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大量試料からエクソソームの高純度精製に対応します! HAS法によるエクソソーム精製・品質評価受託サービス(Egret・Lab社)

掲載日情報:2024/09/27 現在Webページ番号:70914

特殊ハイドロゲルを用いた新規エクソソーム精製法(HAS法)によるエクソソーム精製サービスです。既存手法では難しかった高純度かつ大量のエクソソーム精製にもリーズナブルな価格で対応いたします。また、エクソソームの品質評価サービスも提供しています。

Exosome(エキソソーム、エクソソーム)特集バナー

新規エクソソーム精製法(HAS法)について

既存手法の問題点

エクソソームは細胞間や組織間のシグナル伝達に関与することが明らかになっており、基礎研究の対象として注目を集めています。加えて、創薬や化粧品・食品分野での利用といった産業応用を目指した研究も盛んに行われています。しかし、産業化に適したエクソソームの精製についてはゴールデンスタンダードと言える手法は、未だに確立されていません。現在利用されている精製方法には主に4つの手法が存在しますが(表1)、これらの手法は精製純度、回収量、作業効率に一長一短があります。特に、大量の試料からエクソソームを高効率かつ高純度に精製できる手法は、産業利用に不可欠であるにもかかわらず、これまで存在しませんでした。

表1. 各種エクソソーム精製法の比較

HAS法(新手法) 超遠心法 沈殿法 Filter法 Affinity法
精製度
回収量
大量精製
コスト

HAS法の原理

HAS法の原理 HAS法の原理① HAS法の原理② HAS法の原理③
①ハイドロゲルが膨張 ②ハイドロゲル表面にトラップ ③表面から遊離させ回収


図1. HAS法によるエクソソーム精製の原理

HAS法は、新規に開発された特殊ハイドロゲルを用いたエクソソームの精製法です。特殊ハイドロゲルは、表面電位と親和性の制御によってエクソソームを効率よく吸着させると同時に、本来の高吸水性によってエクソソーム以外の夾雑物を水分と共にハイドロゲル内部に取り込む特性を持ちます(図1)。ハイドロゲル表面に堆積したエクソソームは、専用のバッファーによる洗浄・抽出によって容易に回収することができます。また、ハイドロゲル内部に吸収された夾雑物は抽出されないため、高い精製度のエクソソームが大量に得られます。HAS法は、尿、培養上清、血清といった試料からの精製に対応し、既存手法と比較して短い作業時間で圧倒的に高い回収効率を実現しています。加えて、超遠心機などの高価な機材が不要であり、簡便かつ高い純度でのエクソソーム精製を可能にした優れた技術です。


具体的な精製手順


HAS法のワークフロー(10 ml未満の試料を用いる場合)

●10 ml未満の場合
2 mlろ過カラムにハイドロゲル
および対象溶液を添加
ハイドロゲル洗浄後、塩溶液添加
HAS法のワークフロー(10 ml未満の試料を用いる場合) HAS法のワークフロー(10 ml未満の試料を用いる場合) HAS法のワークフロー(10 ml未満の試料を用いる場合)
溶液除去 ハイドロゲルを洗浄 精製液回収


図2. HAS法のワークフロー(10 ml未満の試料を用いる場合)



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特長

  • 高純度のエクソソームを効率よく回収できます。
  • 大量試料からの精製に対応いたします。
  • インタクトなエクソソームが得られます。
  • リーズナブルな価格で受託いたします。

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サービスの内容

HAS法によるエクソソーム精製・濃縮

お手持ちの試料からエクソソームを精製するサービスです。既存手法では難しかった高純度かつ大量のエクソソーム精製にもリーズナブルな価格で対応します。培養上清、植物、菌培養液などさまざまな試料からの精製に対応します。なお、感染性のある試料からの精製は承っておりません。

最小受託試料数 試料量 価格(1試料当たり) 納期
1試料 1~10 ml 60,000円 2週間程度*5
11~100 ml 150,000円
101~300 ml 250,000円
301~500 ml 350,000円
501~700 ml 500,000円
701~1,000 ml 700,000円

エクソソーム品質評価

細胞培養液や精製済みエクソソームについて、NanoSightによる粒子解析や、CD9、CD63などの表面マーカーをELISAで測定いたします。エクソソームを取り込んだ細胞における遺伝子発現変動を、qPCR解析により評価可能です。エクソソームによる細胞機能への影響を、各種マーカー遺伝子の発現解析を通じて検証いたします。詳細は、当社受託・特注品担当(下記参照)までお問い合せ下さい。上記サービスで精製したエクソソーム以外に、お客様ご自身で精製したエクソソームの品質評価もお受けいたします。発酵溶液や乳酸菌培養液などへの対応も可能です。

測定項目 測定手法・機器 最小受託試料数 試料量 価格(1試料当たり) 納期
粒子数計測 NanoSight*1、2
(ナノ粒子解析システム)
1試料 1 ml~*3 1~4試料:20,000円 2週間程度*5
粒度分布計測 5試料~:18,000円
マーカータンパク質検出 ELISA(CD9, CD63)*4 1試料 数百 μl
(精製液量)
1~4試料:20,000円
5試料~:17,000円

*1 NanoSight測定を精製サービスと合わせてご依頼いただく場合は、記載の価格より安価にご提供可能です。詳細はお問い合わせ下さい。
*2 CSVデータの提供は1試料あたり10,000円にて承ります。
*3 NanoSight測定でエクソソーム精製試料は200 µl程度を必要とします。少量の場合はご相談下さい。
*4 サンドイッチ法での測定です。各々の因子どちらの測定でも対応可能です。
*5 機械の故障などが発生した場合や、ご依頼の試料数、試験の混み具合によっては納期が遅れる場合があります。あらかじめご了承下さい。

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実施例

MSC(脂肪由来間葉系幹細胞)培養液からの精製実施例

MSC培養液から各種エクソソーム精製手法によって精製を行い、エクソソーム精製量と精製度の比較を行った。HAS法では他の手法よりも大量に精製できている(図3)。また、品質の面でも夾雑タンパク質が少なく(図4)、均一な粒度のエクソソームが精製できていることが分かる(図5)。

図3.各手法でのエクソソーム回収量の比較

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図3.各手法でのエクソソーム回収量の比較

図4.各手法のエクソソーム精製度(総タンパク質量あたりのエクソソーム量)

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図4.各手法のエクソソーム精製度
(総タンパク質量あたりのエクソソーム量)

図5.HAS法で精製したエクソソームの粒度分布(NanoSight測定)

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図5.HAS法で精製したエクソソームの粒度分布
(NanoSight測定)


エクソソームの含有および品質評価実施例

試料中にエクソソームが含有されているかどうかを調査するため、試料を前処理後、HAS法で精製を行った。その後、NanoSightによる粒度分布解析を行い(図6)、ELISAによるエクソソームマーカー(CD63)測定およびエクソソームの細胞への取り込みを撮影した(図7)。その結果、エクソソームの粒度(50~200 nm)に十分量の粒子数が確認されたこと(図6)、CD63が陽性であること、またエクソソームの細胞取り込み像も確認できたこと(図7)から、試料にエクソソームが含有されていることが確認できた。

図6.HAS法で精製したエクソソームの粒度分布

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図6.HAS法で精製したエクソソームの粒度分布


図7.細胞にエクソソームが取り込まれている様子

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図7.細胞にエクソソームが取り込まれている様子

エクソソーム内包タンパク質を染色したエクソソームをヒト表皮細胞に添加し、蛍光顕微鏡で撮影した。

赤色:エクソソーム、緑色:細胞質、青色:細胞核


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ご注文方法

ご依頼の内容に応じてお見積もりします。詳細は、当社受託・特注品担当(下記参照)までお問い合せ下さい。

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