少量の神経組織／培養細胞からシナプトソームを単離するキット Minute Synaptosome Isolation Kit

• 使用例
• シナプトソーム（Synaptosome）の分離における問題点
• 特長
• 操作方法概略
• キット内容
• 価格

使用例

• Lane 1：全組織ライセート
• Lane 2：細胞質画分
• Lane 3：シナプトソーム画分

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シナプトソーム（Synaptosome）の分離における問題点

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特長

• ダウンス型ホモジナイザーや密度超遠心分離は必要ありません。
• バッファーは界面活性剤を含まず、シナプトソーム関連タンパク質は非変性状態で単離されます。
• 必要試料量：10～50 mg（組織）
  　　　　　　30～40×10⁶ cells（細胞）
• 操作時間：1時間

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操作方法概略

1. 脳組織試料の場合：約30 mg（10～50 mg）の新鮮または凍結組織をコレクションチューブ内にセットしたフィルターカートリッジに入れる。200μl Buffer Aを加える。次に、プラスチック製ロッド^*1を使用してフィルター表面に1～2分間組織をねじりながら押しつけて、組織を破砕する。
   培養細胞の場合：低速遠心分離（500～600×g、5分間）で30～40×10⁶cellsを回収する。PBS 1 mlで回収した細胞を1回洗浄する。上清を完全に除去し、Buffer A 500μl中にペレットを再懸濁する。細胞懸濁液を氷上で5分間インキュベートする。その後、すべての細胞懸濁液をコレクションチューブ内にセットしたフィルターカートリッジ中に移す。
2. フィルターカートリッジのフタをして数回反転させ、次に16,000×gで15～20秒間で遠心分離する（培養細胞の場合は、必要に応じて同一フィルターでろ過処理を行うころで、最終収量を増やすことができる）。
3. コレクションチューブからフィルターカートリッジを廃棄した後、10秒間激しくボルテックスし、ペレットを再懸濁する。次に1,500×gで5分間遠心分離する。ペレットには、核、大きな細胞破片、およびいくつかの破裂していない細胞が含まれている。上清を注意深く新しいチューブに移し、20～30秒間ボルテックスしてBuffer B 50μlと混合する。次に、13,000×gで15分間遠心分離し、上清（細胞質画分）を除去する。
4. 上下に繰り返しピペッティングしてペレットを0.5 mlをBuffer Cに再懸濁し、氷上で5分間インキュベートする。その後、10～20秒間激しくボルテックスし、2,000×gで5分間遠心分離する（ペレットには主に原形質膜と他の脂質が含まれる）。
5. 13,000×gで20分間遠心分離し、単離したシナプトソームを含むペレット^*2を回収する。

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キット内容

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価格

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