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タンパク質標識に最適な、ISO準拠で製造されたトランスグルタミナーゼです Andracon Transglutaminase

掲載日情報:2023/05/23 現在Webページ番号:71252

Zedira社のAndraconトランスグルタミナーゼ(Transglutaminase)は、放線菌Streptomyces mobaraensis由来トランスグルタミナーゼ遺伝子を、E. coliで発現させた組換え体酵素で、ISO 9001(品質マネジメントシステム規格)で認定された環境で生産されています。本酵素が有する架橋化反応を利用して、さまざまなタンパク質修飾が行えます。


トランスグルタミナーゼとその利用

トランスグルタミナーゼ(Transglutaminase)は、ペプチド結合グルタミン残基のγ-カルボキシアミド基と、さまざまなアミンまたは第一級アミンとの間のアシル転移反応を触媒します。ビオチン、蛍光色素、クリックケミストリー試薬、細胞毒素などの第一級アミン結合機能マーカーを、抗体などのタンパク質に結合することができます。

トランスグルタミナーゼによるタンパク質の修飾

トランスグルタミナーゼ触媒によるタンパク質標識の原理
上段の例では、トランスグルタミナーゼは、グルタミンを含むタンパク質()と、第一級アミンを有する標識試薬()とを結び付け標識します。
下段の例では、トランスグルタミナーゼは、リジンを含むタンパク質()と、末端にグルタミンを有する標識試薬()とを結び付け標識します。

トランスグルタミナーゼによるタンパク質の標識には、標的タンパク質の表面に「アクセス可能なリジン残基、あるいはグルタミン残基」が必要ですが、これらの条件を満たすタンパク質はそう多くありません。このため、必要な場合はトランスグルタミナーゼ基質配列タグを、遺伝子組換えで導入します。


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Zedira社Andraconトランスグルタミナーゼの各種スペック

評価項目 規格 検定方法
タンパク質濃度 (製品同梱のレポート結果を参照) A280 (ɛ=55,408 L・mol-1・cm-1)
活性 (製品同梱のレポート結果を参照) Microbial Transglutaminase Assay Kit(Zedira社)
比活性 >30 U/mg
純度(HPLC) >98% Anion exchange-HPLC
SDS-PAGE 38 kDaのバンド 12.5% SDS-PAGE, Coomassie stain
エンドトキシン量 <0.004 EU/U 欧州薬局方2.6.14(細菌エンドトキシン)
宿主細胞由来タンパク質量 <0.15 ng/U E. coli HCP ELISA Kit(Cygnus Technologies社)
宿主細胞由来DNA量 <0.12 ng/U Quant-iT Pico Green dsDNA(Thermo Fisher Scientific社)
無菌性 微生物の生育は見られず Steritest(Merck社)
タンパク質量 (製品同梱のレポート結果を参照) HPLC-ESI-MS

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特長

  • ISO9001:2015認定環境で、標準作業手順書に従いE. coliで生産された組換え体酵素です。
  • 高純度かつ高比活性です。
  • バッチ間で一貫した品質が確保されています。
  • 本製品の使用にライセンスは必要ありません。
  • 製品は50 mM HEPES(pH 7.4)溶液で、溶液形態の製品(#T250)と凍結乾燥形態の製品(#T300)があります。
  • TSE(伝達性海綿状脳症)およびBSE(牛海綿状脳症)フリーです

本製品の製造工程で動物由来の唯一の材料は、発酵工程で使用されるラクトースです。使用されるラクトースは、TSEおよびBSEフリーであることが供給会社によって認定されています。ラクトースは、それ以降の生産または精製ステップでは使用されません。また、本製品の生産と精製に動物由来の他の材料は使用されておらず、製品にも添加されていません。

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Andraconトランスグルタミナーゼの使用例(抗体の標識)

トランスグルタミナーゼの使用例

タンパク質の標識・修飾

脱グリコシル化した抗体を標識し、ADCを作製する場合のMTG(微生物由来トランスグルタミナーゼ)反応様式の例:
トランスグルタミナーゼの活性部位にあるシステイン側鎖のSH基が、抗体の重鎖の295番目のグルタミン(Q295)と反応しチオエステルの中間体を生じる。次に、第一級アミンを有する薬物()と結合し、部位特異的に結合した薬物分子を含むADC(薬物抗体複合体)が生成される。ここでは、1つのQ295のみの結合が示されている。


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参考文献

  • Kaempffe, A., et al., J. Pharm. Sci., 110(12), 3776~3785 (2021). [PMID: 34363839]
  • Früh, S.M., et al., ACS Nano, 15(7), 12161~12170 (2021). [PMID: 34184536]
  • Stricker, S., et al., J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr., 68(3), e43~e50 (2019). [PMID: 30320664]
  • Spycher, P.R., et al., Chembiochem., 18(19), 1923~1927 (2017). [PMID: 28771896]
  • Steffen, W., et al., J. Biol. Chem., 292(38), 15622~15635 (2017). [PMID: 28751378]
  • Dennler, P., et al., Chembiochem., 16(5), 861~867 (2015). [PMID: 25688874]
  • Dennler, P., et al., Bioconjug. Chem., 25(3), 569~578 (2014). [PMID: 24483299]
  • Kaufmann, A., et al., Food Addit. Contam. Part A Chem. Anal. Control Expo. Risk Assess, 29(9), 1364~1373 (2012). [PMID: 22747363]
  • Jeger, S., et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 49(51), 9995~9997 (2010). [PMID: 21110357]
  • Gianfrani, C., et al., Gastroenterology, 133(3), 780~789 (2007). [PMID: 17678925]
  • Pfleiderer, C., et al., Microbiol. Res., 160(3), 265~271 (2005). [PMID: 16035238]
  • Ando, H., et al., Agric. Biol. Chem. 1989, 53(10), 2613~2617 (1989). DOI: 10.1080/00021369.1989.10869735.
  • Pasternack, R., et al., Eur. J. Biochem., 257(3), 570~576 (1998). [PMID: 9839945]

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溶液形態のAndracon微生物由来トランスグルタミナーゼ(凍結)

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凍結乾燥形態のAndracon微生物由来トランスグルタミナーゼ

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(テクニカルサポート 試薬担当)

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