耐性遺伝子を含まない環状テンプレート GenCircle dsDNA（dsDNA）合成サービス
掲載日情報：2023/11/16 現在Webページ番号：70839
GenCircle dsDNAは、GenScript社が開発した薬剤耐性マーカーのない小さな環状二本鎖DNA合成サービスです。ベクターのバックボーンは薬剤耐性遺伝子や細菌由来の配列を含まず、わずか400 bp超のサイズで、宿主の外では複製されません。GenScript社の20年以上におよぶ高い遺伝子合成技術を用いることで、目的の遺伝子を含むGenCircle dsDNAを合成することができ、遺伝子および細胞療法研究の安全性と効率を向上させます。
GenCircle dsDNAのベクターマップのイメージ
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サービス概要
目的の遺伝子を導入するために通常使用されるプラスミドベクターのバックボーンは、一般的に1.5 kb以上であり、薬剤耐性遺伝子が含まれています。耐性遺伝子の存在によって、細菌のスクリーニングや培養は容易になる一方で、遺伝子・細胞治療の分野では、耐性遺伝子の残留物が体内に持ち込まれるリスクがあり、安全性上の問題が生じる可能性があります。
ベクターのバックボーンを小さくすることは、発現をより安定させ、トランスフェクション効率を高くすることができます。その結果、RNA 転写とタンパク質発現のレベルが向上します。
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アプリケーション
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| 細胞治療 | 遺伝子治療 | DNAワクチン | 細胞株／モデル動物の構築 |
トランスポゾン／トランスポザーゼベクターCRISPRノックインテンプレート |
AAV／レンチウイルスパッケージングプラスミド、非ウイルスベクターmRNA調製テンプレート |
抗原発現ベクター |
トランスポゾン／トランスポザーゼベクターCRISPRノックインテンプレート |
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特長
1. 安全！薬剤耐性マーカーなし
- 耐性遺伝子が挿入されていないので、宿主外での増幅がありません。
2. 簡単！免疫原性／毒性が低い
- CpGアイランドなどの細菌由来の配列が除去されており、発現がより安定します。
3. 小さい！ わずか400 bp超のバックボーン
- 同等量のプラスミドと比較してより高い遺伝子発現が得られます。
- より高いトランスフェクション効率を実現します。
4. 効率的！ KI／ウイルスパッケージング／GOI発現効率の向上
- ノックイン効率が最大30%向上します。
- ウイルス力価が最大3倍向上します。
- 転写レベルが最大4倍、タンパク質発現レベルは最大20%増加します。
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サービスの詳細
以下の2種類の方法で対応可能です。
- GenScript社で遺伝子合成を行い、その後GenCircle dsDNAを合成する。
- GOIを含むプラスミドを提供いただき、そこからdsDNAを合成する。
| サービス名 | GOIの長さ | 収量 | 納品形態 | 納期 | アプリケーション |
|---|---|---|---|---|---|
| GenCircle dsDNA | 1～50 kb | 100 μg～g | 凍結粉末もしくは溶液 （バッファーはオプション） |
2週間～ |
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※ 上表以外のGOIの長さ、および収量をご希望の場合には、☞ 当社受託・特注品担当までお問い合わせ下さい。
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QC 品質管理
| QC項目 | 管理基準 |
|---|---|
| サンガーシークエンス | シークエンスが100%正確である |
| 制限酵素処理 | 消化後に電気泳動を行い、パターンが正確であること |
| 分光光度計 | 収量の確認 |
| NanodropによるUV値の測定 | A260/280 = 1.8～2.0 |
| 電気泳動 | RNAやゲノムDNAが電気泳動後に確認されないこと |
| 均質性 | ≧90%がスーパーコイルであること |
| TALエンドトキシン定量 | <0.01 EU/μg |
| バイオバーデンテスト | アガープレートで48時間経過後、何も生育しないこと |
品質分析例
GenCircle dsDNAサービスは、さまざまな長さのターゲット遺伝子を対象として、これまでに世界で多くの受注実績があります。
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＊ AAV transfer plasmid with ITRs、ITR stable
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動画
A Scalable Miniature Circular GenCircle dsDNA Production System for Gene and Cell Therapy
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適用例
ノックインテンプレートとしてGenCircle dsDNAを利用
結果：従来のプラスミドを用いた方法と比較して、遺伝子ノックイン効率が最大30%向上した。
CRISPRノックイン（2.5 kbの挿入）
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 測定方法 |
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トランスポゾン遺伝子ノックイン（4.8 kbフラグメント）
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GenCircle dsDNAをウイルスパッケージングに利用
結果：従来のプラスミドと比較して、ウイルスの力価が最大3倍、ITR配列がより安定し、耐性遺伝子の使用も避けられた。
レンチウィルスパッケージング
AAVパッケージング
GenCircle dsDNAをターゲット遺伝子の転写に利用
結果：従来のプラスミドと比較して、転写産物レベルが最大4倍増加し、免疫応答が低下した。
GenCircle dsDNAを目的遺伝子発現に利用
結果：従来のプラスミドと比較して、タンパク質発現量が最大39%増加した。
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ご注文方法／価格／納期
※ 追加のQCやその他のカスタマイズについてはご相談下さい。詳細は、下記当社受託・特注品担当までお問い合せ下さい。
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