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動物由来成分不含のヒト多能性幹細胞培養用完全培地 ExCellerate iPSC Expansion Medium, Animal Component-Free

掲載日情報:2024/04/24 現在Webページ番号:70715

胚性幹細胞および人工多能性幹細胞(iPSC)を含む未分化ヒト多能性幹細胞株(hiPSC)のin vitroにおけるフィーダーフリー培養に最適な完全培地です。動物由来成分不含で、一貫性および再現性に優れた増殖および未分化維持を実現できます。一般グレード培地のほかに、前臨床研究目的用のGMPグレード培地もあります。

hiPSCの培養における細胞増殖倍の比較

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本製品とA社製品培地で培養したhiPSCの細胞増殖率の比較

6 wellプレートにRecombinant Human Vitronectin(#2308-VN)またはCultrex UltiMatrix(#BME001)をコーティングし、 50,000 cells/wellで細胞を播種し、本製品およびA社培地によりhiPSCを培養した。3日間後、コロニーを単一細胞まで分散させて細胞増殖率を求め、平均値±SEMとしてグラフに示した。どちらの基質を用いたhiPSC培養においても、A社培地に比べて本製品は優れた細胞増殖率を示した。


特長

  • 培養に必要な成分がすべて含まれているReady-to-useの培地のため、成長因子の添加は必要ありません。
  • 動物成分不含のため、トレーサビリティーに優れています。
  • 未分化iPSCの増殖および未分化維持に最適です。
  • 再現性に優れています。
  • 長期培養における細胞生存率、遺伝子型および分化能を維持します。
  • Cultrex UltiMatrix(#BME001)、Cultrex ReadyBME(#3434-050-RTU)、Recombinant Human Vitronectin(#2308-VN)などのさまざまなマトリックスや細胞株に適用できます。
  • 臨床応用目的に最適なGMPグレード(#CCM036-GMP)もご選択いただけます。
  • 浸透圧:280~350

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製品ラインナップ

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品名 ExCellerate iPSC Expansion Medium, Animal Component-Free ExCellerate iPSC Expansion Medium, Animal-Free, GMP
GMP準拠
サンプル品  ☞ サンプル品 
包装 500 ml
商品コード CCM036 CCM036-GMP

ExCellerate iPSC Expansion Medium, Animal Component-Free(#CCM036)のサンプル品をご希望に応じてご提供いたします。詳細については、当社テクニカルサポート部(試薬担当)までお問い合わせ下さい。


ExCellerate iPSC Expansion Medium, Animal-Free, GMP

GMPに準拠した製造施設において、動物やヒト由来の原料を一切含まない厳密な管理下で製造されている前臨床研究またはex vivoでの使用を目的としたグレードです。in vivoでの使用およびヒトへの投与などの臨床目的では使用できません。

ExCellerate iPSC Expansion Medium, Animal-Free, GMPの製品外観

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ExCellerate iPSC Expansion Medium, Animal-Free, GMPの製品外観


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使用例

  ☞ 細胞増殖および細胞生存率の検証    ☞ さまざまなhiPSCの細胞形態の観察    ☞ 幹細胞マーカーの発現の検証    ☞ 各細胞への分化能の検証    ☞ ロット間差の検証    ☞ 長期培養の核型検証  

細胞増殖および細胞生存率の検証

本製品を用いて、Cultrex UltiMatrix(#BME001)またはRecombinant Human Vitronectin(#2308-VN)上でiPSCを培養し累積細胞増殖(図A)および細胞生存率(図B)を測定した。本製品で培養したhiPSCは、細胞株やマトリックスの違いの影響を受けずに一貫した性能を示した。

累積増殖倍率

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累積増殖倍率における細胞株間差は極めて少ないことが示された。

細胞生存率

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培養4日後において約90%以上の生存率が示された。グラフは、平均値±標準偏差で表示した。

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さまざまなhiPSCの細胞形態の観察

本製品で培養したさまざまなhiPSCは、細胞株間の影響なく一貫して典型的なiPSCコロニー形態を示した。
Cultrex UltiMatrix(#BME001)を用いて培養した各hiPSCは、どれも丸いコロニー形態、高密度な細胞および明瞭でなめらかなコロニーのエッジなどの特徴が観察された。

hiPSC#1 hiPSC#2 hiPSC#3
hiPSC#1 hiPSC#2 hiPSC#3
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幹細胞マーカー発現の検証

本製品を用いてhiPSCの長期培養を行った。

免疫組織染色

hiPSCの免疫組織染色1

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  • 赤色:OCT3/4(#AF1759);未分化幹細胞マーカー
  • 緑色:F-actin
  • 青色:DAPI(#5748
hiPSCの免疫組織染色2

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  • 赤色:Tra-1-60(#MAB4770);未分化幹細胞マーカー
  • 緑色:F-actin
  • 青色:DAPI(#5748

フローサイトメトリーによる幹細胞未分化マーカーの発現解析

hiPSCは、未分化幹細胞マーカーであるOCT3/4、SOX2、SSEA-4の高発現が見られたが、SSEA-1の発現は見られなかった。OCT3/4、SOX2、SSEA-4の発現は、4細胞株ともに45継代を経ても97%以上であった(下図参照)。

フローサイトメトリーによるOCT3発現解析 フローサイトメトリーによるSOX2発現解析 フローサイトメトリーによるSSEA-4発現解析 フローサイトメトリーによるSSEA-1発現解析
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フローサイトメトリーによる幹細胞未分化マーカーの発現解析

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各細胞への分化能の検証

Cultrex UltiMatrix(#BME001)を用いて、本製品で培養したhiPSCをHuman Pluripotent Stem Cell Functional Identification Kit(#SC027B)で分化させた。多能性を維持し、かつ3種類の胚葉の細胞に分化することを確認した。

心筋細胞(中胚葉)

心筋細胞(中胚葉、#SC032B使用)

肝細胞(内胚葉)

肝細胞(内胚葉、#SC033使用)

ニューロン (外胚葉)

ニューロン(外胚葉、#SC035使用)

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ロット間差の検証

Cultrex UltiMatrix(#BME001)を用い、異なる2ロットの本製品により培養したhiPSCについて、それぞれの未分化幹細胞マーカーの発現レベルを検証した。Human/Mouse Pluripotent Stem Cell Multi-Color Flow Cytometry Kit(#FMC001)を用いてフローサイトメトリーを実施し、未分化幹細胞マーカーであるOCT-3/4、SOX2、SSEA-4はそれぞれのロットのhiPSCにおいてともに高発現が見られたが、SSEA-1の発現は見られなかった。

本製品で培養したhiPSCのロット間差の検証試験

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長期培養の核型検証

Cultrex UltiMatrix(#BME001)を用い、本製品により培養したhiPSCについて、長期培養(30継代以上)の核型を検査した結果、正常な核型であることがを示された。

継代後の核型の検証

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価格

[在庫・価格 :2024年05月06日 16時35分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。

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ExCellerate iPSC Expansion Medium

文献数: 0

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法規制等
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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