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膜タンパク質をLC-MS/MSで定量するための、試料調製キットと内部標準ペプチド MS2Plex(R) Assay Kit

掲載日情報:2015/09/01 現在Webページ番号:7079

LC-MS/MS用の試料調製キットおよび、安定同位体(13C、15N)で標識した内部標準ペプチドです。 膜タンパク質の定量に特化しているため、薬物動態の研究などに有用です。

本製品は、東北大学(上家 潤一 博士・大槻 純男 博士・寺崎 哲也 博士)の特許を基に、株式会社Proteomedix Frontiersからライセンスを受け、Bertin Pharma社が製造したものです。
東北大学 寺崎 哲也 博士の独占インタビューはこちら。

膜タンパク質をLC-MS/MSで定量するための、試料調製キットと内部標準ペプチド MS2Plex Assay Kit

MS2Plex(R) Assay Kitラインナップ

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特長

  • キットには、タンパク質還元・アルキル化試薬と内部標準ペプチドが含まれます。
  • 操作は簡便で、可溶化条件などの検討は不要です。また、LC-MS/MSを行う際の初期条件が提供されているため、測定条件設定が簡単です。
  • 特定の膜タンパク質を定量するキットと、同時に複数の膜タンパク質を定量するキットをラインナップしています。
  • 本手法は、薬物動態の研究などに有用であり、また多くの文献で使用実績もあります。
  • 本手法を用いて、34種類のタンパク質を同時に定量した例もあります(キットで測定できるタンパク質については下記参照)。
  • キットには定量測定24回分の試薬が含まれています。
  • 測定試料:培養細胞、組織など

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LC-MS/MS解析の概略

  1. 細胞・組織試料から抽出したタンパク質を、変性・還元・アルキル化・トリプシン処理する(MS2Plex Assay Kitを使用)。
  2. 内部標準ペプチド(MS2Plex Assay Kitを使用)を加え、三連四重極型LC/MS/MSのMRM(多重反応モニタリング)モードあるいはSRM(選択反応モニタリング)モードで検出を行う。
膜タンパク質をLC-MS/MSで定量するための、試料調製キットと内部標準ペプチド MS2Plex Assay Kit

標的ペプチドの選定とキャリブレーション

膜タンパク質をLC-MS/MSで定量するための、試料調製キットと内部標準ペプチド MS2Plex Assay Kit

LC-MS/MSによるMRM解析

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参考文献

総説
Ohtsuki, S., et al., J. Pharm. Sci., 100 (9), 3547~3559 (2011).
方法論
Kamiie, J., et al., Pharm. Res., 25, 1469~1483 (2008).
Uchida Y., et al., Fluids Barriers CNS, 10: 21 (2013).
Sakamoto, A., et al., J. Pharm. Sci., 100 (9), 4037~4043 (2011).
膜トランスポーターの定量
Ito, K., et al., J. Pharm. Sci., 100 (9), 3939~3950 (2011).
Uchida, Y., et al., J. Neurochem., 117 (2), 333~345 (2011).
Shawahna, R., et al., Mol. Pharm., 8 (4), 1332~1341 (2011).
Hoshi Y., et al., J Pharm Sci., 102 (9): 3343~3355 (2013).
ヒト肝臓および肝細胞の特性研究
Kawakami, H., et al., J. Pharm. Sci., 100 (1), 341~352 (2011).
Ohtsuki, S., et al., Drug Metab. Dispos., 40 (1), 83~92 (2012).
Schaefer, O., et al., Drug Metab. Dispos., 40 (1), 93~103 (2012).
薬物の脳移行性予測研究
Uchida, Y., et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 339 (2), 579~588 (2011).
薬剤感受性決定因子の解析研究
Ohmine, K., et al., Pharm. Res., 29 (7), 2006~2016 (2012).
Obuchi, W., et al., Mol. Pharmacol., 83(2):490~500 (2013).
モデル動物の評価
Kazuki, Y., et al., Hum. Mol. Genet., 22(3):578-592 (2013).
Agarwal S., et al., Drug Metab. Dispos., 40(6):1164-1169 (2012).
バイオマーカー研究
Yoshikawa, A., et al., Neuropath. Appl. Neurobiol., 38, 105~110 (2012).
Yoneyama T., et al., J Proteome Res. 12(2):753-762 (2013).

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解析例

膜タンパク質をLC-MS/MSで定量するための、試料調製キットと内部標準ペプチド MS2Plex Assay Kit

マウス肝臓細胞膜画分由来BcrpペプチドのMRM解析例
マウス肝臓由来細胞膜画分をトリプシン処理したペプチド試料に、安定同位体標識内部標準ペプチドを添加し、MRM解析を行った。
A-C:未標識Bcrpペプチド(SSLLDVLAAR)のMRMクロマトグラム(3 MRM channels)
D-F:標識Bcrpペプチド(SSLLDVL(13C6, 15N)AAR)のMRMクロマトグラム(3 MRM channels)
45.7分時点でBcrpペプチドのピーク(赤線部分)が検出された。
MRMのm/z値(Q1/Q3)は、それぞれ下記の通り。
A:522.8/757.5
B:522.8/644.4
C:522.8/529.3
D:526.3/764.5
E:526.3/651.4
F:526.3/536.3

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キット内容

  • Sample preparation solutions
  • Protein digestion reagents
  • Internal control reagents
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  • Quality controls low / medium / high

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ABC Transporter測定用

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DMPK I (OCT2, MDR1, OAT1, OAT3, PEPT1, MCT1, MCT2) (human) MS2Plex Assay Kit (7proteins)

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  • 商品コード:T05030
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DMPK J (OATP1B3, OCT1, MDR1, BSEP, NTCP, BCRP, MRP2, OATP1B1) (human) MS2Plex Assay Kit (7proteins)

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  • 商品コード:T05031
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RTK A (FGFR3, IGFR, PDGFR, RET, ATPase) (human) MS2Plex assay kit

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  • 商品コード:T05047
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RTK B (HER1, HER2, HER3, CD33, CD37, ATPase) (human) MS2Plex assay kit

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  • 商品コード:T05048
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