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脱ユビキチン化酵素に耐性を有するポリユビキチン鎖 DUB Resistant Ubiquitin Chain

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:7040

脱ユビキチン化酵素(DUB)による加水分解を受けない(Non-Hydrolyzable:NH)、フリーのポリユビキチン鎖です。フリーのユビキチン鎖は、細胞内で存在を確認することが通常は困難ですが、NHポリユビキチン鎖は細胞内で安定に存在できるため、細胞ライセートを用いたユビキチンアッセイで有用です。

特長

  • イソペプチド結合で連結しており、C末端が標的タンパク質にアンカーされていないフリーなユビキチン鎖です。
  • 脱ユビキチン化酵素による加水分解を受けません。
  • 細胞内に存在するフリーのユビキチン鎖の機能解析に最適です。
  • 結合アッセイに便利な、アガロースビーズに結合させたフォーマットのユビキチン鎖もあります。
  • 様々な結合様式と連結数のポリユビキチン鎖のラインナップがあり、目的のシグナル伝達経路に合わせた製品をお選びいただけます。

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生体内におけるフリーのポリユビキチン鎖の機能の一例

細胞にウイルスが感染すると、細胞内のRIG-Iが2段階のプロセスを経て活性化されます。まず、ウイルス由来RNAがRIG-Iのヘリカーゼドメインに結合します。次にRIG-IのCARDドメインが、フリーのK63結合型ポリユビキチン鎖と結合することで、RIG-Iが活性化します。このプロセスにより活性化したRIG-Iは、ミトコンドリア表面に存在するMAVSタンパク質と結合し、MAVS依存的なTBK1やIKKεキナーゼの活性化や、IRF3のリン酸化およびダイマー化を誘導します。リン酸化されたIRF3ダイマーは核内へ移行すると、インターフェロンβといった抗ウイルス性遺伝子の発現を誘導します。

ポリユビキチン鎖の機能経路イメージ


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使用例

脱ユビキチン化酵素による加水分解比較画像

野生型テトラユビキチン(WT)と脱ユビキチン化酵素に耐性を有するテトラユビキチン(Non-Hydrolyzable:NH)を、それぞれ脱ユビキチン化酵素(Ubiquitin Specific Protease:USP)とインキュベートした後、SDS-PAGEを行い、ゲルをクーマシー染色した。
野生型テトラユビキチンは、脱ユビキチン化酵素による加水分解を受け、モノマーのユビキチンが生成された。
NHテトラユビキチンは、脱ユビキチン化酵素による加水分解を受けず、モノマーのユビキチンが生成されていない。

テトラユビキチンとhplic2のUBAドメインを用いた蛍光偏光アッセイ

テトラユビキチンとhplic2のUBAドメインを用いて、蛍光偏光アッセイを行った。NHテトラユビキチンは、野生型テトラユビキチンと類似性を示すことが分かる。

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K48結合型NHポリユビキチン鎖

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K63結合型NHポリユビキチン鎖

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