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組換え抗ピューロマイシンモノクローナル抗体 Anti-Puromycin [3RH11] (Absolute antibody社)

掲載日情報:2023/06/07 現在Webページ番号:70840

ピューロマイシン(Puromycin)に対する組換えモノクローナル抗体です。ハイブリドーマ3RH11の可変領域(特異性)を備えた組換えプラットフォームを使用し製造しています。翻訳中に早期の鎖終結を引き起こすStreptomyces alboniger細菌由来のピューロマイシン(アミノヌクレオシド系抗生物質)を認識します。

図1. ウエスタンブロットによるハイブリドーマ由来マウスIgG1抗体と組換えマウスIgG1抗体の比較

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図1. ウエスタンブロットによるハイブリドーマ由来マウスIgG1抗体と組換えマウスIgG1抗体の比較(マウス後肢を用いた実験)

  • A:ハイブリドーマ由来抗ピューロマイシンモノクローナル抗体(Mouse IgG1、#Ab02366-1.1)
  • B:組換え抗ピューロマイシン抗体(Mouse IgG1
  • 各Lane 1:マウス骨格筋、後肢(対照)
  • 各Lane 2:マウス骨格筋、後肢(ギブスで3日間固定)
  • 各Lane 3:HEK393T細胞、完全培地でインキュベートした細胞
  • 各Lane 4:HEK393T細胞、グルコースと血清を含まない培地で2時間インキュベートした細胞
  • 各Lane 5:HEK393T細胞、グルコースまたは血清を含まない培地1.5 時間インキュベートし、その後30分間グルコースと血清を添加して培養した細胞
  • 希釈率:1:1,000
  • 露出時間:40秒

対照の後肢と比較すると、固定した後肢ではピューロマイシンの取り込みの低下が見られた。また、完全培地中の細胞と比較し、グルコースと血清を含まない培地で培養した細胞でもピューロマイシンの取り込みの低下が見られた。

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組換え抗ピューロマイシン抗体の開発の背景

2013年にペンシルバニア州立医科大学のScot R. Kinball研究室は、全タンパク質合成の放射性標識に依存しない測定を可能にする抗ピューロマイシン抗体を開発、生成しました。それ以来、世界中の科学者がこの抗体を使用してさまざまな生理学的機能や、がんやアルツハイマー病などの症状を研究してきました。

この抗体は、ハイブリドーマ細胞株からマウスIgG1で開発、生成されました。Asolute Antibody社は、この有用な研究ツールの長期に渡る使用を可能にするために抗体を配列を決定し、組換え技術により生産しました。また、新たな実験の可能性を開くため、動物種とアイソタイプを追加しました。マウスおよびウサギのフォーマットの組換えピューロマイシン抗体の検証を行ったところ、広く使用されているハイブリドーマ由来の抗体と同様に機能し、また同時にバックグラウンドシグナルを低減することが示されました(図2参照)。

図2. ウエスタンブロットによるハイブリドーマ由来マウスIgG1抗体と組換えマウスIgG1・ウサギIgG抗体の比較

ウサギ抗体はマウス抗体と同様の有効性を示した。また、2種類のマウス抗体を使った条件では、抗マウス二次抗体との干渉で生じたと考えられる非特異的バンドが見られたが、ウサギ抗体では抑制されていた。矢印(←)は、マウスIgGの重鎖と軽鎖を示しており、ウサギ抗体のブロットにおいてはこれらはまったく見られなかった。

図2. ウエスタンブロットによるハイブリドーマ由来マウスIgG1抗体と組換えマウスIgG1・ウサギIgG抗体の比較

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各種抗体を用いたウエスタンブロット結果

  • A:ハイブリドーマ由来抗ピューロマイシンモノクローナル抗体(Mouse IgG1
  • B:組換え抗ピューロマイシン抗体(Mouse IgG1
  • C:組換え抗ピューロマイシン抗体(Rabbit IgG)

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特長

  • 組換え抗体のため、ハイブリドーマ細胞の損失のリスクがなく、安定的に抗体生産を行えます。
  • 動物種とアイソタイプを変えることができるため、ウエスタンブロットで二次抗体に抗マウスIgG抗体を用いた場合に生じる内因性マウスIgG抗体によるバックグラウンドを回避することができます(図2)。
  • 染色時におけるFcレセプターに起因する非特異的バックグラウンドをさらに低減するFc欠損変異を含むヒトIgG1抗体(Fc Silent抗体)もあります。
  • 抗原:ピューロマイシン
  • クローン名:3RH11
  • 免疫原:元となったマウスIgG1抗体は、ピューロマイシン塩酸塩を免疫原として作製しました。
  • 適用:ELISA、Functional assay、IF、WB
  • 種特異性:なし
  • 標識:非標識*1

*1 ウエスタンブロットや免疫蛍光染色において二次抗体が不要となる蛍光タグやビオチンタグなどの標識抗体作製も対応可能です。詳細は、当社受託・特注品担当(☞ jutaku@funakoshi.co.jp)までお問い合わせ下さい。


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製品ラインナップ

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免疫動物 抗体の種類 精製法
(アフィニティー精製)
包装 商品コード
Mouse IgG1 Protein A 200 μg Ab02366-1.1
1 mg Ab02366-1.1-BT
IgM,κ 組換え体レクチン 50 μg Ab02366-21.0
500 μg Ab02366-21.0-BT
1 mg Ab02366-21.0-BS
Fab fragment, His-Tagged,κ 固定化金属 100 μg Ab02366-1.29
500 μg Ab02366-1.29-BT
Human IgG1 Protein A 200 μg Ab02366-10.0
1 mg Ab02366-10.0-BT
IgG1, Fc Silent,κ*2 Protein A 200 μg Ab02366-10.3
1 mg Ab02366-10.3-BT
Rabbit IgG1 Protein A 200 μg Ab02366-23.0
1 mg Ab02366-23.0-BT

*2 抗体のFc領域に点変異を導入し、Fcγレセプターへ非特異的に結合しないように改変してあります。Absolute Antibody社のFc Silent,κ製品の詳細についてはこちらをご覧下さい



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価格

Anti-puromycin [3RH11], Mouse IgG1

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Anti-puromycin [3RH11], Mouse Fab fragment, His-Tagged,κ

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Anti-puromycin [3RH11], Human IgG1

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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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