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Cyclic tetra-AMP定量キット Cyclic tetra-AMP ELISA Kit

掲載日情報:2025/11/27 現在Webページ番号:70440

細菌細胞ライセート中のCyclic tetra-AMPを特異的かつ高感度に定量測定する競合法のELISAキットです。タイプⅢ CRISPR-Casシステムによる抗ウイルス免疫の研究に有用です。


Cyclic tetra-AMPとは

Cyclic tetra-AMP(Cyclic tetra-adenosine monophosphate、別名:サイクリックテトラアデニル酸、cA4)は、細菌および古細菌に見られるセカンドメッセンジャーであり、タイプⅢ CRISPR-Casシステムによる抗ウイルス免疫に関与しています1,2。標的核酸の結合後、Cyclic tetra-AMPは、Cas10のPalmドメインによってATPから合成されます。合成されたCyclic tetra-AMPは、CRISPR関連ロスマンフォールド(CARF)ドメインを含むタンパク質に結合し、リボヌクレアーゼ活性およびDNase活性を有するタイプⅢ-A(Csm)またはタイプⅢ-B(Csr)エフェクター複合体を活性化します1~3。また、CARFドメインの代わりにSMODS関連のさまざまなエフェクタードメイン(SAVED)と融合したプロテアーゼであるCalpLにも結合して転写制御に関与します4。Cyclic tetra-AMPは最終的に、宿主およびウイルスのリングヌクレアーゼによって分解され、細胞の休眠と死を防いだり、防御システムを中和するといった作用が報告されています2,5,6。さらに、タイプⅢ CRISPR-Casアクセサリータンパク質であるCard1(Cyclic-oligoadenylate-activated single-stranded ribonuclease and single-stranded deoxyribonuclease 1)のCyclic tetra-AMP結合ポケットの変異は、dsDNAファージに感染したS. aureusにおける免疫発達を阻害します3

Cayman Chemical社のCyclic tetra-AMP ELISAキットは、細菌細胞ライセート中のCyclic tetra-AMP濃度を定量するための、簡便かつ信頼性の高い方法を提供します。Cyclic tetra-AMP産生細菌種の同定、タイプⅢ CRISPR-Casシステムの誘導・制御・抑制に関する研究、あるいは新規の宿主由来またはウイルス由来リングヌクレアーゼの同定および特性解析に有用です。これにより、細菌および古細菌におけるタイプⅢ CRISPR-Casシステムを介した抗ウイルス免疫と、これらのシステムに対するウイルス側の対抗策について理解を深めるのに役立ちます。


参考文献

  1. Kazlauskiene, M., et al., Science, 357(6351), 605-609(2017). [PMID:28663439]
  2. Athukoralage, J. S., et al., Nature, 562(7726), 277-280(2018). [PMID:30232454]
  3. Rostøl, J. T., et al., Nature, 590(7847), 624-629(2021). [PMID:33461211]
  4. Rouillon, C., et al., Nature, 614(7946), 168-174(2023). [PMID:36423657]
  5. Samolygo, A., et al., Nucleic Acids Res., 48(11), 6149-6156(2020). [PMID:32347937]
  6. Athukoralage, J. S., et al., Nature, 577(7791), 572-575(2020). [PMID:31942067]

タイプⅢ CRISPR-Casシステム

タイプⅢ CRISPR-Casシステムにおける環状テトラAMPシグナル経路

図1. タイプⅢ CRISPR-Casシステムでは、Casタンパク質とCRISPR RNA(crRNA)ガイドからなるタイプⅢエフェクター複合体が標的RNAを検出し、Cas10サブユニットによってATPから環状テトラAMPおよびその他の環状オリゴアデニル酸の産生を誘導します。産生された環状テトラAMPは、Csm6およびCsx1リボヌクレアーゼなどのエフェクターに結合して活性化し、抗ウイルス免疫を付与して宿主の休眠状態を誘導します。その後、宿主のリングヌクレアーゼが環状テトラAMPを直鎖状オリゴアデニル酸に分解することで抗ウイルス応答を抑制し、休眠状態からの回復を可能にします。


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特長

  • 測定試料:細菌細胞ライセート
  • 測定範囲:0.080~500 nM
  • 感度:0.853 nM
  • 測定方法:競合ELISA
  • 検出方法:比色
  • 検出の種別:定量
  • 測定波長:450 nm
  • フォーマット:96 wellプレート

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検量線の例

Cyclic tetra-AMP ELISA Kitを用いた検量線例

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交差性

物質名 交差性
Cyclic tetra-AMP 100%
Cyclic hexa-AMP 0.562%
AMP <0.01%
ADP <0.01%
ATP <0.01%
Adenine <0.01%
Adenosine <0.01%
cAMP <0.01%
Cyclic di-AMP <0.01%
Cyclic di-GMP <0.01%
2’3’-cAMP <0.01%
2’3’-cGMP <0.01%
2’2’-cGAMP <0.01%
3’3’-cGAMP <0.01%
物質名 交差性
3’2’-cGAMP <0.01%
2’3’-cGAMP <0.01%
pApA <0.01%
pG(2’5’)pA <0.01%
pApG <0.01%
c[A(3’5’)pA(3’5’)pG(3’5’)p] (cAAG) <0.01%
Cyclic ApUp <0.01%
cGMP <0.01%
pGpG <0.01%
GDP <0.01%
Guanosine <0.01%
GTP <0.01%
GMP <0.01%

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キット内容

  • Cyclic tetra-AMP-HRP tracer
  • Cyclic tetra-AMP ELISA antiserum
  • Cyclic tetra-AMP ELISA standard
  • Mouse anti-rabbit IgG-coated plate
  • Immunoassay buffer C
  • Wash buffer
  • Polysorbate 20
  • TMB substrate solution
  • HRP stop solution
  • ELISA tracer dye
  • ELISA antiserum dye
  • 96-Well cover sheet

測定にはマイクロプレートリーダーが別途必要です。


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価格

[在庫・価格 :2026年02月01日 00時00分現在]

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Cyclic tetra-AMP ELISA Kit (Strip Plate)
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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