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mRNAを簡便、高効率かつ高収量で調製するキット mRNA Production Kitシリーズ(OZ Biosciences社)

掲載日情報:2024/05/22 現在Webページ番号:70229

mRNAを簡便、高効率かつ高収量で調製するための、in vitro翻訳、mRNAの5'キャッピングおよび3'末端にPoly(A)を付加の各ステップ用の3種類のキットをご紹介します。

mRNA調製ワークフロー

In vitro transcription(IVT) Kit

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Capping Kit

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Poly(A) tailing Kit

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1. ☞ mRNA IVT(in vitro transcription)Kit 2. ☞ mRNA Capping Kit 3. ☞ mRNA Poly(A)Tailing Kit
T7ポリメラーゼを使用し、線状プラスミドDNAまたはPCRフラグメントのin vitro転写(IVT)を行うキット。 mRNAにin vitro酵素キャッピングを行うキット。mRNAの5' 末端にCap0またはCap1構造の追加が可能になり、安定性と翻訳性能が向上する。 テンプレートとは無関係に、キャッピングまたは非キャッピングRNAの3-ヒドロキシル末端にポリ(A)テールを酵素的に付加するキット。

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mRNA IVT(in vitro transcription)Kit(#IVT-K25)

T7ポリメラーゼを使用して、直鎖プラスミドDNAまたはPCR断片からin vitro転写によりmRNAを合成するキットです。

特長

  • 高収量でRNAの調製を行えます。
  • 修飾ヌクレオチドにも適応できる効率的なポリメラーゼが含まれています。
  • NTPsはそれぞれ別チューブで含まれており、修飾ヌクレオチドを用いる場合の最適化や交換を容易に行うことができます。
  • 調製できるRNAの総量:2.5 mg*/Kit(約100 μg/鋳型DNA 1 μg)
  • 本製品で調製したRNAは、in vitro翻訳、細胞へのトランスフェクション、RNA結合タンパク質の単離などのさまざまな実験用途に使用できます。
  • 使用回数:25 reactions

キットに含まれる鋳型DNAコントロール(1,038 nt)に基づくRNA 6.7 nmol(25 reactions)で算出した数値。実際の収量は、各鋳型DNA、配列、長さおよび純度に大きく依存します。
一般的に、鋳型DNAが短いほどRNA生成物の質量は小さくなり、モル数は高くなります。収量(約100 μg/鋳型DNA 1 μg)の期待値は、キットに含まれる鋳型DNAコントロール(1,038ヌクレオチド)と非修飾ヌクレオチドを用いた場合のものです。


キット内容

  • pDNA template control
  • T7 Enzyme mix
  • ATP
  • GTP
  • CTP
  • UTP
  • IVT buffer
  • DNase
  • Nuclease free water
  • Precipitation solution
  • Gel loading dye

mRNA IVT(<i>in vitro</i> transcription)Kit製品外観

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mRNA IVT(in vitro transcription)Kit製品外観

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mRNA Capping Kit(#Cap-K25)

mRNAの5'末端にCap0またはCap1を修飾するキットです。これにより、mRNAの安定性と翻訳効率を向上させることができます。

原理

Vaccinia virus Capping Enzymeは、vaccinia(ワクシニア)ウイルス由来のキャップ化酵素であり、mRNAの5'末端に7'メチルグアニル酸キャップの付加(Cap0)します。一方で、2' O-メチルトランスフェラーゼは、基質としてCap0-mRNAを使用し、メチル基供与体としてS-アデノシルメチオニン(SAM)を用いて1番目のヌクレオチドの2'OH部位をメチル化してCap1 mRNAを生成します。


特長

  • 優れたキャッピング効率が得られます。
  • 操作は容易で、反応は迅速です。

キット内容

  • Ribonuclease inhibitor
  • 2' O-methyltransferase
  • Vaccinia capping enzyme
  • Capping Buffer
  • GTP
  • SAM
  • Nuclease-free water

mRNA Capping Kit製品外観

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mRNA Poly(A)Tailing Kit(#PolyA-K25)

キャップ構造の有無にかかわらず、RNAの3'末端にポリ(A)テールを修飾するキットです。ポリ(A)テールの付加は、mRNAの翻訳、安定性、および核細胞質輸送を強化することが知られています。

特長

  • 酵素反応効率および再現性に優れています。
  • 操作は簡便で、反応が迅速です。
  • 反応時間・温度:45分/reaction(37℃)
  • 収量:約200 nucleotides/reaction

キット内容

  • Poly(A)polymerase
  • ATP
  • RNase inhibitor
  • Polyadenylation buffer
  • Nuclease-free water

mRNA Poly(A) Tailing Kit製品外観

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mRNA Poly(A) Tailing Kit製品外観


使用例

poly(A)付加前のRNAプロファイル

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poly(A)付加前のRNAプロファイル

poly(A)付加後のRNAプロファイル

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poly(A)付加後のRNAプロファイル

poly(A)付加後のRNAサイズは、poly(A)付加前に比べて約200 nt大きくなっていることが示された。

poly(A)付加mRNA(918 nt)のアガロースゲル電気泳動

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poly(A)付加mRNA(918 nt)のアガロースゲル電気泳動

  • Lane 1:SS RNA lader
  • Lane 2:Non polyadenylated 918 nt mRNA
  • Lane 3:100 μg mRNA, 8u of poly(A) polymerase, 45 min at 37℃
  • Lane 4:100 μg mRNA, 15u of poly(A) polymerase, 45 min at 37℃
  • Lane 5:100 μg mRNA, 30u of poly(A) polymerase, 45 min at 37℃
  • Lane 6:100 μg mRNA, 8u of poly(A) polymerase, 2 hours at 37℃
  • Lane 7:100 μg mRNA, 15u of poly(A) polymerase, 2 hours at 37℃
  • Lane 8:100 μg mRNA, 30u of poly(A) polymerase, 2 hours at 37℃

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価格

mRNA IVT(in vitro transcription)Kit

[在庫・価格 :2025年02月12日 13時15分現在]

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mRNA IVT (in vitro transcription) Kit (25 reactions)
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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mRNA Poly(A)Tailing Kit

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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