについてはこちらをご覧下さい。

使用例

SARS-CoV-2のRdRpとして組換え体タンパク質(#101466)を用い、その酵素活性を本製品で測定した。

RdRp活性のグラフ1
図1. RdRp添加量とTR-FRET値の変化
組換え体RdRpの添加量とTR-FRET値(RdRp酵素活性)の変化を見た。

RdRp活性のグラフ2
図2. RdRp活性の阻害物質による阻害度の測定
RdRpの阻害物質である6-Chloropurine-ribose triphosphateの添加量と酵素活性の低下を見た。

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TR-FRETの測定原理とRdRpアッセイへの応用

RdRp (SARS-CoV-2) TR-FRET Assay Kitは、新型コロナウイルスのライフサイクルにおいて重要な働きをする酵素であるRdRpの酵素活性を測定するキットです。RdRp()によりビオチン標識ATP(―●)がジゴキシゲニン(DIG)標識二本鎖RNA基質へ取り込まれるステップを、TR-FRET(Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer、時間分解蛍光共鳴エネルギー移動)により測定するように設計されています。TR-FRETシグナルの増加量は、RNAに取り込まれたATPの量に比例するため、アクセプターで標識されたストレプトアビジンとドナーのユーロピウム(Eu)標識抗体を添加して、蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)現象により酵素活性を直接測定することができます。


RdRp活性測定のスキーム


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特長

  • アッセイフォーマット:384 well
  • インキュベーション時間:60分(37℃)+ 10~30分(室温)
  • 測定原理:TR-FRET
  • 検出方法:蛍光
  • 測定波長:励起 317 ± 20 nm/蛍光 620 ± 10 nm、665 ± 10 nm
  • 適用:SARS-CoV-2のRdRpRNA依存RNAポリメラーゼ活性の測定、および阻害物質のHTSスクリーニング

データの計算方法

データの計算は、TR-FRET比(665 nmでの値/620 nmでの値)を用いて行います。
活性率を算出する場合、ネガティブコントロール(BlankまたはSubstrate Control)から得られたFRET値を0%活性とし、ポジティブコントロールからのFRET値を100%活性と設定することが可能です。

% Activity = FRETS - FRETNeg FRETP - FRETNeg x 100%

FRETS:試料のFRET、FRETNeg:ネガティブコントロールのFRET、FRETP:ポジティブコントロールのFRET


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キット内容

品名をクリックすると、別売品(単品)の価格表をご覧いただけます。

  • NSP12/NSP7/NSP8 (SARS-CoV-2) Complex*1
  • Digoxigenin-labeled RNA Duplex
  • Biotinylated ATP
  • RNAse inhibitor
  • RdRp assay buffer component 1
  • RdRp assay buffer component 2
  • DTT (0.5 M)
  • Eu-labeled anti-digoxigenin antibody
  • Dye-labeled acceptor
  • RdRp TR-FRET detection buffer*2
  • 384-well plate with plate sealer
*1 酵素活性はロットにより異なります。活性はチューブに記されています。
*2 有害な物質が含まれています。適切な予防策を講じて下さい。
測定には、TR-FRETを測定できる蛍光マイクロプレートリーダーが別途必要です。


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価格

[在庫・価格 :2025年02月08日 13時15分現在]

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詳細 商品名
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RdRp (SARS-CoV-2) TR-FRET Assay Kit (384reactions)
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検出方法:TR-FRET
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RdRp (SARS-CoV-2) TR-FRET Assay Kit (384reactions)

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NSP8_NSP7/NSP12 (SARS-CoV-2) Complex Recombinant
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M.W.:NSP12: 108 kDa; NSP8: 23 kDa; NSP7: 10 kDa,純度:≥90%,由来:SARS-CoV-2,タグ:NSP8_NSP7: N-terminal His-tag,形状:Aqueous buffer solution 
別名:RdRP,RDR,RNA replicase,SARS-coronavirus RNA polymerase,nsp12,nonstructural protein 8,SARS-CoV-2 NSP8,ncov NSP8,NSP 8,NSP-8,nonstructural protein 7,SARS-CoV-2 NSP7,ncov NSP7,NSP 7,NSP-7
Gene Accession No: NSP7:YP_009742614;NSP8:YP009725304.1;NSP12:YP_009725307
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2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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説明文:新型コロナウイルス(COVID-19)の研究に有用な、組換えSARS-CoV-2RNAポリメラーゼ/ NSP12です。アミノ酸全長とN末端にFLAGタグが含まれています。説明文:新型コロナウイルス(COVID-19)の研究に有用な、組換えSARS-CoV-2RNAポリメラーゼ/ NSP12です。アミノ酸全長とN末端にFLAGタグが含まれています。,M.W.:108 kDa,由来:SARS-CoV-2,タグ:N-terminal FLAG-tag,形状:Aqueous buffer solution
別名:RdRP,RDR,RNA replicase,SARS-coronavirus RNA polymerase,nsp12
Gene Accession No: YP_00972530
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M.W.:10 kDa,由来:SARS-CoV-2,タグ:C-terminal His-tag
別名:covid,covid-19,covid19,coronavirus,nonstructural protein 7,SARS-CoV-2 NSP7,ncov NSP7,NSP 7,NSP-7,100829-1,100829-2
Gene Accession No: YP_009742614
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M.W.:10 kDa,由来:SARS-CoV-2,タグ:C-terminal His-tag
別名:covid,covid-19,covid19,coronavirus,nonstructural protein 7,SARS-CoV-2 NSP7,ncov NSP7,NSP 7,NSP-7,100829-1,100829-2
Gene Accession No: YP_009742614
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M.W.:23 kDa,由来:SARS-CoV-2,タグ:C-terminal His-tag
別名:covid,covid-19,covid19,coronavirus,nonstructural protein 8,SARS-CoV-2 NSP8,ncov NSP8,NSP 8,NSP-8,100830-1,100830-2
Gene Accession No: YP009725304.1
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M.W.:23 kDa,由来:SARS-CoV-2,タグ:C-terminal His-tag
別名:covid,covid-19,covid19,coronavirus,nonstructural protein 8,SARS-CoV-2 NSP8,ncov NSP8,NSP 8,NSP-8,100830-1,100830-2
Gene Accession No: YP009725304.1
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NSP10/NSP16 Complex (SARS-CoV-2)
2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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M.W.:NSP10: 16 kDa; NSP16: 34 kDa,由来:SARS-CoV-2,タグ:NSP10: N-terminal FLAG-tag
NSP16: N-terminal His-tag,形状:Aqueous buffer solution
別名:covid,covid-19,covid19,coronavirus,nonstructural protein 10,nonstructural protein 16
Gene Accession No: NSP10:YP_009725306.1 NSP16:YP_009725311
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[在庫・価格 :2025年02月08日 13時15分現在]

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NSP8_NSP7/NSP12 (SARS-CoV-2) Complex Recombinant

文献数: 0

説明文 M.W.:NSP12: 108 kDa; NSP8: 23 kDa; NSP7: 10 kDa,純度:≥90%,由来:SARS-CoV-2,タグ:NSP8_NSP7: N-terminal His-tag,形状:Aqueous buffer solution 
別名:RdRP,RDR,RNA replicase,SARS-coronavirus RNA polymerase,nsp12,nonstructural protein 8,SARS-CoV-2 NSP8,ncov NSP8,NSP 8,NSP-8,nonstructural protein 7,SARS-CoV-2 NSP7,ncov NSP7,NSP 7,NSP-7
Gene Accession No: NSP7:YP_009742614;NSP8:YP009725304.1;NSP12:YP_009725307
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説明文 説明文:新型コロナウイルス(COVID-19)の研究に有用な、組換えSARS-CoV-2RNAポリメラーゼ/ NSP12です。アミノ酸全長とN末端にFLAGタグが含まれています。説明文:新型コロナウイルス(COVID-19)の研究に有用な、組換えSARS-CoV-2RNAポリメラーゼ/ NSP12です。アミノ酸全長とN末端にFLAGタグが含まれています。,M.W.:108 kDa,由来:SARS-CoV-2,タグ:N-terminal FLAG-tag,形状:Aqueous buffer solution
別名:RdRP,RDR,RNA replicase,SARS-coronavirus RNA polymerase,nsp12
Gene Accession No: YP_00972530
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NSP7, His-tag (SARS-CoV-2)

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説明文 M.W.:10 kDa,由来:SARS-CoV-2,タグ:C-terminal His-tag
別名:covid,covid-19,covid19,coronavirus,nonstructural protein 7,SARS-CoV-2 NSP7,ncov NSP7,NSP 7,NSP-7,100829-1,100829-2
Gene Accession No: YP_009742614
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NSP7, His-tag (SARS-CoV-2)

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別名:covid,covid-19,covid19,coronavirus,nonstructural protein 7,SARS-CoV-2 NSP7,ncov NSP7,NSP 7,NSP-7,100829-1,100829-2
Gene Accession No: YP_009742614
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NSP8, His-tag (SARS-CoV-2)

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説明文 M.W.:23 kDa,由来:SARS-CoV-2,タグ:C-terminal His-tag
別名:covid,covid-19,covid19,coronavirus,nonstructural protein 8,SARS-CoV-2 NSP8,ncov NSP8,NSP 8,NSP-8,100830-1,100830-2
Gene Accession No: YP009725304.1
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別名:covid,covid-19,covid19,coronavirus,nonstructural protein 10,nonstructural protein 16
Gene Accession No: NSP10:YP_009725306.1 NSP16:YP_009725311
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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